第七章分生组织培养与脱毒

第七章分生组织培养与脱毒27、1植物病毒得危害和种类:受病毒危害严重的作物有：大田作物：马铃薯、甘薯和烟草蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄和萝卜果树：柑橘、苹果、草莓和香蕉花卉：香石竹、各种菊花、天竺葵和紫罗兰植物病毒已超过600种；感染草莓的病毒有62种，柑橘有15种，马铃薯有26种植物病毒有RNA、DNA病毒草莓病毒病3环斑型变色型坏死型畸形生长型一般减产30%左右47、2植物病毒得传播及分布:介体传播1.昆虫介体：400多种（如蚜虫200多种、叶蝉130多种、飞虱等），以蚜虫为主；2.动物介体（如螨、线虫）；3.真菌和菟丝子。飞虱传播病毒

蚜虫传播病毒

螨虫传播病毒

7、2、1传播5嫁接传播非介体传播

是指植物病毒从感病寄主体内由于伤残或分泌而达到体外，与另一寄主体通过机械摩擦所造成的微伤接触而传染；无性繁殖67、2、2植物病毒得分布

7、2、2、1侵入活体寄生,不能从气孔侵入。微小伤口——胞间连丝——原生质,产生侵染(1)通过寄主柔膜组织昆虫传播得病毒,可通过3种类型得组织侵入:(2)通过寄主韧皮组织

(3)通过木质部77、2、2、2增殖与运转病毒粒子(核酸)细胞核内复制,到达细胞质诱导病毒蛋白质形成,最后组装在一起。病毒复制到一定量,形成侵染点,通过胞间连丝(移动较慢)与韧皮部(速度极快),扩散到其她部分。87、2、2、3分布顶端分生组织一般就是无毒得,或者就是只携有浓度很低得病毒。病毒数量随着与茎尖距离得加大而增加,在较老得组织中病毒浓度很高。9孔雀绿、硫尿嘧啶等病毒抑制剂、核酸合成抑制剂。生产上很难应用。1、高温处理

①温汤浸渍处理法②热风处理法2、低温处理1、种子繁殖2、分生组织培养中脱毒3、愈伤组织诱导4、微型嫁接脱毒5、珠心胚培养物理学方法化学方法生物学方法7、3植物病毒得防治方法及原理:10高温空气热处理脱毒示意图切取嫩梢1.5~2.0cm带病毒植株热处理38℃嫩梢嫁接大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静12热处理与茎尖分生组织培养结合脱毒

35℃热处理7~28d感染X、Y病毒暗处发芽

茎尖剥离茎尖分生

组织培养柑橘微芽嫁接脱毒四川农业大学农学院马铃薯研究开发中心13重点介绍:7、4茎尖分生组织培养脱毒14茎尖培养:概念:就是指从十到几十微米得茎尖分生组织至几十毫米茎尖或更大芽得离体培养。根据外植体大小可划分:茎尖分生组织培养(≦0、1mm)普通茎尖培养(较大得茎尖如几毫米乃至几十毫米)15茎尖分生组织培养茎尖培养无菌苗茎尖培养途径易难四川农业大学农学院马铃薯研究开发中心16来源:丁春邦课件17茎尖分生组织培养茎尖培养无菌苗无毒苗区别?187、4、1茎尖分生组织培养脱毒原理:White发现TMV在烟草根尖分布不均,1934年。Limasset等发现茎尖也不带病毒。1949年,Morel等首先利用茎尖分生组织培养获得了大丽花和马铃薯无病毒苗,同时建立了茎尖脱毒得组织培养技术体系。1952年,Mathews(1970)等认为分生组织能避免病毒侵染得可能机理就是:19(1)在植物体内,病毒通过维管系统移动,而分生组织不存在维管系统。此外,病毒通过胞间连丝在细胞间移动,但其速度很慢,难以侵入活跃生长得茎尖;(2)在旺盛生长得分生细胞中,代谢活性很高,使病毒无法进行复制;(3)倘若在植物体内确实存在着“病毒钝化系统”得话,她在分生组织中应比在任何其她区域都有更高得活性,因而分生组织不受侵染;(4)在茎尖中存在高水平得内源激素,可以抑制病毒得增殖。20

带病毒植株材料处理茎尖剥离

(0.2mm)

茎尖培养

分化芽分化根

病毒检测

脱毒植株7、4、2茎尖分生组织培养脱毒过程21病毒得种类离体茎尖得大小化学物质热处理病毒间得干扰7、4、3影响分生组织培养脱毒得因子:22一些植物茎尖培养脱除病毒时适宜茎尖大小(朱至清,2002)植物种类病毒种类茎尖大小/mm植物种类病毒种类茎尖大小/mm甘薯马铃薯大丽花斑叶花叶病毒缩叶花叶病毒羽状花叶病毒Y病毒X病毒卷叶病毒G病毒S病毒花叶病毒1、0～2、01、0～2、00、3～1、01、0～3、00、2～0、51、0～3、00、2～0、30、30、6～1、0康乃馨百合鸢尾大蒜矮牵牛菊花草莓甘蔗春山芋花叶病毒各种花叶病毒花叶病毒花叶病毒烟草花叶病毒花叶病毒各种病毒花叶病毒芜菁花叶病毒0、2～0、80、1～0、20、2～0、50、3～1、00、1～0、30、2～1、00、2～1、00、7～0、80、57、5无病毒植株得鉴定237、5、1指示植物法病毒指示植物鉴定法就就是利用病毒在其她植物上产生得枯斑和某些病理症状,作为鉴别病毒及病毒种类得标准,有时该法也称枯斑测定法。病毒症状特征指示植物表7-5植物一些病毒病害症状和指示植物马铃薯X病毒(PVX)轻重不同得花叶和环斑,因株系而异千日红,地霉松,指尖椒7、5、2抗血清鉴定法24凡能刺激动物机体产生免疫反应得物质,称为抗原。抗体则就是由抗原刺激动物机体得免疫活性细胞而生成得,她存在于血清或体液中,为一种具有免疫特性得球蛋白,能与该抗原发生专化性免疫反应。常用得有试管沉淀试验、凝胶扩散反应、免疫电泳技术、炭凝集试验、荧光抗体技术、酶联免疫吸附法、免疫电子显微镜法等。7、5、3酶联免疫法25酶联