双小泛素样蛋白的化学合成、结构解析及其与结合蛋白的交联分析的任务书_第1页
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双小泛素样蛋白的化学合成、结构解析及其与结合蛋白的交联分析的任务书任务书一、任务背景和意义泛素（Ub）和其修饰在细胞生物学中扮演着重要角色，如蛋白质的降解、信号转导、DNA损伤修复、染色质调控、细胞周期调控等等。近年来，越来越多的研究表明，双小泛素样蛋白（diubiquitin，diUb）的结构和功能也非常重要，关键的一步便是通过合成的技术来获得理想结构、功效和规模的diUb。二、任务目标本任务主要目标是：1.合成diUb化合物；2.使用高分辨率质谱技术和核磁共振技术，对双小泛素样蛋白的结构进行解析；3.通过对diUb和结合蛋白的交联分析，在不同条件下分析两者结合情况。三、任务内容及阶段目标1.合成diUb化合物（1）合成diUb分子的单元：从泛素表达体系中纯化得到的泛素物质，经由酶、缬氨酸和酯化反应，可以在C端加入一分子羧基安全（BSA）;而N-端则加入对羟基苯甲酸酯（FMOC），形成N-FMOC-UB-BSA结构。（2）合成diUb分子：通过核苷酸磷酸二酯缩合反应，将两份UB-BSA化合物连接起来，从而形成diUb化合物。2.对双小泛素样蛋白进行结构解析（1）使用质谱技术检测diUb化合物的纯度（2）使用核磁共振技术确定diUb化合物的结构3.对diUb和结合蛋白的交联分析（1）进行diUb和结合蛋白的结合反应（2）在不同条件下，如pH、温度、浓度、结合剂用量等，进行diUb和结合蛋白的结合反应，并通过交联试剂将二者交联，从而解析二者结合情况。四、实验条件和必要设备本任务所需实验条件和必要设备包括但不限于：（1）分子生物学实验室和设备，并具备常规蛋白表达、纯化和鉴定的能力；（2）高分辨率液质联用分析仪；（3）高分辨率核磁共振仪；（4）交联试剂、凝胶电泳仪、Westernblot仪等常规实验室设备。五、预期成果通过本次任务，预期可以完成diUb化合物的合成、结构解析和与结合蛋白的交联分析，进一步揭示双小泛素样蛋白的结构和功能，为之后针对泛素家族的药物研究提供重要的基础数据和理论依据。六、实验流程实验流程如下图所示：七、安全注意事项1.实验室使用前，必须熟知实验室安全操作规程和应急预案。2.操作前需佩戴良好的实验服和手套，操作过程中注意反应溶液的温

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