DB34∕T 3861-2021 畜禽血清中黄曲霉毒素B1生物标志物的测定 高效液相色谱法　　

畜禽血清中黄曲霉毒素B₁生物标志物的测定高效液相色谱法I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司(农业农村部猪室)、望江县小月山农业发展有限公司、和县农业农村局、望江县畜牧兽畜禽血清中黄曲霉毒素B₁生物标志物的测定高效液相色谱法25.1.12AFB₁生物标志物标准品AFB₁-Lysine(纯度≥99%)。5.2.1高效液相色谱仪(含荧光检测器、柱温箱)。5.2.7天平(感量0.0001g)。1002223444665886736.2.1.3血清总蛋白含量计算公式见公式(1)、公式(2)、公式(3): (2) 3标准品1002354565706.2.2.3150μL血清白蛋白计算公式见公式(4)、公式(5)、公式(6): 4速顺序分两次各加入1mL水洗涤、1mL甲醇-水溶液(附录A.1.4)和氢氧化铵(附录A.1.8)洗涤，在0.5mL甲醇中洗脱后干燥，用1mL甲酸-水溶液(附录A.1.5)洗脱纯化两次，收集洗脱液，干6.5.2检测波长：激发波长405nm,发射波长470nm。时间%%056.6.1在6.5色谱条件下，将150.0μLAFB₁生物标志物标准工作溶液(附录A.2.2)按浓度从低到5高依次注入高效液相色谱仪，AFB₁生物标志物标准品色谱图参考附录B;待仪器条件稳定后，以目标物质的浓度为横坐标(x轴),目标物质的峰面积为纵坐标(y轴),对各个数据点进行最小二乘线性拟合，标准曲线见公式(7):b——标准曲线的截距。6.6.2标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果样本含量超过标准曲6.7空白试验不加入标准品，按6.3、6.4的步骤做空白实验。确认不含有干扰待测组分的物质。7测定结果的表述样品分析见公式(8):X——待测血清白蛋白中AFB₁生物标志物的含量，单位为皮克每毫克(pg/mg);Ci——待测物进样液中AFB₁生物标志物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);V——定容体积，单位为毫升(mL);m——150.0μL血清中白蛋白含量，单位为毫克(mg)。8重复性血清样本中AFB₁生物标志物含量在重复性条件下获得的绝对差值不得超过算术平均值的15%。9检出限与定量限本标准血清AFB₁生物标志物的最低检出限为0.02ng/mL,定量限为1.0ng/mL。10回收率添加浓度在0.5ng/mL～1.0ng/mL时，回收率在75%～94%之间。6A.1.1磷酸二氢铵(20mmol/L,pH7.2水调pH至7.2,混合均匀。A.1.2叠氮化钠(0.001%):称取叠氮化钠1.0mg,溶于100mL水，混合均匀。A.1.3甲醇-水溶液(25+75):分别量取250mL甲醇和750mL水，混合均匀。A.1.5甲酸-水溶液(2+98):分别量取2氯化钾，用980mL水溶解，然后用盐酸调整pH至7.4,最后用水稀释至1000mL,混合均匀。A.1.8氢氧化铵-水溶液(1+99):分别量取10mL氢氧化铵和990mL水，混合均匀。A.2.1标准储备溶