重庆市长寿区长寿中学2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题

重庆市长寿区长寿中学校20232024学年高二下学期4月期中生物试题学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．果酒、果醋、酸奶、泡菜的制作都离不开微生物的发酵作用，下列叙述正确的是（

）A．在敞开的变酸的果酒表面形成的“菌膜”是酵母菌大量繁殖形成的B．果醋发酵时，氧气和糖源都充足的情况下醋酸菌可将葡萄糖转化成醋酸并产生CO2C．果醋制作的温度高于果酒和酸奶制作的温度D．用带盖的泡菜坛制作泡菜过程中，盖边沿的水槽中一次性注满水即可2．汞污染对环境和人类危害极大，有些微生物对其具有抗性，可用于修复受汞污染的环境。某科研小组从土壤中分离纯化出一株高抗汞细菌，它具有对汞污染环境的生物修复的应用能力。培养基成分：氯化钠(10g/L)、酵母浸粉(5g/L)、蛋白胨(10g/L)、20mg/L的氯化汞溶液、琼脂，上述成分按一定比例配制。下列叙述中错误的是（）A．为了纯化并计数高抗汞细菌，常用平板划线法B．蛋白胨为高抗汞细菌提供的主要营养为碳源、氮源和维生素C．为了快速获得高抗汞细菌，应从重金属污染的土壤中分离纯化D．平板划线纯化培养时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线3．下列有关微生物培养的叙述，正确的是（

）A．微生物培养过程中需提供几种主要营养物质就可以满足所有微生物生长的要求B．微生物的接种技术包括斜面接种、穿刺接种等方法，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度C．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内的摇床上培养D．观察菌落时，应将培养皿盖拿掉后在显微镜下进行观察计数4．下图为酱油的制作流程，其中米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油所需的蛋白酶、脂肪酶等，该过程需要提供营养物质、通入空气。下列说法错误的是（

）A．米曲霉发酵过程中，大豆中蛋白质可为米曲霉的生长提供氮源B．米曲霉分泌的酶可将大分子有机物水解为小分子有机物C．发酵池发酵阶段应密封进行，酵母菌与米曲霉对氧气需求相同D．发酵池中两种主要微生物产生的酒精、乳酸可以抑制杂菌生长5．柠檬酸广泛应用于食品、医疗和化工领域，具有重要的商业价值。以玉米粉为原料，利用黑曲霉有氧发酵生产柠檬酸的基本流程如图所示。下列分析错误的是A．玉米清液可以为黑曲霉提供碳源和能源B．发酵前将黑曲霉孢子接种到种子培养基进行扩大培养C．发酵培养基和种子培养基灭菌后加入到发酵罐内发酵D．需严格控制发酵罐内的温度、溶解氧和pH等条件6．下图表示四倍体兰花叶片通过植物组织培养形成植株的过程，相关叙述正确的是（）A．②和③阶段会发生减数分裂B．①阶段和③阶段所用的培养基相同C．①阶段有细胞增殖但无细胞分化D．此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体7．高山红景天在清朝时期曾被康熙钦封为“仙赐草”，在我省仅分布于海林市等地区，为濒危物种，其植株中含有红景天苷（一种次生代谢产物）等物质，具有抗衰老、抗肿瘤等作用，研究人员拟利用植物细胞工程技术获得更多的红景天资源，下列有关叙述正确的是（

）A．外植体必须要经过灭菌处理后才可以进行接种培养B．可通过植物细胞培养提高单个细胞中红景天苷含量C．可切取一定大小的茎尖进行组织培养而获得脱毒苗D．可用PEG诱导高山红景天原生质体融合获得单倍体8．如图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述不正确的是（

）A．可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合B．两两融合的细胞不一定能在HAT培养液中生长C．体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体D．细胞膜的流动性是细胞融合的基础9．某同学在学习植物细胞工程的有关内容，你认为有几处是不正确的（）植物细胞工程技术手段植物组织培养，植物体细胞杂交特殊处理机械法去除细胞壁融合方法物理方法、化学方法典型应用人工种子、杂种植株培养液区别生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化A．1 B．2 C．3 D．410．杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点,被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示,相关叙述正确的是A．为了获得更多的卵母细胞,需用雌激素对雌性杜泊羊进行处理B．从卵巢中采集的卵母细胞可直接与获能的精子进行体外受精C．为避免代孕绵羊对植入胚胎产生排斥反应,应注射免疫抑制剂D．为了进一步扩大繁殖规模,可通过胚胎分割技术获得同卵双胎11．哺乳动物卵原细胞减数分裂形成成熟卵细胞的过程，需要在促性腺激素和精子的诱导下完成。下图为某哺乳动物卵子及早期胚胎的形成过程示意图(N表示染色体组)。据图分析，下列叙述正确的是（

）

A．细胞I到细胞Ⅱ、细胞Ⅱ到细胞Ⅳ的过程中染色体复制次数分别为1次、2次B．哺乳动物的卵细胞都要在输卵管内进一步成熟，并且到MⅡ期才具有受精能力C．体外受精时，采集到的精子和卵母细胞要分别在体外进行成熟培养和获能处理D．将囊胚阶段的早期胚胎移植到受体动物体内，需要对受体动物使用免疫抑制剂12．下图表示一项重要生物技术的关键步骤，X是获得外源基因并能够表达的细胞。下列有关说法错误的是（

）A．X是能合成胰岛素的细菌细胞B．质粒应具有一个或多个限制酶切点C．基因与载体的重组只需要DNA连接酶D．该细菌的性状被定向改造13．某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，获得此质粒的农杆菌表现出对两种抗生素的抗性。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程，如下图所示。请据图分析，下列表述错误的是（

）A．在构建重组质粒时，选用HindⅢ和SalI两种酶切割目的基因的两端及质粒可防止目的基因和质粒的自我环化B．用分别含有氨苄青霉素和四环素的培养基筛选农杆菌时，发现含有目的基因的农杆菌不能在含四环素的培养基上生长，说明抗四环素基因未起到标记基因的作用C．采用农杆菌转化法是因为农杆菌感染烟草细胞时，其内的重组Ti质粒上的TDNA能将目的基因插入到烟草细胞的染色体DNA上D．利用植物组织培养技术培育转基因抗盐烟草植株，依据的原理是高度分化的植物细胞具有发育成完整植株的能力14．下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是（

）A．分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有TDNA序列B．该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上C．若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组D．获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异15．我国科学家利用基因编辑技术敲除杂交水稻中的4个基因,获得了可以发生无融合生殖(不发生雌雄配子的细胞核融合而产生种子的生殖)的水稻材料，得到了杂交稻的克隆种子，实现了杂合基因型的固定。该无融合生殖的原理过程如图所示，下列相关分析错误的是（

）A．图中过程①产生配子时可能发生了类似有丝分裂的过程B．雌雄配子结合时可能发生了雄配子细胞核的退化消失C．利用基因编辑技术敲除水稻中的4个基因属于基因突变D．无融合生殖获得的克隆种子可稳定保持亲代的杂种优势二、非选择题16．下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4指示剂琼脂含量（g）10．05．05．02．00．212．0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1)若根据用途划分，该培养基属于（填“选择”或“鉴别”）培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？。(2)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基进行。(3)图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是和。(4)以下过程中所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有________。A．制作果酒 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳17．随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图回答下列问题：(1)应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于个体，性别为。(2)应用2应选择发育良好的胚进行移植。(3)应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题，该技术称为；如需做性别鉴定，还需从细胞取样做DNA分析。胚胎干细胞在形态上表现为体积小，细胞核大，明显等特点，在功能上具有。若将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变，在分子水平上需要采用技术。18．鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是。科研人员还在两种引物的一端分别加上序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是。A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同(2)步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件有。(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是。(4)用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数（植物受病毒侵染的严重程度）为100的平台期，如图，而转基因植株在第天才进入平台期，但此时的病情指数为79。说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有。

19．下图表示利用胚胎干细胞(ES细胞)所作的一系列研究，请据图分析回答：(1)过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上，并加入动物血清、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的，加入抗生素是为了。该过程对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。(2)过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有的特点。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是。囊胚不断的扩大，从中伸展出的过程称为。(3)过程Ⅲ是培育转基因小鼠，将获得的目的基因导入胚胎干细胞之前需构建基因表达载体，目的是。将构建好的表达载体导入胚胎干细胞最常用的方法是。(4)过程Ⅳ得到的小鼠畸胎瘤里面全是软骨、神经管、横纹肌和骨骼等人类组织和器官。实验时，必须去除小鼠的胸腺，使其存在免疫缺陷，其目的是，该过程研究的意义在于解决问题。(5)该研究中，包含的生物技术有(至少写出4种)。参考答案：1．B【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。【详解】A、在敞开的变酸的果酒表面形成的“菌膜”是醋酸菌大量繁殖形成的，A错误；B、果醋发酵时，氧气和糖源都充足的情况下，醋酸菌可将葡萄糖转化成醋酸并产生CO2，B正确；C、果醋制作的温度一般控制在30～35℃，果酒发酵的温度一般控制在18～30℃，酸奶制作的温度在40℃42℃之间，因此酸奶制作的温度高于果醋和果酒制作的温度，C错误；D、泡菜发酵过程中，在泡菜坛盖边沿的水槽中注满水，在发酵过程中也要经常向水槽中补充水，D错误。故选B。2．A【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养；在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】A、平板划线法不能用于细菌计数，为了纯化并计数高抗汞细菌常用稀释涂布平板法，A错误；B、蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，故蛋白胨为高抗汞细菌提供的主要营养为碳源、氮源和维生素，B正确；C、分析题意可知，科研小组从土壤中分离纯化高抗汞细菌，故为了快速获得高抗汞细菌，应从重金属污染的土壤中分离纯化，C正确；D、平板划线纯化培养时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，最后能获得单个菌落，D正确。故选A。3．B【分析】1、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，因此微生物培养过程中要进行无菌操作，其中消毒和灭菌是常用的防止杂菌入侵的方法。2、酵母菌是兼性厌氧菌，有氧条件下进行有氧呼吸而大量繁殖，无氧条件下能进行酒精发酵。3、自养型微生物是能够利用环境中的二氧化碳合成自身的有机物的微生物。4、微生物的接种方法很多，如平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种和穿刺接种等方法（其中筛选分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法），虽然这些技术的操作方法各不相同，但其核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度。【详解】A、在微生物培养过程中配制的培养基除了提供水、碳源、氮源、无机盐等几种主要营养物质以外，培养基还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求，A错误；B、微生物的接种技术除常用的平板划线法和稀释涂布平板法外，还有斜面接种、穿刺接种等方法，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度，B正确；C、纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内静止培养，不需要在摇床上培养，C错误；D、观察菌落时，为了防止污染不能应将培养皿盖拿掉后，可直接观察不用显微镜，D错误。故选B。4．C【分析】1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。2、毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。【详解】A、大豆中的蛋白质含有N，可为米曲霉的生长提供氮源，A正确；B、米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的蛋白酶、脂肪酶能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，B正确；C、米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气，由此可以判断米曲霉属于异养需氧型，而酵母菌属于兼性厌氧生物，C错误；D、发酵池中两种主要微生物产生的酒精具有抑制杂菌的作用，产生的乳酸会营造酸性环境，也可以抑制杂菌生长，D正确。故选C。5．C【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。通常含有水、碳源、氮源和无机盐。【详解】A、玉米清液中含有蛋白质和糖类等物质，故可以为黑曲霉提供碳源和能源，A正确；B、据图可知，发酵前将黑曲霉孢子接种到种子培养基，该措施的目的是进行扩大培养，增加黑曲霉孢子的数量，B正确；C、种子培养基中有发酵所需的菌种，若进行灭菌处理会杀灭菌种而导致发酵失败，C错误；D、黑曲霉属于需氧生物，且微生物发酵过程需要适宜条件，所以在发酵罐内发酵需严格控制溶解氧、温度、pH等条件，D正确。故选C。6．C【分析】1、单倍体：由配子直接发育成的个体。2、若该个体是由受精卵发育来的，体细胞含有几个染色体组就是几倍体。【详解】A、在植物组织培养过程中涉及有丝分裂，没有减数分裂，即②和③阶段不会发生减数分裂，A错误；B、①阶段和②阶段培养基需要加入细胞分裂素和生长素，而③阶段不需要，即①阶段和③阶段所用的培养基不相同，B错误；C、植物组织培养技术包括脱分化和再分化两个阶段，过程①是脱分化，有细胞增殖但无细胞分化，②是再分化，C正确；D、由花药离体培养获得的是单倍体植株，D错误。故选C。7．C【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。【详解】A、植物组织培养过程需要避免杂菌污染，因此，外植体必须要经过消毒处理后才可以进行接种培养，A错误；B、红景天苷（一种次生代谢产物）等物质，具有抗衰老、抗肿瘤等作用，可通过植物细胞培养提高细胞数量，进而增加培养液中红景天苷含量，B错误；C、茎尖中带毒少或无毒，因而可切取一定大小的茎尖进行组织培养而获得脱毒苗，C正确；D、可用PEG诱导高山红景天原生质体融合获得多倍体，D错误。故选C。8．C【分析】（1）动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性、细胞的增殖，诱导手段有电激、聚乙二醇、灭活的病毒等，结果产生杂交细胞，主要用于制备单克隆抗体。（2）单克隆抗体制备的原理包括：①免疫原理：B淋巴细胞能产生特异性抗体；②细胞融合原理：利用病毒对宿主细胞的穿透性使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；③动物细胞培养技术：对杂交瘤细胞进行体内、体外培养。（3）制备单克隆抗体过程中的几种细胞：①免疫B细胞（浆细胞）：能产生单一抗体，但不能无限增殖；②骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体；③杂交瘤细胞：既能产生单一抗体，又能在体外培养条件下无限增殖。【详解】A、诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇、灭活的病毒（如灭活的仙台病毒）等，A正确；B、两两融合的细胞包括免疫B细胞与免疫B细胞融合的具有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的具有同种核的细胞、免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，骨髓瘤细胞虽然能无限增殖，但缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，免疫B细胞虽然有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，但不能无限增殖，所以在HAT筛选培养液中，两两融合的具有同种核的细胞都无法生长，只有杂交瘤细胞才能生长，B正确；C、克隆动物利用了细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术，体细胞杂交技术目前主要用于制备单克隆抗体，C错误；D、动物细胞融合是以细胞膜的流动性为基础，D正确。故选C。9．A【分析】植物细胞工程的技术手段主要有植物组织培养和植物体细胞杂交，其中植物组织培养是植物细胞工程的基础；动物细胞工程的技术手段主要有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备、胚胎移植和核移植，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。【详解】（1）技术手段：植物细胞工程的技术手段有植物组织培养和植物体细胞杂交，正确；（2）特殊处理：植物体细胞杂交时，采用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁，错误；（3）融合方法：诱导植物细胞融合的方法有物理（离心、振动和电激等）和化学方法（聚乙二醇），正确；（4）典型应用：植物细胞工程技术可应用于制备人工种子、培育杂种植株，正确；（5）培养液区别：植物细胞工程中的培养基中需要用生长素和细胞分裂素以影响愈伤组织的生长和分化，如生长素和细胞分裂素比例高，可促进生根，正确。综上可知，1处错误，A正确，BCD错误。故选A。10．D【分析】阅读题干可知本题涉及的知识点是胚胎工程，明确知识点，梳理相关知识，分析题图，根据选项描述结合基础知识做出判断。【详解】A、超数排卵用促性腺激素而不是雌激素，故A选项错误；B、根据采集部位而定，如果是从输卵管采集的卵细胞，已发育成熟，可直接与获能的精子在体外受精；如果是从卵巢是采集的卵细胞，未发育成熟，都要经过体外人工培养成熟后才能与获能的精子受精，故B选项错误；C、受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，不需要注射免疫抑制剂，故C选项错误；D、为了进一步扩大繁殖规模，可通过胚胎分割技术获得同卵双胎或多胎，故D选项正确。故选D。11．B【分析】根据题意和图示分析可知：图示为某哺乳动物卵子及早期胚胎的形成过程示意图，其中Ⅰ为卵原细胞；Ⅱ为初级卵母细胞；Ⅲ次级卵母细胞；Ⅳ为受精卵。【详解】A、由图可知，图Ⅰ示到图Ⅳ为减数分裂过程示意图，染色体只复制一次，A错误；B、哺乳动物的卵细胞都要在输卵管内进一步成熟到MⅡ期才具有受精能力，B正确；C、体外受精时，采集到的精子和卵母细胞要分别在体外获能处理和进行成熟培养至MⅡ期，C错误；D、由于受体子宫对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，所以将囊胚阶段的早期胚胎移植到受体动物体内，不需要对受体动物使用免疫抑制剂，D错误。故选B。12．C【解析】根据题意和图示分析可知：重组质粒导入的是细菌细胞，所以X是能合成胰岛素的细菌细胞。质粒作为运载体需要有多个限酶切点以便转运多种目的基因，同时具有标记基因以便于检测目的基因是否导入到受体细胞内。【详解】A、X是含有胰岛素基因的细菌细胞分裂形成的，含有胰岛素基因，因此能合成胰岛素，A正确；B、质粒通常有标记基因和多个限制酶切点，这样便于目的基因的接入和筛选含有重组DNA的细胞，B正确；C、基因与运载体的重组除了需要DNA连接酶，还需要限制酶，C错误；D、基因工程能定向改造生物的性状，该细菌是采用基因工程技术培育形成的，因此其性状已被定向改造，D正确。故选C。【点睛】13．B【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。【详解】A、在构建重组质粒时，选用HindⅢ和SalI两种不同的限制酶切割目的基因的两端及质粒可防止目的基因和质粒的自我环化，A正确；B、所给的限制酶在质粒上的切割位点都位于抗四环素基因的部位，如果目的基因插入到质粒中，得到重组质粒，则含重组质粒的农杆菌只含有完整的抗氨苄青霉素基因，不含完整的抗四环素基因（被目的基因破坏），则含有目的基因的农杆菌不能在含四环素的培养基上生长，这能说明抗四环素基因起到了标记基因的作用，B错误；C、农杆菌中的TDNA可转移至烟草细胞，并整合到烟草细胞染色体的DNA上，因此将目的基因导入植物细胞采用农杆菌转化法，C正确；D、植物组织培养技术依据的原理是植物细胞的全能性，D正确。故选B。14．D【分析】将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。农杆菌中的Ti质粒上的TDNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这种特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。【详解】A、农杆菌中的Ti质粒上的TDNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，故分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有TDNA序列，进而成功整合到受体细胞染色体上，A正确；B、该方法需要利用农杆菌转化法，在高转化频率的基础上，将目的基因和标记基因整合到染色体上，由图可知，标记基因和目的基因位于细胞中不同的染色体上，B正确；C、通过杂交分离结果可知，经过有性繁殖阶段遗传重组后获得了三种类型细胞，其中包括只含目的基因的，只含标记基因的和既含目的基因又含标记基因的，C正确；D、获得的无筛选标记转基因植株发生了基因重组，D错误。故选D。15．C【分析】据图分析，科研人员利用基因编辑技术敲除的4个基因在实现无融合生殖过程中的作用是使减数分裂变成有丝分裂（或“不出现基因重组、配子染色体数目加倍”），受精后，父本来源的染色体消失。【详解】A、图中过程①产生配子染色体数目不减半，其过程类似于有丝分裂，A正确；B、雌雄性配子结合产生的子代植株中，子代植株染色体组成不加倍，可能发生了雄配子细胞核的退化消失，B正确；C、基因突变不改变基因的数目，利用基因编辑技术敲除水稻中的4个基因导致基因数目减少，不属于基因突变，C错误；D、由图中亲代染色体组成和子代植株染色体组成比较可知，无融合生殖获得的克隆种子可稳定保持亲代的杂种优势，D正确。故选C。16．(1)鉴别将蛋白胨改成尿素(2)高压蒸汽灭菌(3)稀释涂布平板法平板划线法(4)BC【分析】1．选择培养基是将允许特定种类的微生物生长、同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基；鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物的培养基。2．接种微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。【详解】（1）该培养基中含指示剂，为鉴别培养基。为了筛选出尿素分解菌，需要以尿素为唯一氮源，将蛋白胨改为尿素，指示剂酚红可用来筛选土壤中的尿素分解菌。（2）在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基进行高压蒸汽灭菌。（3）图1中单个菌落随机分布在培养基上，对应的接种方法是稀释涂布平板法，图2对应的接种方法是平板划线法，均可得到由单个细菌繁殖形成的菌落。（4）大肠杆菌为原核细胞，无以核膜为界限的细胞核，制作果酒用到的酵母菌为真核细胞，制作果醋用到的醋酸菌为原核细胞，制作泡菜时用到的乳酸菌为原核细胞，制作腐乳用到的主要是毛霉，为真核细胞，BC正确。【点睛】本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够识记培养基的成分和分类，明确大肠杆菌的代谢类型，识记常用的微生物的接种方法以及估算样品中的菌落数的方法，再结合所学知识准确分析各小题。17．(1)供体1和供体2雌性(2)桑椹胚或囊胚(3)胚胎分割技术滋养层核仁发育的全能性DNA分子杂交【分析】分析题图：应用1中：供体1提供细胞核，供体2提供细胞质，经过核移植技术形成重组细胞，并发育形成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，称为克隆牛；应用2中：优良公牛和供体1配种形成受精卵，并发育成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，属于有性生殖；应用3中：采用了胚胎分割移植技术；应用4中：从早期胚胎和原始性腺中获取胚胎干细胞，并进行体外干细胞培养。【详解】（1）应用1中获得的小牛为克隆牛，其细胞核遗传物质来源于供体1，细胞质遗传物质来源于供体2，因此其性别与提供细胞核的供体1相同，为雌性；（2）优良公牛和供体1配种形成受精卵，并发育成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，应选择发育良好的桑椹胚或囊胚胚进行移植；（3）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题，该技术称为胚胎分割技术；如需做性别鉴定，还需从滋养层细胞取样做DNA分析，以减少对内细胞团的损伤；胚胎干细胞在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显等特点，在功能上具有发育的全能性。若将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变，在分子水平上需要采用DNA分子杂交技术。18．(1)鸡干扰素基因两端的部分核苷酸序列GAATTC和GGATCCAC(2)复制原点(3)反转录鸡干扰素基因未能导入烟草愈伤组织细胞或导入烟草愈伤组织细胞的鸡干扰素基因未能转录(4)22实验得到的干扰素表达量较低，未能很好启动机体产生抗性（或病毒接种量过大，相对来说干扰素诱导调控作用滞后；或植物体内缺乏干扰素受体，导致外源基因表达的干扰素诱导或调控作用减弱）【分析】1、图中过程①表示获取目的基因，过程②表示基因表达载体的构建，过程③表示将重组质粒导入农杆菌，过程④表示目的基因的检测和鉴定。2、获取目的基因的方法有多种，常用PCR特异性地快速扩增，PCR需要与两条模板链结合的2种引物。一个基因表达载体的组成，除目的基因、标记基因外，还必须有启动子、终止子和复制原点。目的基因的检测与鉴定有分子水平的检测，包括通过PCR等技术检测目的基因是否转录出了mRNA，或用抗原抗体杂交，检测目的基因是否翻译出蛋白质；其次还需要进行个体生物学水平的鉴定，比如个体相应抗性实验。【详解】（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是干扰素基因两端的部分核苷酸序列；由于需要用EcoRⅠ、BamHⅠ两种限制酶切割目的基因和质粒，因此科研人员还在两种引物的一端分别加上了GAATTC和GGATCC序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点，A正确；目的基因编码蛋白质的序列中，不能有限制酶的切割位点，B错误；酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同，否则会自我环化，C正确；酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列应该不同，否则会自我连接，D错误，故选AC。（2）基因表达载体必需具备的成分有目的基因、标记基因、启动子、终止子和复制原点，图中还缺复制原点