高效液相色谱法分离条件的选择

高效液相色谱法分离条件(tiáojiàn)的选择第六组共十页一、高效液相色谱中的速率(sùlǜ)理论二、分离条件的选择共十页一、高效液相色谱(sèpǔ)中的速率1、涡流扩散(kuòsàn)与气相色谱相同，涡流扩散项也是A=2λdp。一般为了降低涡流扩散的影响，HPLC中一般使用3～10μm的小颗粒固定相，为了填充均匀，减少不规则因子，常用球形固定相，而且要求粒度均匀。此外，HPLC色谱柱以均浆高压填充。2、纵向扩散

纵向扩散系数Ｂ=2γDm,而Dm与流动相的黏度（η）成反比，与温度成正比。在HPLC中，流动相是液体，其黏度比气体黏度大得多，而且常在室温下进行操作，因此组分在流动相中的扩散系数Dm比气相色谱的要小得多。一般HPLC的流速在最佳的流速，这时纵向扩散很小可以忽略。共十页3、传质阻抗（1）固定相传质阻抗:在化学键合相色谱法中，键合相多为单分子层，即厚度df可以忽略，因此固体相传质阻抗Cs可以忽略。（2）流动相传质阻抗：在HPLC中存在流动相传质阻抗Cm.因为在流路中心的流动相中组分分子还没来得及扩散进入流动相和固定相界面，就被流动相带走，因此总比靠近填颗粒与固定相达到(dádào)分配平衡的分子移行得快些，结果是峰展宽。（Cm=Wm×dp²/Dm）(3)静态流动相传质阻抗：HPLC中静态流动相传质阻抗系数Cm也与固定相颗粒dp的平方成正比，与分子在流动相中的扩散系数成反比。共十页4、固定相颗粒粒度对塔板高度的影响

由于A、Cm和Csm均随固定相颗粒粒度dp的变小而变小，而且实验(shíyàn)还表明固体相颗粒粒度越小，柱效受流动相线速度的影响也越小。所以根据速率理论，HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低黏度流动相，流速不宜快；③柱温适当。共十页二、分离(fēnlí)条件的选择（一）正相键合相色谱法的分离条件正相键合相色谱法一般以极性键合相为固定相，如氰基、氨基键合相等。分离含双键的化合物常用(chánɡyònɡ)氰基键合相，分离多基团化合物常用(chánɡyònɡ)氨基合相。

正相键合相色谱的流动相通常采用烷烃加量极性调节剂，极性调节剂常从Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ组（表18-3）中选（见课本390页），若还难以达到所需要的分离选择性，还可以使用三元或四元溶剂系统。共十页

（二）反相键合相色谱法的分离条件反相键合相色谱法中，常选用非极性键合相，非极性键合相可用于分离分子型化合物，也可以用于分离离子型或离子化的化合物。

在反相键合相色谱法中，流动相一般极性最强的水为基础溶剂，加入甲醇、乙氰等极性调节剂。极性调节剂的性质以及其与水的混合比例对混合溶质的保留值合分离选择性有显著影响。同时(tóngshí)调节流动相的离子强度也能改善分离效果。例如在流动相中加入0.1%~1%的出酸盐、磷酸盐等，可减弱固定表面相残余硅醇基的干扰作用，减少峰的拖尾，改善分离效果。共十页（三）反相离子对色谱法的分离条件

反相离子对色谱法要求尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的键合相，短链烷烃基键合相的稳定性较差而不宜采用。

在反相离子对色谱法中，影响试样组分的保留值合分离选择性的主要(zhǔyào)因素有：⑴离子对试剂的选择；⑵流动相pH的选择；⑶有机溶剂及其浓度的选择。共十页谢谢(xièxie)观看共十页内容(nèiróng)总结高效(ɡāoxiào)液相色谱法分离条件的选择。由于A、Cm和Csm均随固定相颗粒粒度dp的变小而变小，而且实验还表明固体相颗粒粒度越小，柱效受流动相线速度的影响也越小。所以根据速率理论，HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键