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DB232024-8-30发布黑龙江省市场监督管理局发布请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件起草单位：东北林业大学、佳木斯市孟家岗林场、苇河林业局青山林木种子园、宁安市渤海林木种子园、五常市宝龙店种子林场、鹤岗市林木良种本文件主要起草人：张含国、闫平玉、张磊、孙国飞、潘凤刚、李金泉、石宝英、胡振宇、曹振宇、1红松无性系SSR鉴别技术规程试剂、溶液配制、操作程序、数据记录与统计、判定规则及档案管理下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。dNTP：deoxy-ribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸。2PCR扩增仪；电泳仪（具有恒电压、恒电流功能垂直电泳槽及配套的制胶附件；水平电泳槽及配十六烷基三乙基溴化铵；三氯甲烷；异丙醇；异戊醇；乙二胺四乙酸二钠二水合物；三羟甲基氨基甲标准；核酸染色剂；去离子甲酰胺；溴酚蓝；二苯甲青；甲叉双丙烯酰胺；丙烯酰胺；硼酸；无水乙醇；0.5mol/LHCI溶液：25mL浓盐酸（36%~38%加水定容至500mL。3送检样品宜为一年生针叶，-80℃超低温使用CTAB提取法，或适合SSR指纹技术的商业试剂盒进行DNA提取。琼脂糖凝胶（1%）电泳检测DNA质量并进行浓度测定，稀释至20ng/μL充分溶解后备用。选择使用核心引物进行检测，核心引物信息见附录A.1。当检测出不同无性系差异位点数小于2时，选择使用补充引物进行检测，补充引物信息见附录灌胶拔去梳子后，使用移液器吹吸点样孔，清除气泡和杂质，每一个加样孔点入1μL混合有加样缓冲液4银染9数据记录与统计9.1数据记录将每个扩增位点的等位变异片段大小进行比较，确定样品在该位点的等位变异；纯合位点的基因型数9.2数据统计对送检样品进行分析时，直接进行无性系之间的对比，如果送检样品某个引物位点出现可见的异质性位点上不同个体的基因型(或等位变异)及所占比例。当对送检样品多个个体DNA进在各引物位点的基因型以及样品在各引物位点的等位变异，并统计其在各引物位点的各种基因型（或等位差异位点数差异位点为应建立技术档案，内容包括无性
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