粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速检测法

XX/TXXXXX—XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由国家粮食和物资储备局提出。

本文件由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC270）归口。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件起草单位：河南工业大学，费县中粮油脂工业有限公司，中粮油脂控股有限公司，河北玉星

食品有限公司，长寿花食品股份有限公司。

本文件主要起草人：刘玉兰，刘配莲，张刚，董迎章，马宇翔，邓斌，王月华，王戬东，裴娅晓。

1

XX/TXXXXX—XXXX

粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定

荧光定量快速检测法

1范围

本文件规定了黄曲霉毒素B1的荧光定量快速检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、

样品测定、结果判定和检测限。

本文件适用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

采用荧光侧向免疫层析方法学原理，将待测样品滴加在加样区，样品中的黄曲霉毒素B1与结合垫

中的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合并通过毛细作用向前层析，达到检测区后，检测线T线上固定

的黄曲霉毒素B1抗原与剩余未结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合。检测线T线上结合的荧光微

球标记黄曲霉毒素B1抗体的量与样品中黄曲霉毒素B1的浓度成反比。层析结束后，采用荧光定量快速

检测仪读取T线和C线的荧光强度并计算T/C值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中黄曲霉毒素

B1的含量并判断阴阳性。

4试剂

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水。

4.1样本稀释液(1)。

4.2甲醇。

（1）样本稀释液是由上海飞测生物技术有限公司研制。提供该信息是为了方便本标准用户的使用，而不是对该试

剂的认可。可获得相同结果的其它试剂均可使用。

5仪器设备及材料

实验室常规仪器、设备及材料。

2

XX/TXXXXX—XXXX

5.1粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目标准筛。

5.2天平：分度值0.01g。

5.3漩涡振荡器。

(2)

5.4黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡：具体储存条件参照使用说明。

5.5离心机。

5.6恒温孵育器：孵育温度37℃，工作条件：环境温度5-37℃，环境湿度不大于80%。

（3）

5.7荧光定量快速检测仪：工作条件：环境温度5-40℃，环境湿度不大于90%。

5.8ID卡。

5.9条形码。

6样品制备

6.1扦样与分样

按GB/T5491执行。

6.2样品前处理

6.2.1花生仁、玉米胚或及饼粕等。取有代表性的样品300g~500g，用粉碎机粉碎至样本90%通过20

目标准筛，对粉碎后的样品再次混匀后备用。

6.2.2花生油、玉米油等油脂。取有代表性毛油20g以上，4000r/min离心2min，取上层液体备用（除

毛油以外的植物油直接称取，不用离心）。

6.2.3准确称取5.0±0.05g粉碎后的样品（或离心后的上层液体）于50mL离心管中，按料液比1:5

加入25mL甲醇水溶液（V甲醇:V水为8:2），震荡提取5min。

6.2.4提取结束后，4000rpm离心2min（或静置3~5min后过滤），得上清液。

6.2.5取100ul上清液，加入到600ul样品稀释液中（4.1），混匀备用。

注1：不同厂家荧光定量快速检测卡的样品处理方法可能不同，应按照使用说明规定的方法进行操作。

注2：待测样品吸水量过大不易提取时，可采用1:10比例提取，检测结果乘以2即为样品中黄曲霉毒素B1的含量。

（2）黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡是由上海飞测生物科技有限公司研制。提供该信息是为了方便本标准企业

的使用，而不是对上海飞测荧光定量快速检测卡检测的认可，任何具有相同技术参数和性能的产品均可使用。

（3）荧光定量快速检测仪是适合的商品测量仪器，此条信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指

定认可。

7样品测定

3

XX/TXXXXX—XXXX

7.1检测前准备

7.1.1将待用黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡、样品提取液、样品稀释液恢复至室温。

7.1.2将检测卡恒温孵育器开机，待温度升至37℃后即可使用。

7.1.3将荧光定量快速检测仪开机，预热10min，插入本批次产品所对应的ID卡（每批次产品只需插一

次即可），如需切换检测项目，扫描相应项目和批次的条形码即可。

7.2样品检测

7.2.1从包装袋中取出黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡，水平置于检测卡恒温孵育器上。

7.2.2用移液枪吸取稀释后的待测液100ul加到检测卡上的加样孔中，开始计时孵育8min。

7.2.3孵育结束后，将检测卡插入荧光定量快速检测仪中，按读数键或触摸屏幕读数即可。

8结果判定

8.1定量检测结果将呈现于荧光定量快速检测仪液晶显示屏上，同时可按打印键打印获得纸质的检测报

告（平行测定次数可根据使用方质量控制要求进行调整，定量检测结果保留2位小数）。

8.2阴性（-）：检测结果＜cut-off值（可根据使用方质量控制要求进行调整）。

8.3阳性（+）：检测结果≥cut-off值（可根据使用方质量控制要求进行调整）。

8.4无效：检测仪报错，则本次检测无效，需重新测试。

8.5检测结果超出定量范围的上限，可取离心后的上清液（6.2.4），用样品提取液稀释5倍后混匀，再

按（6.2.5）检测，检测结果乘以5，即为样品中黄曲霉毒素B1的最终含量。

9重复性

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

10检出限

本方法测定油料和油脂中黄曲霉毒素B1的检出限为0.5μg/kg，定量限为1μg/kg。

_________________________________

4

ICS点击此处添加ICS号

点击此处添加中国标准文献分类号

LS

中华人民共和国粮食行业标准

LS/TXXXXX—XXXX

粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测

定荧光定量快速检测法

inspectionofgrainandoils-determinationofaflatoxinB1inoilgrease,rapid

quantitativemethodoffluorescenttechnique

（征求意见稿）

2022.5.20

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

国家粮食和物资储备局发布

XX/TXXXXX—XXXX

粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定

荧光定量快速检测法

1范围

本文件规定了黄曲霉毒素B1的荧光定量快速检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、

样品测定、结果判定和检测限。

本文件适用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

采用荧光侧向免疫层析方法学原理，将待测样品滴加在加样区，样品中的黄曲霉毒素B1与结合垫

中的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合并通过毛细作用向前层析，达到检测区后，检测线T线上固定

的黄曲霉毒素B1抗原与剩余未结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合。检测线T线上结合的荧光微

球标记黄曲霉毒素B1抗体的量与样品中黄曲霉毒素B1的浓度成反比。层析结束后，采用荧光定量快速

检测仪读取T线和C线的荧光强度并计算T/C值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中黄曲霉毒素

B1的含量并判断阴阳性。

4试剂

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水。

4.1样本稀释液(1)。

4.2甲醇。

（1）样本稀释液是由上海飞测生物技术有限公司研制。提供该信息是为了方便本标准用户的使用，而不是对该试

剂的认可。可获得相同结果的其它试剂均可使用。

5仪器设备及材料

实验室常规仪器、设备及材料。

2

XX/TXXXXX—XXXX

5.1粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目标准筛。

5.2天平：分度值0.01g。

5.3漩涡振荡器。

(2)

5.4黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡：具体储存条件参照使用说明。

5.5离心机。

5.6恒温孵育器：孵育温度37℃，工作条件：环境温度5-37℃，环境湿度不大于80%。

（3）

5.7荧光定量快速检测仪：工作条件：环境温度5-40℃，环境湿度不大于90%。

5.8ID卡。

5.9条形码。

6样品制备

6.1扦样与分样

按GB/T5491执行。

6.2样品前处理

6.2.1花生仁、玉米胚或及饼粕等。取有代表性的样品300g~500g，用粉碎机粉碎至样本90%通过20

目标准筛，对粉碎后的样品再次混匀后备用。

6.2.2花生油、玉米油等油脂。取有代表性毛油20g以上，4000r/m