医学教案艾滋病快速检测标准操作程序

HIV抗体快速检测标准操作程序（SOP文件）文件编号：ZFY/JYK/HIV-2018-08拟制人：XXX审核人：XXX批准人：XXX发布日期：2018年9月2日实施日期：2018年9月2日XXXXXXXX妇幼保健院医学检验科SOP文件目录1.目的……………12.适用范围………………………13．职责……………14．样本采集………………………15．样本接收登记…………………16．样本处理与保存……………1-2样本运输………………………28.HIV抗体检测流程……………29.HIV抗体快速检测替代策略……………………310.雅培胶体硒法检测…………3-511.SD胶体金法检测……………5-612.英科新创胶体金法检测……………………6-813.万孚胶体金法检测…………8-9结果解释……………………9-10结果报告……………………10HIV抗体快速检测替代策略原始检测记录及检测报告…10原始检测记录及检测报告表……………11-12参考文献……………………13XXXXXXXXXXXXXXXXXXX妇幼保健院医学检验科标准操作程序编号ZFY/JYK/HIV-2018-08版本A版版次第1次修改页码颁布日期2018年09月02日编制/日期XXX/2018-08-29审核/日期XXX/2018-09-02批准/日期XXX/2018-09-02HIV抗体快速检测SOP文件目的本操作规程用于规范HIV抗体快速检测工作。适用范围本操作规程适用于HIV抗体快速检测和报告流程。职责3.1检测人员执行本规程。3.2监督员负责规程执行情况的检查和监督。3.3部门负责人负责对操作人员进行培训，对违规情况进行查处，并进行跟踪纠正。4.样本采集4.1采集静脉血清、血浆和全血接患者申请单后，填写样本采集记录，包括患者日期、姓名、年龄、门诊号、采集人签名等。用非抗凝管或EDTA抗凝管采集一定量的静脉血，颠倒混匀5-6次，注：采集时要避免样品溶血，对全血和血浆样品，必须使用EDTA抗凝管。4.2采集末梢全血采集末梢血时应用无菌纱布擦掉第一滴血，且注意及时混匀防止凝固。5.样本接收登记对于本院采集的合格送检样本接收时核对并登记《检验科样本接收记录》，不合格的样本登记《检验科样本拒收记录》，外院送检的样本接收时核对并登记《检验科外送样本接收记录》。样本处理与保存6.1抗凝管（EDTA）：3000r/min离心15min，非抗凝管室温下自然放置半小时，待血液凝固、血块收缩后再3000r/min离心15min。6.2对于血清和血浆样品，如收集后7天内检测，样品须放在2~8ºC保存，如果大于7天则须冷冻保存，低于-20ºC。6.3对于静脉全血样品，如收集后7天内检测，可将样品放在2~8ºC保存，禁止冷冻全血样品。6.4对于末梢全血样品，必须马上测定。7.样本运输7.1样本运输主要针对外送州检测中心检测的样本，样本一般为血清或血浆，不运送全血。7.2容器要求：①血清应置于带盖的1.5ml离心管内，管外应有明显的标记，姓名与门诊号要清晰。②在离心周围应垫有可缓冲吸水材料，以免破碎。③随样品应附有送检单，送检单应与样本分开放置。④外层容器要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器。7.3天气过热，需采用干冰或冰壶冷藏运输。HIV抗体检测流程如果没有备案快速检测替代策略，则选择其他补充试验HIV抗体快速检测替代策略本实验室筛查阳性样本或送检筛查阳性样本优先使用快速检测替代策略进行检测。使用4种快速检测试剂组合，其中进口快速检测试剂不少于2种（与筛查试剂与复核试剂相同的试剂无需重复检测）。4种快速试剂检测4种快速试剂检测其中1种无反应或反应较弱报告“HIV感染待确定”均为强阳性反应报告“HIV抗体阳性”HIV抗体确证试验或核酸试验雅培胶体硒法检测10.1检测原理本试剂是利用免疫层析法原理定性测定血样中的HIV-1/2抗体。加样本入反应条，样品迁移通过结合物包被处，与硒胶体-抗原结合物混合重组结合，此混合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的病人结果窗口。如果样品中含有HIV-1/2抗体，抗体将会与硒胶体-抗原结合，并在病人窗口处被固相包被的合成肽和重组抗原所捕获，形成一条红线。如果样品中不含有HIV-1/2抗体，硒胶体-抗原结合物将会通过病人窗口而不与固相包被的合成肽和重组抗原结合，则没有一条红线形成。为了确保结果有效，在反应条中含有质控条带。10.2检测程序（如图1）10.2.1血清或血浆样品a.加50μL（精细分液器）样品于样品反应垫中（箭头所指处）。b.等最少15分钟（最多60分钟）然后读取结果。10.2.2全血样品（静脉血）a.加50μL样品（精细分液器）于样品反应垫中（箭头所指）。b.直至血液吸入样本垫然后加入1滴AlereDetermineChase缓冲液。c.等最少15分钟（最多60分钟）然后读取结果。10.2.3全血样本（手指血）a.加50μL样品（EDTA抗凝毛细管）于样品反应垫中（箭头所指处）。b.直至样品被样品反应垫全部吸收后，然后加入1滴AlereDetermineChase缓冲液。c.等最少15分钟（最多60分钟）然后读取结果。图110.3质量控制10.3.1内部质拄测试条上有"Control"的质控线，当分析结束后质控线没有变红，测试结果无效，必须重测。10.3.2外部质控外部阳性质控品与阴性质控品检测分别显示阳性和阴性表明试剂有效。10.4储存条件及有效期2~30ºC保存，试剂盒有效期18个月。用于全血检测的AlereDetermineChase缓冲液有效期18个月。试剂盒的生产日期和失效日期见试剂盒外包装。对于未使用的测试条，应立即放回含干燥剂的铝箔袋，从底部开始按压密封条重新密封。SD胶体金法检测11.1检测原理本试剂盒中含有一根膜试剂条，其中在检测1区和2区分别包被有重组的HIV-1捕获抗原(gp41,p24)和HIV-2捕获抗原(gp36)，在样品垫处有抗原(gp41,p24和gp36)和胶体金的复合物。当检测标本中含有HIV抗体时，首先会与样品垫处的抗原-胶体金复合物结合，然后在层析作用下沿硝酸纤维膜向前移动，当此复合物遇到膜上固定的抗原时就会高度敏感和特异地反应形成可见的抗原-抗体-抗原-胶体金复合物线。在检测板表面上，有字母1,2和C,分别作为检测线1(HIV-1),检测线2(HIV-2)和质控线的标示。结果窗口中的检测线和质控线在加样品前是不可见的。质控线用作程序质控。如果操作正确，质控线的检测试剂正常，则质控线应该总是会出现的。11.2检测程序11.2.1从铝箔袋中取出检测板，放于水平、干燥的平面上。11.2.2加样a.使用毛细吸管用20mL的毛细吸管吸取20uL全血标本加到样品孔（S）中。b.使用微量吸管加10mL血浆/血清标本或20uL的全血标本到样品孔（S）中。11.2.3将4滴（大约120uL）试验用稀释液垂直滴加到样品孔（S）中。注意：如果不是垂直地拿着瓶子，则可能导致不正确的结果。11.2.4当检测开始时，在检测板中央区域可看到紫色液体流过结果窗口。11.2.5在10〜20分钟内解释结果。在加入稀释液后，10分钟后读取结果不要超过20分钟。注意：在10分钟后检测结果由于背景颜色重而没有淸晰的结果时，请在加入稀释液20分钟内重新读。不要超过20分钟读取结果。11.3质量控制11.3.1内部质拄人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒(胶体金法)的表面上有字符1,2和C分别表示检测线1(HIV-1),检测线2(HIV-2)和质控线。结果窗口中的检测线和质控线在加样前都是不可见的。质控线用于试验程序的质控。快速诊断试验(RDT)的质控线仅表明成功加入了稀释液，且试剂条中的主要活性组成成分依然有效，但是不能保证标本加入正确，也不能作为阳性标本质控。11.3.2外部质控外部阳性质控品与阴性质控品检测分别显示阳性和阴性表明试剂有效。11.4储存条件及有效期11.1~30°C保存，有效期为24个月。生产日期及失效日期见包装标签。试剂不需要储存在冰箱或冷藏库中。请勿将检测板置于高温或潮湿环境下。从铝箔袋中拿出检测板后请立即使用。不得在失效期后使用。试剂盒的有效期标在外包装上。如果包装袋破损或密封不严，则不得使用。包装袋中的干燥剂的颜色变化可以帮助判断试剂是否受潮。如果受潮，请勿使用。检测板不得重复使用。检测板推荐使用在室温中（15~30°C）4储存条件及有效期英科新创胶体金法检测12.1检测原理采用胶体金免疫技术和层析原理，定性检测人全血、血清或血浆样本中的HIV1/2型抗体。检测阳性样本时，样本中HIV抗体与胶体金标记抗原（大肠杆菌中表达）结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组HIV-Ag（大肠杆菌表达）结合形成“Au-HIV(1+2)-Ag-HIV-Ab-HIV(1+2)-Ag”夹心物而凝聚显色，游离的胶体金标记重组Au-HIV(1+2)-Ag则在对照线处与鼠抗HIV单克隆抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可。12.2检测程序12.2.1血清、血浆样本a.将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。b.将所需数量的测试试剂从包装盒中取出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上。c.用微量加样器取60ul血清或血浆样本，滴加到试剂的加样处。d.加样后，阳性标本可在1〜30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结果。12.2.2全血样本a.将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。b.将所需数量的测试试剂从包装盒中取出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上。c.用微量加样器取60ul全血样本，或用试剂盒内所配塑料滴管吸取样本，垂直滴加两滴于试剂的加样处，随即加一滴金标全血样本稀释液。d.加样后，阳性标本可在1〜30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结果。12.3质量控制（见图2）12.3.1内部质拄人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒(胶体金法)的表面上有字符1,2和C分别表示检测线1(HIV-1),检测线2(HIV-2)和质控线。结果窗口中的检测线和质控线在加样前都是不可见的。质控线用于试验程序的质控。快速诊断试验(RDT)的质控线仅表明成功加入了稀释液，且试剂条中的主要活性组成成分依然有效，但是不能保证标本加入正确，也不能作为阳性标本质控。12.3.2外部质控外部阳性质控品与阴性质控品检测分别显示阳性和阴性表明试剂有效。加样区检测线对照线检测线图2加样区检测线对照线检测线12.4储存条件及有效期储存条件：4〜30°C密封干燥处保存。有效期：16个月万孚胶体金法检测13.1检测原理本品利用胶体金免疫层析技术，采用双抗原夹心法检测HIV1/2抗体。当待测样本中含有HIV1/2抗体且抗体浓度等于或高于最低检出限时，HIV1/2抗体先和金标抗原(Ag-Au)形成反应复合物Ab-Ag-Au，由于层析作用反应复合物沿着硝酸纤维膜向前移动，当遇到检测区（T）包被HIV1/2重组抗原时，形成Ag-Ab-Ag-Au复合物，在检测区上最终形成一条红色反应线，此时结果为阳性；相反，当样本不含HIV1/2抗体或者抗体浓度低于最低检出限时，则检测区无红色反应线出现，此时结果为阴性。质控区（C）包被抗鼠IgG多克隆抗体，与胶体金标记的鼠IgG反应形成红色反应线作为质控。13.2检测程序测试前请仔细阅读使用说明书，测试应在室温下进行。沿铝箔袋切口部位撕开，取出测试卡平放于台面上，并做好标记。用吸管吸取血清、血浆样本然后垂直加入3~4滴（约80µL）于加样孔中，若样本粘稠不易爬出，可滴加1滴稀释液；若为全血样本，则用吸管吸取全血，垂直加入2滴（约50µL）于加样孔中，同时滴加1~2滴稀释液。（见图3-5）10~15分钟观察显示结果；30分钟后显示的结果无临床意义。

图一图二图三13.3质量控制13.3.1内部质拄阳性：两条红色反应线，即在检测区（T）及质控区（C）各出现一条红色反应线。阴性：一条红色反应线，即仅在质控区（C）出现一条红色反应线。无效：质控区（C）无红色反应线出现，检测无效，建议此时用新测试卡重新测试。13.3.2外部质控外部阳性质控品与阴性质控品检测分别显示阳性和阴性表明试剂有效。13.4储存条件及有效期4℃～30℃保存，有效期24个月。铝箔袋开封后，测试卡应在1小时内尽快使用；稀释液使用后应立即加盖，并置于阴凉处或冰箱内，请在有效期内使用。生产日期和失效日期见产品标签。结果解释14.1阴/阳性区分HIV-1/2抗原的SD胶体金快速试剂出现两条或三条红线（质控线+检测线）时为阳性，其余三种快速试剂出现两条红线（质控线+检测线）时为阳性，四种快速试剂只出现质控线时为阴性。14.2阴性结果不能排除HIV病毒感染的可能，造成假阴性的情况可归类为以下几点：a.当感染者抗体水平低于产品测试灵敏度极限时（比如：感染窗口期、早期血清转化样本）b.当特殊HIV病毒变异株感染样本其抗体不与此产品包被抗原起反应时c.当可能的个别特殊人样本造成的无反应性d.样本处理不当造成检测误差时e.HIV感染者服用抗逆转录病毒药物14.3对于阴性的结果，建议结合临床状况（比如症状或高危因素）综合考虑。阳性结果建议用确证性试验进行确证检测。不用EDTA抗凝的全血血浆样品可能会得到不正确的结果。如果母亲感染HIV，其新生儿可能携带母体的HIV抗体，直至18个月，但这并不足以说明新生儿的真实感染状态。结果报告按HIV抗体检测流程检测为阴性时报“HIV抗体阴性”，有复检情况进行复检后为一阴一阳时报告“HIV抗体感染待确定”，需进行补充实验；复检后均为阳性时首先进行HIV抗体快速检测替代策略检测，当替代策略检测有其中一种试剂为阴性或是弱阳性时报告“HIV抗体感染待确定”，需进行补充实验，当四种试剂均为强阳性时报告“HIV抗体阳性”。HIV抗体快速检测替代策略原始检测记录及检测报告进行HIV抗体快速检测替代策略检测时，其检测原始记录及检测报告按下表进行记录及报告（附表1-2）。附表1

HIV抗体快速替代策略检测原始记录 第页，共页样品名称： 血液□其它请注明□样品来源及数量（份）： 检测项目：检测方法：快速检测质控品厂家：批号：有效期：主要仪器：单头移液器（仪器编号：）、生物安全柜（仪器编号：）检测技术依据：HIV：艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准（WS293-2008）□检测地点：室温：℃相对湿度：％检测步骤：1、按说明书要求加入待检样本，室温放置；2、在要求的时间内进行结果判断。检测结果：样本编号试剂1厂家：批号：有效期：质控日期：质控结果：符合□试剂2厂家：批号：有效期：质控日期：质控结果：符合□试剂3厂家：批号：有效期：质控日期：质控结果：符合□试剂4厂家：批号：有效期：质控日期：质控结果：符合□替代检测结果加样量（ul）反应时间（min）对照结果加样量（ul）反应时间（min）对照结果加样量（ul）反应时间（min）对照结果加样量（ul）反应时间（min）对照结果备注1.对照和样本反应区未出现条带为无反应，用“－”表示，出现条带为有反应，用“＋”表示。2.4种试剂检测结果均有反应，报告“HIV抗体阳性”，用“＋”表示；任一种试剂无反应，报告“HIV感染待确定”，用“±”表示，进行HIV抗体确证或核酸检测。测试人 复核人年月日 年月日

附表2HIV抗体确证/替代策略检测报告REPORTOFHIVANTIBODYCONFIRMATORY/ALTERNATIVESTRATEGYTESTING报告编号：注意保密 样品编号：委托单位（人）CLIENTSDOCVARIABLE"8"委托日期DATE年月日DOCVARIABLE"9"YEARMONTHDATE样品名称SPECIMEN血液样品数量SPECIMENVOLUME3ml样品性状TYPEOFSPECIMEN液体姓名：DOCVARIABLE"10"NAME：性别：DOCVARIABLE"11"SEX：年龄：DOCVARIABLE"12"AGE：身份证号码（IDCardNumber）：联系电话（Tel.）：现住址：_____省_____市_____县_____乡（镇、街道）_____村_____（门牌号）户籍地址：_____省_____市_____县_____乡（镇、街道）_____村_____（门牌号）民族/国籍：/中