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文档简介
34RegulationfordetectionofextraintestinalpathogenicEscherichiacolifromswineI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定1GB4789.38食品安全国家标准食品微生物学GB4789.41食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验4.1显微镜:10×~100×。4.4冰箱:0℃~4℃。4.1030%甘油缓冲盐水溶液:见附录A中A.24.19大肠杆菌0抗原单因子标准血清。保存与运输:病料样品采集后不能及盐水溶液中,保存时间不超过72h。样品均需采取低温(0℃~4℃)保存和运输。35.2.6肠外致病性大肠杆菌系统进化群鉴定4A.1饱和氯化钠溶液A.1.1成分A.1.2制法将38.0g~39.0g氯化钠加入100mL蒸馏水中,充分搅拌,待完全溶解混匀后,分装于采样A.230%甘油缓冲盐水溶液A.2.1成分A.2.2制法A.3.1成分A.3.2制法5业6取O抗原分别与大肠杆菌的O抗原单因子血清进行玻片凝集反应。即O抗原和O抗原单因子血清各取混合物作对照,观察有无自凝集现象。玻片凝集试验判定标+-a)O抗原单因子定型血清的稀释:采取倍0.5mL加入第1管,在管内反复吹打6~8清稀释倍数分别是1:20,1:40,1:80b)加入抗原:向各支试管中分别加入0.5mLO抗原,此时血清稀释倍数相应增大一倍;3)凝集强弱判断(以“+”表示确定抗体凝集效价时,应以出现“++ℽ(50凝集现象•“++++ℽ液体完全透明,100%凝集,管底出现大片的•“+++ℽ液体几乎透明,75%凝集,管底有明显的伞状沉淀,震荡时呈小或大絮片状;7•“++ℽ液体中等混浊,50%凝集,管底有中等量的伞状沉淀,震荡时呈小絮片状;•“+ℽ液体透明度不明显,25%凝集,管底有少许不明显的伞状沉淀;•“-ℽ抗原抗体不凝集,液体混浊、无透明度,管底无伞状沉淀,但由于菌体自然下沉,管82×PCRMasterMix、超纯水、琼脂糖、10mg/ML溴化乙锭(EB)、TBE缓(10×LoadingBuffer)、相对分子质量Mar猪肠外致病性大肠杆菌系统进化群PCR鉴定用引物yjaAyjaA-FyjaA-RTspE4.C2-FD.2.2ExPEC的系统进化群分D.2.3.1用100mL1×TAE缓冲液制备1.0%琼脂糖
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