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DB34DB34/T2905—2017辣椒疫霉菌检测鉴定方法MethodfordetectionandidentificationofPhytophthoracapsici2017-06-30发布2017-07-30实施安徽省质量技术监督局发布I本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。1征及其所引致病害的症状参见附录A。将上述某一种基础培养基与去离子水按1:9比例稀释，在121℃下高压蒸汽灭菌20将某一种基础培养基冷却至50℃~60℃时，按每升培养基需青霉素50mg、五氯硝基苯50mg、2将新鲜病组织表面用自来水冲洗干净，稍凉干，从病健交接部位将病组织块，沿培养皿周缘直接置于选择性培养基平板上，在培养箱中25℃~28℃条件下培养2d～3d，待观察培养4d左右的菌落形态，并沿菌落边缘挑取少量菌丝，置于显微镜下观察菌丝的形态：如选取与取样作物相同品种的健康植株或组织5株（个），先在接种部位用接种针扎几个小孔，再切取经纯培养的分离物菌丝块回接到创伤部位，也可用浓度为5×103个/mL的游动孢子悬浮液接种，接种后均需用浸水棉球保湿2d～3d，在25℃~28℃的条件下培养5d左右，观测是否发病、病害3以5’-GTCTTGTACCCTATCATGGCG-3’和5’-CGCCACAGCAGGAAAAGCATT-3’为特异性引物，每25μL经形态学观测，与对照菌株和附录A描述的形态相似的分离物可初步确诊为辣椒疫霉；经PCR扩增，能扩增出与对照菌株相同的560bp单一明亮条带4菌丝形态简单，无隔、多核、多分枝，粗3μm～10μm。孢囊梗不规则分枝或伞形分枝，细长，），≥5μm，但也有部分孢子囊乳突较薄；孢子囊基部圆形或渐尖；孢μm，平均长度＞20μm；孢子囊成熟后直接萌发或释放游动孢子，球形或不规则形异宗配合，配对培养易产生大量球形藏卵器，直径20μm为棍棒状，少数为圆锥形。雄器球形或圆筒形，围生，无色，（10μm～20μm）×（9μm～14μm）。其鉴别特征为：乳突明显，脱落孢子囊具长51.将菌丝进行低温冷冻干燥处理(﹥24h保存在-20℃

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