检验科淀粉酶测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-034版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第1页共4页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01淀粉酶测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：血清淀粉酶测定(缩写AMY)，尿液淀粉酶测定；组合项目申请：血生化胰腺炎项目测定。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。尿液收集5-10ml放于干燥试管中送检。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定12h，普通冰箱中（2～8℃）稳定5天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。2.3.2注意有无应用影响测试项目的药物。2.3.3不建议使用抗凝的血液标本，常用的抗凝剂对AMY有抑制作用。3方法原理以Gal-G2-α-CNP为底物的酶连续监测法。淀粉酶催化Gal-G2-α-CNP成CNP，CNP在410nm处有特异吸收峰，其生成的速度与血清中AMY的活性成正比。在410nm处连续监测CNP的生成速率，推算出AMY活性。4试剂及其他用品4.1试剂盒名称：淀粉酶连续监测法测定试剂盒，由上海申能生化试剂厂出品。4.2试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2～8℃可稳定至有效期。试剂开瓶后，在仪器冰箱试剂仓中可保存28天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，或起始吸光率>0.5时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：Gal-G2-α-CNP4.5mmol/L，醋酸钙5.0mmol/L，氯化钠51mmol/L，叠氮钠152mmol/L，MES缓冲液（pH6.0）50mmol/L。5校准品与校准模式校准品：不使用校准品，以CNP的双波长（410/480nm）摩尔吸光系数计算AMY活性。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数参见说明书。10结果计算计算公式：AMY(U/L)＝公式中ΔA/min即单位时间中吸光度降低的值，VT为总反应体积ml（试剂总量＋标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，ε为CNP的410/480nm测定的毫摩尔消光系数。K值即因子，仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：5～1500U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<3.0%，批间CV<5.0%。12.2线性范围：5～1500U/L。12.3方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物脂血4.5mmol/L、黄疸513μmol/L、抗坏血酸17mmol/L对测试结果无明显影响。12.4灵敏度：淀粉酶浓度为158U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.065～0.069。13参考范围及医学决定水平参考值：血清15-220U/L尿液80-1000U/L14临床意义14.1淀粉酶包括两种同工酶即胰淀粉酶和唾液淀粉酶，血清或尿液的总淀粉酶活性是诊断急性胰腺炎的重要指标。14.2在急性胰腺炎发作期淀粉酶活性显著增高。尿淀粉酶在发病后12～24h也会升高。某些慢性胰腺疾病，如慢性胰腺炎、胰腺肿瘤以及流行腮腺炎、唾液腺化脓或腺管堵塞时，血清淀粉酶也会有所升高，而对于各种肝脏疾病，如肝炎、肝硬化、肝脓肿、肝癌及胆囊炎等，则淀粉酶活力下降。14.3淀粉酶由于其对底物的要求不同于一般的酶，所以测定方法繁多，结果的表示极不统一，各种结果不能相互对比。本法以符合参考方法要求的原理测定，结果以国际单位表示。14.4急性胰腺炎时，淀粉酶在血中和尿中的升高有时间规律，临床应注意采标本的时间并在判断结果时将这一因素结合考虑。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：分析血清与尿液淀粉酶水平的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16无威胁生命的“紧急值”及报告规定17有关引用程序与文件17.1Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操作程序。17.3检验结果审核程序。17.4标本送检和接收程序。18参考文献18.1陆永绥，张伟民主编.临床检验管理与技术