基于qiaxcel艰难梭菌核糖体分型毒力谱鉴定

基于QIAxcel的艰难梭菌核糖体分型和毒力谱鉴定中国疾病预防控制中心传染病预防控制所医院感染室

吴媛淋病奈瑟式菌生物特性CDI临床表现易感人群革兰阳性杆菌，专性厌氧，人兽共患；毛玻璃样，马粪味；芽胞，抵抗力强致病因子。无病症携带者轻度腹泻致命性伪膜性结肠炎（PMC），并发巨结肠和肠穿孔长期广谱抗生素的使用者高龄，体弱者、免疫力低下者（肿瘤、HIV感染）服用质子泵受体拮抗剂者长期住院治疗等点击添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本艰难梭菌感染的世界分布全球艰难梭菌的爆发流行多数欧洲国家都报道核糖体

027型感染病例KuijperE.,BarbutF.,Eurosurveillance2008,volume13,July2008核糖体027型导致更高的病死率和死亡率欧洲KuijperE.,BarbutF.,Eurosurveillance2008,volume13,July2008截止2008年10月:美国有40个州报道核糖体027型病例美国加拿大

078型最初主要是从猪和牛分离到的；近来，成为引起人类CDI的重要型别，可产生严重的临床表现和高致死率，尤其是引起社区人群的感染动物源和人源的078型几乎是一个clonal，提示它们有共同祖先；猪向人的传播是有可能的；有报道发现零售猪肉有艰难梭菌，也间接证明了这一点Author,yearNo.isolates/No.samplesNo.hospitalsRegion

Time(y)A+B+A-B+A-B-cdt+*PCRribotypeDong,201360/NG1ShangHai1.5252871NGDong,201494/NG1ShangHai2.3633101NGFang,201482/4003cancerZheJiang0.882000001,017,017/1Lam,201210/321HongKong0.1NGNGNGNG002Huang,200974/5871ShangHai1.04313130SHIIHuang,201465/2061ShangHai1.0NGNGNGNGH,012,017Cheng,2011345/35281HCFHongKong1.0345000002,og39,012Cheng,199768/811ICUTaiWan0.468000NGHuang,200975/NG1cancerShangHai0.9502501017,012,AZhu,201457/NG1ZhengJiangNG381450NGHuang,200856/5871ShangHai1.0NGNGNGNGSHII,014Pete,201321/701ChangSha1.09102UN017,012,046#Cheng,200912/1121Beijing0.65340ZR1Chia,2013110/NG1Taiwan6.0704004NGWei,201357/1496Taiwan0.729NGNGNG10,106,45Wang,201431/1241ICUChengdu0.724702001,046,012C.difficile-AssociatedDiseasePressure*

andTransmissionUnitAFewerpatientswithactiveCDI=lowerriskofacquiringCDIUnitBMorepatientswithactiveCDI=higherriskofacquiringCDICDADpressure=1×daysinunitCDADpressure=5×daysinunit*DubberkeER,etal.ClinInfectDis.2007;45:1543-1549.点击添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本艰难梭菌流行规律变迁艰难梭菌动物、食品感染ChangingepidemiologyCommunity-associatedC.difficileinfection(CA-CDI)andhospital-associatedC.difficileinfection(HA-CDI)casesreportedtoHospitalInfectionSurveillanceWesternAustralia(HISWA),2010to2012.

Annualincidenceper100,000populationofC.difficile-associateddiarrhealinQuebecbetween1991to2003(Pepin,Valiquetteetal.2004)C.difficileinretailfoodsIran:2%(13/660)ofrawmeatCanada:12.8%(26/203)ofchickenmeat20%(12/60)ofgroundbeefandvealmeat4.8%(5/119)ofseafoodandfish4.5%(5/111)ofvegetablesTexes:9.5%(23/243)ofporksausagesArizona:42%(74/176)ofsausage,groundbeefandporkNetherlands:1.6%(8/500)ofretailmeatsCostaRica:2%(4/200)ofretailmeatsSwitzerland:0%(0/46)ofmincedmeatFrance:2.9%(3/104)ofready-to-eatsaladsandvegetables1.9%2/105groundbeefSweden:2.4%(2/82)ofgroundbeefAustralia:Wedon’tknow.艰难梭菌感染潜在的传播途径?AdoptedfromCentersforDiseaseControlandPrevention(2013).AntibioticResistanceThreatsintheUnitedStates,2013,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices.?主要致病因子（大分子梭菌毒素）A毒素：TcdA(8.1Kb/308kDa)肠毒素：动物实验中导致大鼠肠道炎症，体液分泌B毒素：TcdB(7.1Kb/270kDa)细胞毒素：细胞培养中表现为细胞毒性tcdC:负向调控tcdD:正向调控tcdE:?毒素分泌有关非产毒株：无PaLoc区(不致病)CdtLoc寡聚体化七聚体heptamers点击添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本艰难梭菌常用分型方法核糖体分型

艰难梭菌分子分型ITS1ITS2核糖体分型

艰难梭菌分子分型毒素分型

艰难梭菌分子分型27型，I-XXVII27型，I-XXVII典型典型*脉冲场电泳PFGE:NAP1和NAP2*限制性酶分析REA:至少100组和大量亚型BI/NAP1/027,toxinotypeIII,clade2,ST1,CDT+，完整基因结构BK/NAP2/078,toxinotypeV，clade5,ST11

艰难梭菌分子分型CladeC-IClade4PaLoc:ST37(017,A-B+)54321PaLocabsent(non-toxigenic))Clade1PaLoc:ST3(001)Clade2PaLoc:ST1(027)Clade3PaLoc:ST5(023)Clade4PaLoc:ST37(017,A-B+)Clade5PaLoc:ST11(078)Dingleetal.2013GenomeBiolEvol6:36-52.艰难梭菌分子分型-MLSTHeetal.NatureGenetics2013;45:109-13.基于全基因组分型，传播流行规律研究Heetal.NatureGenetics2013;45:109-13.基于全基因组的分子流行病学研究点击添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本临床常用厌氧菌培养方法简易厌氧袋培养法厌氧罐（盒）培养法厌氧箱培养法Oxyrase酶平皿培养法气体喷射培养法适于基层简便培养法液体培养法高层琼脂法分离中度敏感或耐氧厌氧菌点击添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本分离培养和鉴定粪-细胞毒实验CTA检测毒素B生化反应厌氧琼脂+选择性培养基PCR紫外灯下发黄绿色荧光API20A酶联免疫EIA检测毒素A、BtcdB16SrRNA所有艰难梭菌表面均表达抗原谷氨酸脱氢酶GDH，商品化盒，但不能区分有/无毒株。MeridianPremierC.difficileToxinA+BELISA,TechLabToxA/BQuikChek,TechLabToxinA/BII,ImmunoCardToxinA&BBDGeneOhmreal-timePCRtest和Cepheid公司的GeneXpertC.difficile快速检测方法商业化应用的CTA（WampoleC.difficileToxinBtest）我们的工作建立艰难梭菌核糖体分型库开展全基因组的分子流行病学建立艰难梭菌毒力谱库研究菌种遗传变异的特征规律科室简介承担课题文章发表学生培养承担多项“十一五”“十二五”国家重大专项,1项国家科技支撑,3项国家自然科学基金,2项国际合作项目,2项中国CDC基金；累计培养研究生10名，其中在读研究生4名；截止2015年11月，累计发表文章20余篇，其中SCI收录7篇；

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