大二上- zs生理学实验

实验三、坐骨神经腓肠肌标本制备及不同强度和频率刺激对肌肉收缩的影响

指导教师：韩璐吉林大学生命科学学院一、实验目的1、学会坐骨神经腓肠肌标本的制备掌握制备标本的基本操作技术，掌握蛙类手术器械的使用方法。

2、观察骨骼肌收缩性质不同刺激强度时骨骼肌收缩的反应，不同刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。3、学习微机生物信号采集处理系统的使用二、实验原理一个刺激是否能使组织发生兴奋，不仅与刺激形式有关，还与刺激强度、刺激时间、强度－时间变化率三要素有关。骨骼肌由许多肌纤维组成，刺激强度不同，肌纤维的兴奋性不同，随着刺激强度的增加，收缩强度也增加，当所有的肌纤维都兴奋时，再增加刺激强度，收缩强度也不会再增加。在一定范围内，肌肉收缩幅度与刺激强度成正相关。

阈刺激：生理学中把刚能引起肌肉收缩的最小刺激强度成为阈强度，该刺激即为阈刺激。阈下刺激:<阈强度,腓肠肌不收缩；阈上刺激:>阈强度。概念＜阈刺激阈下刺激＜阈上刺激有效刺激(a)单收缩（twitch）:骨骼肌在受到一次阈上刺激后产生的收缩。(b)不完全强直收缩（pletetetanus）：后一刺激引起的肌肉收缩落在前一刺激引起肌肉收缩曲线的舒张期时，表现为锯齿状收缩波，产生不完全性强直收缩。(c)完全性强直收缩（completetetanus）：后一刺激引起的肌肉收缩落在前一刺激引起肌肉收缩曲线的收缩期时，则骨骼肌处于持续的收缩状态，锯齿波消失，产生完全性强直收缩。三、实验材料和方法1.材料：蟾蜍

2.试剂：任氏液组成：由无机盐和蒸馏水配置而成，每升溶液含NaCl6.5g、KCl0.14g、CaCl20.12g,、NaHCO30.20g、NaH2PO40.01g。任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。可用于蛙的组织、器官润湿和营养。3.器材:蛙板、剪刀、镊子、探针、玻璃分针、神经标本盒、铁支架、微调固定器、张力换能器、计算机、RM6240C生物信号采集处理系统。

四、实验步骤1、双毁髓（脑、脊髓）；2、去下肢皮肤；3、去掉内脏、上肢、头；4、分开两腿；5、在大腿部找到坐骨神经；6、剪去脊柱骨，剪去大腿部分的肌肉，保留膝关节与部分股骨；7、跟腱下穿线并结扎跟腱，游离腓肠肌；8、检查神经活性(锌铜弓刺激)。1、双毁髓（脑、脊髓）；左手握蟾蜍,用拇指按压背部，用食指下压头部前端使头前俯。右手持探针由枕骨沿正中线向脊柱端触划，当触到凹陷处即枕骨大孔.将探针由此垂直刺入,然后将针折向前插入颅腔并左右搅动，捣毁脑组织。而后退针至皮下，针尖向后刺入椎管并左右搅动以破坏脊髓。当蟾蜍四肢松软、呼吸消失则表示脑脊髓被完全毁坏，否则应按上法重复操作。操作过程中要防止毒腺分泌物射入眼内。

2、去下肢皮肤；

腰部皮肤环切，左手夹住脊柱端(注意镊子不要夹住或触及坐骨神经)，右手捏住皮肤边缘，向下剥掉后肢的皮肤。

3、去掉内脏、上肢、头；看到神经丛，在神经丛上缘用粗剪刀剪断脊柱,并将头和前肢及内脏一并剪去。

4、分开两腿；

用粗剪刀纵向剪开脊柱(注意勿损伤坐骨神经)，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿。将分离的标本浸于盛有任氏液的培养皿中。5、在大腿部找到坐骨神经；

腹面向上,用玻璃分针沿脊柱旁游离坐骨神经；背面向上，循坐骨神经沟(半膜肌与股二肌间的裂缝处),找出坐骨神经大腿段;玻璃分针轻轻勾起，剪断其所有分支并一直游离至膝关节后侧。6、剪去脊柱骨，只保留发出坐骨神经的脊髓节段，剪去大腿部分的肌肉，保留膝关节与部分股骨；7、跟腱下穿线并结扎跟腱，游离腓肠肌；8、检查神经活性(锌铜弓刺激)。

仪器连接1．记录不同刺激强度对肌肉收缩的幅度值。2．分别记录下引起肌肉单收缩，不完全强制收缩和完全强制收缩时的刺激频率和收缩幅度（张力）。五、实验结果六、主意事项1、处理蟾蜍标本时，小心蟾酥溅入眼内。2、分离神经时，避免手、金属器械触碰或夹伤神经。3、经常给标本滴加任氏液，保持标本良好的兴奋性。4、股骨要保留一部分（2/3），脊柱保留一段。5、实验过程中保持换能器与标本连线的张力不变。6、连续刺激后让肌肉休息，避免神经肌肉疲劳。7、找准最大刺激强度，不能刺激过强而损伤神经。

七、思考