微生物培养与应用练习答案

微生物的实验室培养

--巩固练习

1.微生物的实验室培养

1.（2017•江苏二模）下列有关菌种保藏的叙述中，错误的是（）

A.频繁使用的菌种，可用斜面培养基保藏在4℃的冰箱中

B.临时保藏菌种的培养基不需要定期更换

C.长期保藏的菌种，需要降低代谢和变异发生概率

D.长期保藏菌种时，可各取1mL灭菌甘油和培养菌液混合后保存在冷冻箱中

故选：Bo

2.（2017•南通模拟）某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理.下列叙述正确

的是（）

A.灭菌后的培养基要冷却到室温后才能倒平板

B.本研究适宜采用稀释涂布平板法进行接种

C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养

D.培养时要将培养皿倒置是防止空气中杂菌污染

故选：Bo

3.（2019秋・南京期中）下面不符合微生物培养基配制原则的是（）

A.配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例

B.任何培养基都不能没有有机物

C.培养基的PH要适宜

D.异养微生物的培养基至少要有一种有机物

故选：Bo

4.（2020•江苏二模）“渥堆”是普洱茶生产过程中的一道特殊工月，是形成普洱茶品质

特征最关键的一步。在“渥堆”过程中，曲霉、青霉、酵母菌、细菌等微生物的活动使

茶叶所含茶多酚等成分发生了一系列复杂的物埋、化学变化，促使了普洱茶甘滑、醇厚

和陈香等良好品质特征的形成。请回答下列问题：

（1）牛肉青蛋白脏培养基可用于“渥堆”茶样中细菌的分离，其中的牛肉膏、蛋白陈可为

细菌生长主要提供O配好的培养基常用法灭菌。接种培养后可根据

颜色、形态、大小等特征及菌体革兰染色情况、细胞形态特征等进行初步鉴定。

（2）图1为“渥堆”茶样分离出的某种微生物亚显微结构示意图，可根据图中（填

序号）结构判断其肯定不是细菌。

图1图2

(3)茶多酚中的儿茶素(C)有一定的抗菌作用，但作用较弱。研究人员用稀土离子Yb3+

对儿茶素(C)进行化学修饰，形成配合物Yb3+-C,并探究其抗菌效果。将金黄色葡

萄球菌制成菌悬液，分别加入等量的C、Yb3+和一定浓度的Yb3+-C,测定24h内金黄

色箭萄球菌存活数量变化(用A600值表示，数值越大，表示细菌数量越多)，结果如图

2所示。

由图可以看出，能最有效缩短灭菌时间。

研究人员利用透射电镜观察了各组金黄色葡萄球菌细胞内的超微结构，结果显示：

(a)未加抗菌剂：细菌菌体较小，其细胞质分布均匀：

(b)C处理：细胞壁和细胞膜等结构不光滑，略显粗糙：

(c)Yb3+处理：细胞质出现较明显的固缩及空泡化现象；

(d)Yb3+-C处理：细胞壁及细胞膜等结构发生破裂，细胞质出现了严重的固缩及空泡化

现象。

由此可见，儿茶素(C)作用的主要位点是,推测Yb3+-C具有更强抗菌作用的

机理是◎

故答案为：

(1)碳源、氮源高压蒸汽灭菌菌落

(2)②③⑥⑦

(3)Yb3+-C,细胞壁和细胞膜

儿茶素作用于细胞表面，使得Yb3+更容易进入细胞内，破坏细胞结构，导致细胞死

亡

5.(2019•扬州期末)微生物絮凝剂不仅具有絮凝沉降废水的作用，同时具有自身降解的

能力，是一类无毒、安全、环保、不造成二次污染的絮凝剂。科研人员通过生物技术筛选稳

定、高效的微生物絮凝剂产生菌。请回答问题：

(1)将取自玉米地的土壤，加入制成菌液，将菌液接种到培养基中进行富集培

养，再通过法接种到固体培养基，数天后，挑选出生长较好、表面光滑带黏性的

单个菌落，分别接种到液体培养基中继续培养。

(2)测定初选菌落对高岭土悬液的絮凝效果，挑选出的菌株，通过测定该菌株

基因序列，与产絮凝剂菌株系统发育进化树进行比对，确定为酱油曲霉。

(3)为进一步确定起主要絮凝作用的是菌体细胞还是菌体释放到发酵上清液中的物质，

分别测定发酵液中不同成分对高岭土悬液的絮凝效果，结果如图lo

95

%80

、65

*A上清液

50

嶷B菌体细胞壁慈液

我35C曲体细胞内液

20D培养球

0

图1

其中D组的作用是排除O实脸结果表明0

(4)为研究微生物絮凝剂对生活污水中有机物去除效果的影响因素(有机物污染程度用

生化需氧量COD表示)，科研人员又进行了如下实脸。

i.向生活污水中加入4mL微生物絮凝剂，均分为多组，pH值分别调到1〜9,将温度设

定为该菌最适生活温度30℃,培养后取样测定COD去除率。结果见图2。

ii.调节生活污水pH值为7,均分为多组，分别加入不同剂量的微生物絮凝剂，将温度

设定为30℃,培养后取样测定COD去除率。结果见图3。

4・

5o、

40・

4o35

%%3O

、3o、2■

、

*能•

繇

蕊20

2O

々

米

—5

10,、10

5

0

123456789100123456

pH投加埴(ml)

图2pH值对COD的去除效果的影响图3投加疑值对COD的去除效果的影响

①由结果可知，COD去除效果最佳的条件是

②上述实险结论不严谨，请从实脸设计中寻找原因，

故答案为：

(1)无菌水稀释涂布平板(或平板划线)

(2)絮凝率最高

(3)培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰

起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质

(4)①pH为7,投加量为1nil

②答案一：4mL微生物絮凝剂下测得的最适pH不一定是该菌生活的最适pH,应该是各

组pH下均设系列投放量，或各组投放量下均设系列pH

答案二：ii实险中加入不同剂量的微生物絮凝剂导致各组实验的液体总量存在差异

6.(2019秋•苏州期末)某养鸡场出现大量疑似沙门氏菌(SM)病，利用氨羊西林、强力

霉素等常用抗生素治疗后，鸡的死亡率没有明显降低。为此，研究人员开展了下列实脸。请

分析回答：

俵死内肉汤麦康凯_£检测药敏

柄儿玛培养液琼脂平板►鉴定实验

(1)过程①中，须将接种环进行处理后，从病死鸡的肝脏、小肠、盲肠等处采

集内容物，接种到肉汤培养液培养24h。

(2)过程②中，将雕取的肉汤培养液利用法接种、培养24h后，根据的

颜色、大小、形状等特征进行初步鉴定，挑选出基本符合沙门氏菌特征的单个菌落再接种培

养备用。

(3)研究人员取定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片；分别选用多种抗生

素，按照不同抗生素治疗量的比例配制药液，浸泡等量小纸片，干燥后备用；取沙门氏菌，

用生理盐水制备成悬液后，取适量菌悬液均匀涂布在平皿上；取不同抗生素处理的小纸片贴

在平皿上，培养24h后，测量每种小纸片周围出现的透明图直径(mm),如下表：

药物名称林可霉素强力霉素阿奇霉素恩诺沙星氨羊西林头施克洛阿米卡星

小纸片169722.51015.520

小纸片21175.51971018

小纸片388526.591921

在治疗沙门氏菌病时，应首选——种药物。

(4)为了探索治疗沙门氏菌病的新途径，研究人员选用健康的3日龄鸡，每组10只，尝试

利用SDZ噬菌体进行试验，研究方案如下表：

组别ABCD

注射生理盐水(pL)200100

注射SDZ噬菌体(匹)100100

注射沙门氏菌液(pL)100

一段时间后检测各组鸣的存活数依次为10只、10只、4只、9只。请分析：

①设置B组的目的主要是为了说明__________________C组应注射_____________O

②本实脸说明________________,且可以避免因长期使用抗生素而产生___________________0

故答案为：

(1)(灼烧)灭菌

(2)划线平板法或稀释涂布平板菌落

(3)恩诺沙星、阿米卡星

(4)①SDZ噬菌体对鸡无毒性100HL生理盐水和100HL沙门氏菌液

②SDZ噬菌体可有效治疗沙门氏菌病抗药性

2.纯化大肠杆菌

1.（2018春•沐阳县期中）F列关于斜面接种目的描述中，错误的是（）

A.菌种转移B.扩大培养菌种

C.保存纯净菌种D.获得单个菌落

故选：Do

2.（2016春•兴庆区校级期末）y列不属于菌落特征的是（）

A.菌落的形状B.有无英膜C.菌落的大小D.隆起程度

故选：B

3.（2020春•苏州期末）大肠杆菌是寄生于人肠道内的一种细菌，其代谢产物能与染料伊

红美蓝反应而使菌落呈紫黑色。测定水样是否符合饮用水的卫生标准，常用滤膜法测定

大肠杆菌的总数。滤膜法的大致流程如图1所示。请回答下列问题：

威杯

流再区

城演

诧瓶

（1）据题意分析，图中培养基除了加入为大肠杆菌生长繁殖提供

营养物质外，还需添加和伊红美蓝。

（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，本实验中所使用的培养皿等玻璃器皿的

常用灭菌方法有.

（3）在无菌操作条件下，将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤

膜法测得伊红美篮培养基上的菌落数平均为124个，紫黑色菌落数平均为29个，推测1L

待测水样中的大肠杆菌总数约为个。

（4）若饮用水中大肠杆菌超标，可引发多种感染。为了研究不同浓度的甲抗生素对A、B

两种大肠杆菌的抑菌效果，做如下实验。

I.取稀释后的A、B两种大肠产菌菌液少许，分别与溶化并冷却至45℃左右的培养基混

匀后倒平板各5个；

II.待平板凝固后，在每个平板中央的培养基里各打一个直径为3mm的孔，并在孔中分别

加入不同浓度的甲抗生素

III.在适宜条件下培养一段时间，可在孔的周围观察到一周清晰区，按图2所示测量清晰区

的直径，数据如表。

甲抗生素浓度〃g/mL5.07.510.015.020.0

清晰区直径/mmA大肠杆菌-581317

B大肠杆菌5791419

①由表中数据可知，甲抗生素对A、B大肠杆菌的增长都有抑制作用，但大肠杆菌

对甲抗生素敏感性较强。判断依据是0

②为了更准确地说明清晰区的出现是因为甲抗生素的作用，本实验还需增设一组在上述平板

孔内加入作为对照。

③本实脸需将上述接种后的平板与在相同条件下培养，以检查培养基灭菌是否合格

以及培养过程中是否受到杂菌污染。

故答案为：

（1）氮源、碳源、水和无机盐；琼脂（或凝固剂）

（2）干热灭菌法（或高压蒸汽灭菌）

⑶2900

（4）①B在甲抗生素浓度为5ug/mL时，B大肠杆菌平板孔的周围出现清晰区，

而A大肠杆菌平板孔的周围没有出现清晰区

②等量的无菌水

③未接种的培养基（或未接种的平板）。

3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1.（2018春•沐阳县期中）采用涂布平板菌落计数法时，将待测土壤样品1g溶于水，经过

反复稀释至10-8gzmL,取1mL稀释液涂布并选择培养分离，计数菌落平均数为50个，

那么1g该土堵样品中含有的菌数为（）

A.5X109B.5X108C.5X|（）-8D.5X10-9

故选：Ao

2.（2015•江苏模拟）在做分离分解尿素的细菌实险时，A同学从对应106培养基上筛选出

大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落.下列有关叙述，出现科学性错误

的是（）

A.甲同学出现这种结果的原因可能是由于土样不同，也可能是操作过程出了问题

B.可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养

基是否受到污染

C.将其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲

同学无误

D.B、C选项的实脸思路都遵循了实验的对照原则

故选：Do

3.（2020・广陵区校级模拟）MICP技术（微生物诱导碳酸钙沉积技太），通过向岩土中注

入某种微生物以及胶结液（尿素和氯化钙溶液），利用该微生物将尿索水解为核离子和碳酸

根禹子，碳酸根离子与钙离子形成碳酸钙晶体，从而将岩土原位固化C某研究人员对该种微

生物进行了分离并在最适生长条件（温度35℃,摇床转速200r/min）下测定了其生长曲线，

结果如图。

细9菌浓度（OD«o）

8

7

6

5

4

3

2

1

0

（注：OD600为样品中蛋白质核酸的浓度，用此指标来代表细菌浓度）

（1）不同微生物培养对pH、氧气、特殊应用物质的要求往往不同，培养巴氏芽施杆菌的培

养基的pH值往往（“高于”“低于”或“等于”）培养霉菌的pH值。微生物接种

的方法很多，最常用的并且可以用来分离纯化计数的是o此研究中巴氏芽匏杆菌能

合成麻酶，从而将尿素分解。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂，培养某

种细菌后,如果PH升高,指示剂将变红,可以初步鉴定该细菌能够分解尿素。

（2）某研究人员筛选到能高效降解尿素的细菌培养基成分如下表所示，此培养基能否用于

植物组织培养_______,理由是_______________________________________。

KH2p04Na2HPO4MgSO4・7H2O葡萄糖尿素琼脂

1.4g2.1g0.2g10g1g15g

将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL

将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL

（3）研究初期，需将土样置于选择培养液中培养24h,目的是o此研究过程中的摇

床转速为200r/min,推测培养巴氏芽抱杆菌过程中需要使用摇床的原因。

（4）通常在培养末期细菌的数量会显著减少，但实脸人员实际测得的细菌浓度（OD600）

下降较慢，最可能的原因是O

故答案为：

（1）高于稀释涂布平板法酚红

（2）不能缺少植物激素（或块少植物需要的各种营养）

（3）对该尿素分解菌扩大培养，使尿素分解菌的浓度增加有利于与空气、培养液中的

营养物质充分接触，从而得到更多的巴氏芽抱杆菌

（4）死亡菌体蛋白质核酸没有分解（或测得的是蛋白质核酸浓度而不是细胞浓度）（或死

亡菌体没有自溶，不能与活菌区分）

4.（2020春♦扬州期末）幽门螺杆菌是栖息在胃黏膜的螺旋形的革及氏阴性菌（革兰氏阴

性菌对万古霉素、两性霉素B等抗生素不敏感），能产生有较强活性的腺酶，该酶能催化

热稳定性低的尿素分解为氮和二氧化碳。因为胃液的强酸性，早期人们都认为没有细菌能在

极酸的胃液中生存，1983年，澳大利亚科学家马歇尔“以身试菌”，提出幽门螺杆菌是胃

炎、十二指肠溃疡或胃溃疡的主要致病菌，这一发现使这些疾病的诊断和根治迎来了曙光。

请根据上述资料回答下列问题：

/1¥4

ABCD

(1)如图1中最可能代表幽匚螺杆菌的结构模式图的是(填写字母)。

(2)提取胃炎患者的稀释液，分离得到幽门螺杆菌并统计其数量，分离时可将

稀释液样品接种在以为唯一髭源的固体培养基上。欲得到预期的实脸结果，接种

过程用到的实验器材(见图2)有(填写字母)。

(3)为研究培养幽门螺杆菌所需的气体条件，某研究小组利用半固体培养基(琼脂含量

3.5g/L)对幽门螺杆菌进行培养。图3代表微生物可能出现的四种生长状态。若培养微生

物是酵母菌，则号试管代表其生长状态，若②号试管代表幽门螺杆菌的生长状态，

则培养幽门螺杆菌的气体最适条件应为下列选项中的。

A.纯氧

B.90%N2、10%CO2

C.无菌空气

D.5%02、85%N2、10%CO2

(4)将上述实脸分离纯化得到的幽门螺杆菌进行犷大培养，采用布氏肉汤基础培养液进

行培养，培养液中需加入混合抗生素(包括万古霉素、两性霉素B等)，其目的是。

(5)目前13c呼气检测是诊断幽门螺杆菌感染的方法之一。其做法走：让病人口服一定

量的13C-尿素，约30分钟后检测待检者呼出的气体中是否含有13co2.13C-尿素呼

吸检测的原理是患者消化道细胞内(填“有”或“无”)曝悔活性，若呼出的

气体中含有13co2,则为的代谢产物。

(6)幽门螺杆菌导致的胃溃疡等疾病可通过同时服用多种抗生素根除。研究小组将浸有

相同浓度不同种类的抗生素圆纸.片置于幽门螺杆菌培养基表面，培养4周，实脸结

果如图4所示。其中圆纸片A、B分别浸过抗生素A和抗生素B,圆纸片C浸过抗生素

A、B的混合物。实脸中圆纸尸D用作实脸对照，实验表明o

故答案为：

(1)B

(2)胃粘膜尿素BCD

(3)@D

(4)防止杂菌污染

(5)无幽门螺杆菌

(6)抗生素A和抗生素B的联合作用增强了杀菌效果

5.(2020春•连云港期末)巴氏芽施杆菌是一类具有较高腺酶活性、能够分解尿素的细菌，

广泛分布在土壤、堆肥及污水中。研究人员拟从土壤样品中分离该类细菌，如图1所示为操

作流程，①〜⑤表示操作步骤。回答下列问题：

图1

图2

(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基

的,及时对培养基分装，并进行灭菌。

(2)步骤②富集培养所使用的培养基按用途来分应为培养基，步骤②的主要目的

是。

(3)在步骤④的培养基中加入试剂，根据培养基颜色变化来鉴定是否为尿素分解菌。

(4)若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为166个、160个、163个，则可以推

测富集接养后的菌液中每毫升含细菌数为个，运用这种方法统计的结果往往较实际

值O

(5)纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法有平板划线去和o如图2

为平板划线法的部分操作步骤，其中正确的是(填选项)。

A.步骤①中倒入培养基后立即盖上培养皿盖

B.步骤③操作时不需要在酒精灯火焰旁进行

C.步骤④中接种环只需第一次划线前灼烧处理

D.将接种后的图4平板放入培养箱中培养时无需倒置

故答案为：

(1)pH高压蒸汽

(2)选择增加巴氏芽花杆菌的浓度

(3)酚红

(4)1.63x106偏低

（5）稀释涂布平板法A

4.分解纤维素的菌

I.（2017春•秀峰区校级期中）下列关于纤维素分解菌分离实脸的说法不正确的是（）

A.通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌

B.从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略

C.该实验用到选择和鉴别培养基

D.在用刚果红染色法中，若招微生物培养在事先加入刚果红的培布基上，出现透明圈的

菌落即所需菌种

故选：D。

2.（2019•江苏）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，下令攀的是（）

A.筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养

B.可从富含腐殖质的林下土填中筛选产纤维素酶菌

C.在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力

D.用产纤维素酶菌发酗1处理农作物利杆可提高其饲用价值

故选：Ao

3.（2018•亭湖区校级模拟）（多选）刚果红染色时，加入刚果红应在（）

A.制备培养基时B.倒平板时

C.涂布时D.长出菌落时

故选：BDo

4.（2019春•锡山区校级期末）用某种纤维素酶催化纤维素水解的实验来探究温度对酶活

性的影响，得到如图所示的实脸结果，回答下列问题：

（1）纤维素酶能够催化纤维素水解成,该产物可与试剂在加热时生成转

红色沉淀。

（2）该实验中以作为因变量；纤维素酶的作用机理是o

（3）若在L之前，乙组实脸温度提高10℃,那么乙组酶催化反应的速率会o

（4）若在t2时向丙组反应体系中增加底物的量，其他条件保持不变，那么在t3时，丙组

产物总量,原因是。

（5）若要进一步探究纤维素酶催化该反应的最适温度，请写出你的设计思路：。

反

应

箱

的(20,0

浓

度(45,0

(7or)

故答案为：

（1）葡萄糖斐林

(2)反应物的浓度降低化学反应的活化能

(3)加快或降低或不变

(4)不变70℃条件下，t2时酶已失活，即使增加底物，反应产物总量也不会增加

(5)在20℃-70℃之间设置较小的一系列温度梯度，重复上述实险，检测反应物浓度随

时间的变化

5.(2020•泰州模拟)某兴趣小组用从不同环境中采集的土康等进行了“分解纤维素的微

生物的分离”实验，实验过程为：土壤取样T选择培养T梯度稀释T将样品涂布到篓别

纤维素分解菌的培养基上T挑选产生透明圈的菌落，实脸结果见下表1：

表1不同土壤微生物对纤维素的分解

组别123

样品松针腐叶花盆土表层草地土菌料

目的菌落类型细菌、其菌细菌霉菌为主

透明圈直径十十十十十十十十十

(1)上述实验过程中“选择培养”的目的是O

(2)与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会其他菌落，

对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30℃培养为佳。

(3)兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A.先培养微生物，再加入刚果红染色；B.直

接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过

程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成,故选方案B.由于刚果红在高

温下容易被分解，应在培养基灭菌(填“前”或“后”)加入。

(4)有小组成员根据表1结果中的,认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，

其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明隅直径、菌落直径和酶

活力的测定，实睑结果如表2:

表2不同H/C值纤维素分解菌晦活性的比较

组别H(透明图直径)C(菌落直径)酶活力

H/C值

(单位：cm)(单位：cm)(U/mL)

12.060.484.31.7

21.680.30