天山雪莲标准

2005年版《中国药典》新增品种天山雪莲花质量标准及起草说明PAGEPAGE24 新疆维吾尔自治区药品检验所起草天山雪莲花药材质量标准及起草说明《中国药典版》2005年版新增品种起草单位：新疆维吾尔自治区药品检验所2003年11月天山雪莲花TianshanXuelianhuaHERBASAUSSUREAEINVOLUCRATAE本品系维吾尔族习用药材。为菊科植物天山雪莲花Saussureainvolucrata(Kar.etKir.)Sch.﹣Bip.Linnaea的干燥地上部分。6-8月花开时采集，阴干。【性状】本品为带茎和叶的花，头部呈圆球状或断碎。茎长2-48cm，直径0.5-3cm,表面具纵棱，中空。茎生叶互生，无柄，排列密集或叶脱落残基，呈卵状长圆形或广披针形，长5-22cm，宽1-5cm，黄绿色或黄棕色，主脉明显，两面被柔毛或稀疏，边缘有锯齿和缘毛。苞叶长卵形或卵形，无柄，中部凹陷呈舟状，黄白色，两面被稀柔毛或无，边缘有锯齿和缘毛，膜质，半透明。头状花序10-42个密集成球状，生于茎顶，无梗，由苞叶包围。总苞片3-4层，等长，披针形，长0.5-1.5cm，宽0.1-0.2cm，表面及顶端被绒毛，外层多呈紫褐色，内层棕黄色或黄白色，边缘暴露处紫褐色。花管状，紫红色，柱头2裂。瘦果圆柱形或稍弯曲，具明显纵棱，长约5mm,直径1mm，灰褐色，顶部有2层羽毛状冠毛，灰白色，长约1.0-1.5cm。气微香，味微苦。【鉴别】(1)本品粉末黄灰色至黄绿色。腺毛多为类棒槌形，头部和柄多为2列细胞，长50-220μm，宽50-60μm。非腺毛为多细胞或单细胞，基部细胞类长方形，先端细胞较细或纽曲，长40μm-300μm。花粉粒球形，直径45-68μm，外壁有刺状突起，具3孔沟。气孔不定式，轴长40-50μm,短轴20-30μm。冠毛为多列性分枝状毛，各分枝单细胞，先端渐尖。花柱碎片具刺状或绒毛状突起。导管呈环纹、网纹和梯纹，直径15-40μm。纤维多呈束。韧皮纤维类长方形或梭形，壁稍厚，胞腔大，具纹孔。(2)取本品粉末0.5g,加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另分别取芦丁和绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml各含5mg和2mg的溶液，作为对照品溶液。再取天山雪莲花对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法同法制备，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述四种溶液各3-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:6:1:2）的上层溶液为展开剂,展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与绿原酸对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1%亚硝酸钠的1%甲醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】水分不得过12.0%（附录ⅨH第一法）。总灰分不得过12.0%（附录ⅨK）。酸不溶性灰分不得过3.0%（附录ⅨK）。【浸出物】照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录ⅩA）测定，用70%乙醇作溶剂，不得少于15.0%。【含量测定】照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4%磷酸（38:62）为流动相；检测波长为340nm,理论板数按芦丁峰计算，应不低于8000。对照品溶液的制备：分别精密称取120℃减压干燥至恒重的芦丁，和绿原酸对照品各适量，加50%甲醇制成每1m含芦丁80ug、绿原酸60ug的混合溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末（过3号筛）约1g,精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含芦丁（C27H30O16）不得少于0.15%；绿原酸（C16H18O9）不得少于0.2%。【性味】维吾尔医：性质，二级湿热。中医：微苦，温。【功能与主治】维吾尔医：补肾活血,强筋骨，营养神经，调节异常体液。用于风湿性关节炎，关节疼痛，肺寒咳嗽，肾与小腹冷痛，白带过多等。中医：温肾助阳,祛风胜湿，通经活血。用于风湿性、类风湿性关节炎，小腹冷痛，月经不调等。【用法与用量】3-6g,水煎或酒浸服。外用适量。【禁忌】孕妇忌用。【贮藏】置阴凉干燥处。天山雪莲花质量标准起草说明【来源】天山雪莲花为新疆维吾尔自治区特有的传统维吾尔药材，有着悠久的民间用药经验。最早收载于阿布·艾里·伊本斯纳《大医典》中[1]，称“夏卡伊克”（shakaik）,“性质，二级湿热，具养颜排毒，与核桃一起研磨，涂抹头发，可乌发。粉末外敷可愈合伤口和疮痈等”。清代赵学敏编《本草纲目拾遗》记载“雪荷花形似莲花，产伊犁西北及金川，亦产巴里坤等处，”“其地有天山，冬夏积雪，雪中有莲，以产天山峰顶者为第一”，“性大热，能补阴益阳”[2]等。作为药材标准最早收载与《新疆维吾尔自治区药品标准》（1980年版）第一册[3],名称为“雪莲花”，功能与主治为通经活血,强筋骨，促进子宫收缩。用于风湿性关节炎，肺寒咳嗽，妇女小腹冷痛，闭经，胎衣不下，麻疹不透，阳痿。用法与用量为0.6-1.5g,水煎或酒浸服。外用适量。《新疆中草药》［４］、《新疆药用植物志》第一册［５］、刘发刘国钧编《新疆雪莲》［６］、《中国民族药志》第一卷［７］、刘勇民沙吾提·艾克木编著《维吾尔药志》（上册）［８］、《新疆维吾尔自治区药品标准》（1987年版）［９］、茹克娅·沙迪克编《维吾尔医常用药材学》（上册）［１０］、《卫生部药品标准中药材》第一册［１１］、《新疆植物志》［１２］第五卷均有详细记载。由于雪莲采挖严重，数量日渐稀少，已列入国家三级保护植物名录［１３］。维吾尔医、中医均用雪莲地上部分，全株带茎，叶，苞叶和头状花。综合维吾尔医、中医，雪莲性热，能祛风胜湿，通经活络血，暖宫散淤，营养神经，调节异常体液。用于风湿性关节炎，月经不调，肾虚腰痛，肺寒咳嗽，阳痿，宫寒腹痛，麻疹不透等症。【名称】新疆产雪莲，汉语名称有“雪莲”、“雪莲花”、“雪荷花”、“天山雪莲花”、“大苞雪莲”及“石莲”等之多，但常用“雪莲”和“雪莲花”。维吾尔语称为“塔格来力斯”（Taghleilisi）,“卡日格里塔格”（Karghiltagh），阿拉伯语称“夏卡伊克”（shakaek），柯尔克孜语称为“考克巴西”（Kokbash），哈萨克语称为“霍加雀普”（hojachop）等。虽然新疆产雪莲称“雪莲”文献记载最早，但西藏、青海产水母雪莲、绵头雪莲及雪兔子等多个品种系同科同属不同种也称为“雪莲”。《卫生部药品标准-藏药第一册》（1995），雪莲花项下列有水母雪莲花SaussureamedusaMaxim或绵头雪莲花Saussurealaniceps。目前新疆产雪莲现行标准为《卫生部药品标准中药材》（1991）第一册，名称为“天山雪莲花”，故暂沿用“天山雪莲花”为标准正名。【原植物】天山雪莲花为菊科风毛菊属雪莲Saussureainvolucrata(Kar.etKir.)Sch._Bip.Linnaea［１２］。为多年生草本，高5-50厘米。根粗壮，深褐色，根茎密被棕褐色死叶分解的纤维。茎直立，粗壮，直径2-4厘米，中空，无毛。叶密集，基生叶和茎生叶叶质厚，绿色，长圆形或卵状长圆形，长达14厘米，宽2-3厘米，先端钝或稍微渐尖，基部向下延长半抱茎，无柄，两面无毛或粗糙，被有多数有光泽的腺体，沿缘较密，下面中脉禾秆黄色，明显，沿缘有锯齿状的小齿，齿端具软骨质的尖；最上部叶苞片，增宽或膨大，通常长超出花序的1倍，宽3-7厘米，椭圆形或宽椭圆形或近圆形，常呈舟状，膜质，淡黄绿色，具多数脉，无毛，沿缘具较稀疏的齿，齿端长渐尖，头状花序10-30个生于茎端，无梗，密集成球状常为增宽的苞叶包被；总苞宽种状或半球形。长1-1.2厘米直径约10毫米，被稀疏的白色长柔毛；总苞片3-4层，近等长，披针形或长椭圆形，长达10毫米，宽1.5-3毫米，先端急尖，常沿上部边缘有稀疏的小齿，同时具黑边或整个黑色，被白色长毛，主要在上半部，特别是在顶端较密；小花暗紫色，长达1.5厘米，细管部长8毫米，稍长于增宽的檐部，檐部先端5裂至中部，裂片线形，长3.5毫米。瘦果圆柱形，长达6毫米，淡褐色，具纵棱，冠毛2层，白色或黄棕色，外层刚毛少数，短，长达5毫米，短羽状或糙毛状，内层刚毛长羽状，长1-1.2厘米。花果期6-8月。生境野生于高山冰碛石和流石滩石隙，高山草甸悬岩峭壁石缝，海拔2400-4100米。主产地新疆天山一带的和静，巩留，特克斯，尼勒克，库车，阜康，乌鲁木齐，奇台，青河，可可托海，巴里坤，塔什库尔干，乌恰等县市。国外俄罗斯（西伯利亚），蒙古，哈萨克斯坦，吉尔吉斯斯坦（天山）也有分布。【采收加工】开花初期摘取地上部分阴干，置纸箱中于干燥处保存。随气候和海拔高度不同，采收期略有不同。本品质脆，易破碎，不宜用麻袋或编织袋包装。【性状】按实际收集14批不同产地样品外观性状描述。本品多为带茎和叶的花，头部呈圆球状，少部分叶脱落或苞片脱落或球状花苞断碎或管状花败落、羽毛状冠毛飘散。商品药材叶和花的碎片较多。当年货茎淡黄绿色至黄白色，叶互生绿色，排列密集，苞叶淡白绿色至黄白色；陈货整个植株呈淡黄棕色至黄棕色，叶脱落较多，有时可见破碎的花、叶和羽毛状冠毛。茎一般长5-40cm，直径0.5-2cm,表面具纵筋棱，无毛，中空，有的可见叶已脱落的残基。叶质厚，无柄，完整叶呈卵状长圆形或广披针形，长7-22cm，宽1-5cm，主脉明显并具纵棱线，主脉两侧各有三条清晰的侧脉，主脉基部宽0.4-1.5cm，叶两面被柔毛或稀疏，边缘有锯齿和缘毛。叶片与苞叶之间有2-3层过渡的半革质半膜质叶片，黄白色至淡绿色。苞叶长卵形或卵形，中部凹陷呈舟状，两面被稀柔毛或无，边缘也有锯齿和缘毛，膜质，半透明。头状花序10-42个密集成球状，生于茎顶，无梗，由数层大形叶状苞叶包围。总苞片3-4层，长椭圆形或披针形，长0.5-1.5cm，宽1-2mm，外层多呈紫褐色，外表面及顶端被绒毛，内层黄绿至棕黄色，边缘暴露处紫褐色。花呈管状，花冠紫红色，花药紫色，雌蕊柱头2裂。瘦果圆柱形，灰褐色，长约5mm,直径1mm，具明显纵棱，稍弯曲，顶部有2层灰白色羽毛状冠毛,长0.5-1.5cm。因采集期多为开花初期，成熟瘦果少见，未成熟瘦果微小或已脱落飘散。鲜货气微香，陈货气微，味微苦。形状特征测量值见表1。表1样品主要形状特征测定值（单位：cm,n=8）编号产地 茎叶苞叶球状花苞头状花 长直径长宽长宽直径朵1.FK-99阜康5-14,0.7-1.05-11,1-2.54-10，1.5-4.52-6，16-302.GL-02巩留5-15,1.0-2.010-17,1-38-18,4-75-9，23-403.HJ-02和静6-14,0.7-1.27.5-17,1.5-4.55-17,2-64-7，14-364.KC-02库车25-38,1-210-17,3-59-14,3.5-75-7，12-255.HJ-02和静2-16,0.6-1.511-16,2-3.510-18,3.5-74-7，22-386.GNS-02巩乃斯8-24,0.5-110-13,2-3.510-14,4-82.5-7，18-347.BLK-02巴里坤1-8,0.5-19-14,1-2.58-17,3-52.5-6，25-348.QH-02青河18-39,1-2.58-14,2.5-3.58-14,2.5-54-9，24-369.KKTH-02可可托海25-40,2-38-14,2-310-17,3-55-10，28-4010.TKS-03特克斯11-48,0.8-210-21,2.5-4.88-11,3.5-6.53-5，20-4211.NLK-03尼勒克9-26,0.8-17-17,2-4.57-13,3-82.5-5，16-3212.GL-03巩留10-22,1-28-14,2.5-46-12.5,2.5-85-8，16-3013.SXG-03水西沟14,1.2___,3-76-8,4-581814.SXG-03水西沟13,26-10,3-47-8,4-5716(栽培)平均X【化学成分】(1)黄酮类成分目前已从雪莲花中分离到：芦丁（Rutin）槲皮素（quercetin）,高车前素（hispidulin）,4,5,7-三羟基-3,6二甲氧基黄酮（jaceosidin）,槲皮素-α-L-鼠李糖苷，柯伊利素，柯伊利素-7-葡萄糖苷，洋芹素-7-葡萄糖苷，木樨草素（luteolin）,木樨草素-7-葡萄糖苷等11种黄酮类化合物。（2）倍半萜内酯类李瑜等和贾忠建等报道了雪莲花含氢广木香内酯，二氢去氢广木香内酯，大苞雪莲内酯（involucratolactone）,大苞雪莲内酯-8-β-葡萄糖苷，11α13-dihydrodesacylcynaropicrin,3α-氢基，11β,13-二氢去氢广木香内酯（3α-OH,11β,13-dihydrodehydrocostuslactone）及它的8位β葡萄糖苷等7个倍半萜类化合物，均属愈创内酯型。（3）其它天山雪莲花含倍半萜内酯类生物碱，既大苞雪莲碱（involucratine）还有正丁基-β-D-吡喃果糖苷（n-Butly-D-fruetopyranoside）紫丁香苷（syringin）,多糖及挥发油等［１４-２１］。 【鉴别及化学成分测定】陈玉婷等作了天山雪莲花，绵头雪莲(S.lanicepa)，水母雪莲(S.meduz)和西藏雪莲(S.tridactyla)等4个种粉末显微及薄层色谱，天山雪莲花与其它三种区别点是全株不被长绵毛。李伟等用薄层扫描法测定了雪莲中芦丁含量为0.171%。1987年版《新疆维吾尔自治区药品标准》采纳了磷钼酸钨—硫酸锂比色法测定雪莲注射液总黄酮的含量，其限量为5mg/ml±10%，并对所含生物碱，黄酮类成分进行了试管理化鉴别。苏来曼·哈力克等对雪莲注射液和雪莲口服液采用硝酸铝—亚硝酸钠比色法进行了测定，结果总黄酮平均含量分别为3.0mg/ml和1.7mg/ml，并增加了芦丁和雪莲药材作对照的薄层色谱鉴别，其部颁标准采纳了该方法。朱晨等用比色法测定了野生和种植雪莲总黄酮平均含量分别为3.0%和4.4%。俞敏倩等用HPLC法测定了雪莲中芦丁和紫丁香苷平均含量分别为0.0704%和0.0232%.综上所述，从过去二十多年的研究文献资料看，目前，已从天山雪莲花中提取，分离，鉴定11种黄酮化合物，6种愈创内酯型倍半萜化合物，一种倍半萜类生物碱，正丁基—β—D—吡喃果糖甙，紫丁香甙，多糖，挥发油等化学成分［２２-２９］。【鉴别】(1)该项为天山雪莲药材粉末显微鉴别。分别取不同产地大小不一而完整雪莲花各8朵，研成细粉，取少量置载玻片上，加透化剂水合氯醛试液或醋酸甘油试液适量，加盖玻片，置显微镜下观察，记录、绘图及拍照即得。本品粉末黄绿色至黄灰色。气孔为不定式，轴长40-50μm,短轴20-30μm。非腺毛为多细胞，基部细胞类长方形，先端细胞较细或扭曲，较长，40μm-300μm；腺毛类棒槌形，头部和柄多为2列细胞，长50-220μm，宽50-60μm。冠毛碎片较多，马尾状，单细胞分枝众多，形状类似单细胞非腺毛，长短不一。花粉粒多见，球形，直径45-68μm，外壁有刺状突起，具3孔沟。柱头和花柱碎片具绒毛状或刺状突起。导管环纹，网纹和梯纹，直径15-40μm。纤维呈束，类长方形，壁稍厚。韧皮纤维类长方形或梭形，壁稍厚，胞腔大，具纹孔。见图1另偶见分泌细胞，腔内充满黄棕色分泌物、石细胞、种皮表皮细胞及淀粉粒等，因不易见，未列入正文。叶横切面：上表皮细胞椭圆形或类长方形，排列整齐，外壁稍厚，可见腺毛和非腺毛残基，叶肉细胞不规则2-6层，主脉明显向下凸出，上表面梢凹，维管双韧型，通常为3-7个。叶主脉横切面简图，见图2。（2）该项为天山雪莲药材的薄层色谱鉴别。采用薄层色谱法，以芦丁和绿原酸对照品及天山雪莲花对照药材同时作对照，对雪莲花进行了薄层色谱鉴别试验，结果色谱斑点清晰稳定，专属性强，便于识别。置紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与绿原酸对照品和对照药材色谱相应的位置上，显淡蓝色的荧光斑点，而芦丁荧光不明显；如将该色谱板置自然光下放置一段时间，芦丁和绿原酸对照品斑点也可显现，但喷以1%亚硝酸钠的1%甲醇溶液后，电吹风加热片刻，色谱斑点更加清晰。薄层色谱图见图3。曾取供试品4g，用65%乙醇40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥去乙醇，残渣用20ml水溶解，，加水饱和正丁醇提取两次，每次40ml，正丁醇提取液用水洗涤2次，每次50ml，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芦丁和绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg和5mg的溶液，作为对照品溶液。再取天山雪莲花对照药材4g，按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（25：40：22：10）在5～100C放置的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇溶液，在1050C加热至斑点显色清晰，结果芦丁Rf值偏低，而绿原酸Rf值更低，且斑点不清晰。薄层色谱图见图4。曾试过的展开剂有醋酸乙酯-甲酸-36%醋酸-水（5:3:1:1）上层,醋酸丁酯-甲酸-水（7:2.5:2.5）上层,醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）等，结果均不十分理想。在以上试验当中，我们新发现天山雪莲花有绿原酸成分，且用多种展开剂和不同薄层板，均可见绿原酸斑点，说明天山雪莲花含绿原酸成分。薄层色谱图见图5至图8。进一步提取、分离和鉴定工作随后进行。【检查】杂质按（附录ⅨA）规定测定，因药用地上部分，除有两批带有少量根外，其余均未见非药用部位、泥沙及其它异物，故未列入正文。水分分别取14批供试品适量，按（附录ⅨH）第一法规定测定，水分含量结果为7.71%-10.36%,平均值为8.50%(n=12)。暂定水分应不得过12%。测定结果见表2。总灰分分别取12批供试品适量，按（附录ⅨK）规定测定，结果总灰分量为8.13%-11.92%,平均值为8.69%(n=12)，暂定总灰分应不得过12%。测定结果见表2。酸不溶性灰分分别取12批供试品适量，按（附录ⅨK）规定测定，结果酸不溶性灰分为0.22%-2.42%,平均值为1.19%(n=12),暂定酸不溶性灰分应不得过3.0%。测定结果见表2。浸出物测定天山雪莲花传统服用方法多为水煎或泡酒，且雪莲制剂如雪莲注射液、雪莲口服液、复方雪莲蝮蛇酒、雪莲药酒和雪莲灵芝补酒均以稀醇或白酒提取。故选用热浸法，分别用70%乙醇、甲醇和95%乙醇作溶剂，取编号FK-99样品适量按（附录ⅩA）规定测定浸出率，结果分别为20.88%＞15.32%＞12.68%，故选用热浸法，以70%乙醇作提取溶剂。分别取12批供试品适量，按上述规定测定浸出物，结果为17.44%-31.38%,平均值为23.87%(n=14),暂定浸出物应不得少于15.0%。测定结果见表2。表2样品水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物测定结果（n=2）编号水分(%)总灰分(%)酸不溶性灰分(%)70%乙醇浸出物(%)1.FK-997.9711.922.4220.882.GL-028.448.670.6626.173.HJ-029.299.891.0126.684.KC-027.7110.031.2417.445.HJ-0210.369.570.2221.706.GNS-028.248.790.7928.517.BLK-028.208.130.6831.388.QH-027.849.000.7923.229.KKTH-027.297.380.5620.8410.TKS-038.0011.772.3525.3011.NLK-039.8011.411.5121.5812.GL-038.529.522.0122.7313.SXG-037.82______26.5614.SXG-03J8.65______29.22平均值8.508.691.1923.87【含量测定】前述文献报导，天山雪莲花药材主要含芦丁、槲皮素、高车前素,柯伊利素，木樨草素等黄酮类，大苞雪莲碱等倍半萜内酯类，还有紫丁香苷、多糖等成分。含量测定多应用比色法测定总黄酮含量为指标，缺乏专属性。高车前素、柯伊利素及大苞雪莲碱等无对照品可供用于测定。槲皮素、木樨草素和紫丁香苷经用适宜的流动相考察，可以得到分离，但量微，不适宜作含测指标。在薄层色谱分析中，我们新发现雪莲花含绿原酸，且量较多，并做了确证试验。为保证天山雪莲花药材质量的可控性，应用RP-HPLC法对其所含成分芦丁和绿原酸同时进行了测定，结果满意，已列入正文。另以无水葡萄糖作对照，苯酚-浓硫酸比色法对雪莲总多糖进行了考察，测定结果雪莲总多糖含量较低，方法较繁琐，仅供参考，该项暂未列入正文。1．仪器与试药 仪器：Waters1525高效液相色谱仪,Waters2487DualWavelenthDetector,Waters717PlusAutoSampler;Breeze色谱工作站;色谱柱：InertsilODS-3,4.6×250mm,5μ(Japan);TU-1221型紫外-可见分光光度计（北京通用分析仪器总厂）,939型薄层制板器（重庆南岸贝尔德仪器技术厂），薄层板厚度0.3mm（自制）,超声波清洗机KT-1000W（山东荷泽华康标准仪器厂），硅胶G,GF254薄层预制板（化学纯，青岛海洋硅胶干燥剂厂），厚度0.22-0.25mm；双光束紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）。试药：芦丁对照品（批号：0880-9705，供含量测定用），绿原酸对照品（批号：110753-200212，供含量测定用），木樨草素（批号：111520-200201，供含量测定用），槲皮素（批号：10081-9905，供含量测定用），紫丁香苷（批号：111574-200201，供含量测定用），无水葡萄糖（批号：0883-9501，供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所，天山雪莲花药材14批次，收集于不同产地，编号前述。经苏来曼·哈力克主任药师与中国科学院新疆生态地理研究所沈观冕研究员鉴定均为SaussureainvolucrataKar.etKir.Sch.﹣Bip.Linnaea,符合卫生部药品标准中药材第一册（1991）有关各项规定。溶剂：甲醇（色谱纯），水（重蒸水），磷酸，苯酚，浓硫酸等均为分析纯。2.天山雪莲芦丁和绿原酸的HPLC法含量测定(1).色谱条件的优化确定检测波长的选择分别取样品、芦丁及绿原酸对照品，用SPD-M10A二极管阵列检测器从190nm-370nm扫描，结果绿原酸在327nm处有最大吸收；芦丁在359nm处有最大吸收，根据不同检测波长的比较，在340nm波长处芦丁和绿原酸的峰面积较理想，本文选择340nm为两个成分的同一检测波长。对照品和供试品光谱及色谱图见图4,5，6。流动相基线噪音图见7。色谱条件及流动相的优化色谱条件，色谱柱：InertsilODS-3,4.6×250mm,5μ(Japan);流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（38：62）检测波长：340nm，柱温：40℃，流速：1.0ml/min流动相的优化，参考有关文献及质量标准［31］，比较了不同系统和流动相比例，如甲醇-水-乙氰-冰醋酸（30:57.5:10:2.5），乙氰-[水:磷酸(100:1)]（40:60），甲醇-水-磷酸(50:50:0.2)等，效果不理想，不能同时满足芦丁和绿原酸的很好分离。甲醇-0.4%磷酸溶液的比例经调试(35:65,40:60,45:55),最终确定甲醇-0.4%磷酸溶液（38:62）为流动相。结果芦丁和绿原酸峰得到较好分离，且保留时间合适。(2).系统适应性试验取供试品适量（编号:GL-02），按上述色谱条件测定，计算柱效，分离度，理论板数及拖尾因子，结果满意。测定结果见表3。表3系统适应性试验测定结果ResultsofSystemSuitabilityTest成分理论板数拖尾因子分离度保留时间componentscolumnefficiencytailingfactorresolutionretentiontime/min绿原酸57861.114.925chlorogenicacid芦丁83381.063.5816.117rutin(3)供试品前处理条件考察提取溶媒的选择取供试品(编号:GL-02)适量，分别加甲醇，50%甲醇和70%乙醇，按上述色谱条件测定，结果用50%甲醇，芦丁和绿原酸的提取率最高，故选用50%乙醇作为提取溶剂。测定结果见表4。提取时间的考察取供试品(编号:GL-02)适量，以50%甲醇作为提取溶剂，并按10分钟，20分钟和30分钟不同时间超声提取，按上述色谱条件测定，结果10分钟即能提取完全。测定结果见表5。表4不同提取溶剂与峰面积值及含量提取溶剂取样量（g）绿原酸峰面积含量(mg/g)芦丁峰面积含量(mg/g)甲醇 1.0037 1541658 2.99 694829 2.1650%甲醇 1.0023 2481847 4.827998033 3.01270%甲醇 1.0058 23126504.50996846 3.10表5不同提取时间与峰面积值及含量提取时间（min）取样量（g）绿原酸峰面积含量(mg/g)芦丁峰面积含量(mg/g)10 1.0135 2444990 4.72 10367823.2120 1.0108 2417437 4.6810078803.1230 1.0111 24496294.74 10025623.10 (4).绿原酸峰及保留时间的确证试验取供试品(编号:KKTH-02)适量，精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入50%甲醇50ml，超声处理10分钟，取续滤液10μl，按上述色谱条件测定。然后，取上述续滤液，精密加入绿原酸对照品适量同法测定，结果绿原酸峰面积较前者呈线性增加，而保留时间不变。根据该试验及前述薄层色谱试验结果，可确定该峰即为绿原酸峰。测定色谱图见图7，8。(5).线形关系考察精密称取绿原酸对照品10.13mg及120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.10mg置10ml棕色容量瓶中，加50%甲醇适量溶解并定容至刻度，摇匀，制成每ml含绿原酸1.013mg及芦丁1.010mg的储备液，精密吸取此储备液0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml、1.6ml、2.0ml、置10ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成每ml含绿原酸0.02026μg、0.04052μg、0.06078μg、0.1013μg、0.16208μg、0.2026μg及芦丁0.0202μg、0.0404μg、0.0606μg、0.101μg、0.1616μg、0.202μg、的系列浓度对照品溶液，分别进10μl，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，绿原酸标准曲线方程为：A=2528121.2C＋18457.5,r=0.9997。芦丁标准曲线方程为：A=1601126.7C-55314。r=0.9997以上结果表明，在0.2026μg-2.026μg范围内，绿原酸对照品有良好的线性关系。在0.202μg-2.02μg范围内，芦丁对照品有良好的线性关。测定结果见表6及标准曲线图。表6绿原酸与芦丁线性范围测定结果（n=2）序号进样量（μg）绿原酸峰面积进样量（μg）芦丁峰面积1.0.2026560015.60.2022237772.0.405210445960.4046721333.0.607815145930.60612935894.1.01325490391.0121911685.1.6208 41945501.61628414996. 2.026 5101675 2.024312031(6).精密度试验精密吸取每1ml含芦丁0.0788mg,和含绿原酸0.0592mg的混合对照品溶液，重复进样5次，每次10l，分别测定芦丁和绿原酸的峰面积值，计算相对标准偏差，结果绿原酸的RSD=1.70%，芦丁的RSD=1.22%,显示精密度良好。测定结果见表7。表7精密度试验测定结果（n=5）序号绿原酸峰面积芦丁峰面积 1.165309113473712.168737513775723.165747413619574.166843013888625.1611096 1381822平均值1655493.2 1371516.8RSD1.70% 1.22%(7).稳定性试验取同一样品(编号:GL-02)适量，照前述方法制备供试品溶液，室温下放置，每隔1小时，进样10l,连续进样5次依法测定芦丁和绿原酸的峰面积值，计算相对标准偏差，芦丁和绿原酸的日内RSD分别为1.41%和0.60%;取同一样品在上述色谱条件下测定，每隔一天测一次，连续测定5天芦丁和绿原酸的日间RSD分别为1.28%和0.30%。结果表明，供试品溶液室温下5天内稳定。测定结果见表8。表8稳定性试验测定结果1.0078g时间（小时）绿原酸峰面积芦丁峰面积时间（天）天绿原酸峰面积芦丁峰面积 0 257900610539310 257735110592191259205610818761258399610877602255597210920182258546110848163259139610862983257289810586184 2568991 1088379 42593085 1073411 RSD (%) 0.601.410.301.28(8).重复性试验取同一样品(编号:GL-02)适量，照前述方法分别制备供试品溶液5份，照含量测定法进行测定，结果平均含量芦丁为0.322%，RSD=1.56%；绿原酸为0.476%，RSD=1.59%，测定结果表明，本测定方法的重复性良好。测定结果见表9。表9样品重复性试验测定结果（n=5）编号取样量绿原酸峰面积绿原酸含量芦丁峰面积芦丁含量(g)(mg/g)(mg/g)1.1.0036 25010444.7410431563.202.1.0056 25268564.7010690053.303.1.0055 25540234.81 1068439 3.234.1.0034 25058004.871030918 3.215.1.0044 2511966 4.70 1055444 3.20 平均ⅹ 4.76 3.22RSD(%) 1.59 1.56 (9).回收率试验采用加样回收法，取供试品(编号:GL-02)适量，按样品含量测定浓度的80%，100%，120%取供试品精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入每ml含绿原酸0.5024mg的对照品溶液5.0m、6.5ml、7.5ml，.再精密加入每ml含芦丁0.336mg的对照品溶液6.0ml、7.0ml、8.5ml，.再精密加入50%甲醇39.0ml、36.5ml、34.0ml（均用已标化的50.0ml滴定管）按供试品制备方法制备3个不同浓度的溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果绿原酸和芦丁平均回收率(n=9)分别为99.80%和98.98%,RSD分别为0.91%和2.11%。测定结果见表10,11。表10绿原酸回收率测定结果（n=9）序号取样量（g）样品含量（mg）绿原酸加入量（mg）绿原酸峰面积实际测得量（mg）回收率（%）1.0.70123.2192.5122949747 5.760101.152.0.70123.2192.512 2947078 5.755 100.963.0.70123.2192.512 2945617 5.752 100.834.0.70113.2183.26563308659 6.46199.315.0.70113.2183.26563306270 6.45699.156. 0.7011 3.2183.2656 3308401 6.461 99.287.0.70123.2193.7683555234 6.94298.818.0.70123.219 3.7683563561 6.95999.269.0.7012 3.219 3.768 3566691 6.965 99.41 平均回收率99.80%;RSD=0.91%表11芦丁回收率测定结果（n=9）序号取样量（g）样品含量（mg）加入量（mg）芦丁峰面积实际测得量（mg）回收率（%）1.0.70122.4612.0161412090 4.43097.672.0.70122.4612.016 1417119 4.44698.463.0.70122.4612.016 1413391 4.435 97.924.0.70112.4612.3521512090 4.74497.075.0.7011 2.4612.352 15131384.74897.246.0.7011 2.4612.352 15137914.750 97.327.0.70122.4612.85617117315.371101.898.0.70122.461 2.856 17106555.367101.759.0.7012 2.461 2.856 17083875.360101.50平均回收率98.98%;RSD=2.11%(10).样品的测定分别精密量取13批不同产地天山雪莲药材粉末各1g,按正文方法测定，记录HPLC图谱，外标法计算含量，结果芦丁含量为0.172%-0.672%,平均0.40(n=13);绿原酸含量为0.188%-0.492%,平均为0.35%(n=13)。根据上述结果，暂定雪莲药材含芦丁（C27H30O16）和绿原酸（C16H18O9）按干燥品计，应分别不得少于0.15%和0.20%。测定结果见表12。表12样品测定结果（n=2）ResultsofSampleDetermination(%)样品编号 产地 芦丁 绿原酸sampleNo.habitatrutinchlorogenicacid1.FK-99阜康0.6230.3332.GL-02巩留0.3510.4593.HJ-02和静0.3000.3154.KC-02库车0.3050.2065.HJ-02和静0.4700.3006.GNS-02巩乃斯0.6550.5977.BLK-02巴里坤0.4070.5828.QH-02青河0.1720.1889.KKTH-02可可托海0.1870.22610.TKS-03特克斯0.4080.30211.NLK-03尼勒克0.2850.25312.GL-03巩留0.3150.26813.SXG-03水西沟0.6720.492平均X0.3960.3483.天山雪莲总多糖含量测定天山雪莲总多糖有一定的生理活性，但对该成分的分析未见文献报道。本文参照植物类药材多糖的测定方法，以无水葡萄糖作对照，苯酚-浓硫酸比色法对雪莲总多糖进行了考察。(1).测定波长的确定《中国药典》2000年版一部对玉竹和金缨子两味药材制订了苯酚-浓硫酸比色法测定总多糖含量，含量限度为总多糖应分别不得少于6.0%和25.0%。测定波长均为490nm，且方法相同。文献报道肉苁蓉、茵陈等均用苯酚-浓硫酸比色法测定总多糖含量且方也基本法相同［32-33］。无水葡萄糖对照品和雪莲药材按上述方法比色测定，经在340nm-600nm波长处进行光谱扫描，结果两者的实测最大吸收值分别为488nm和482nm。便于统一方法，选择490nm为测定波长。(2).线形关系考察对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品60mg,置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖0.6mg)。标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.0ml,1.0ml、1.5ml、2.5ml、3.0分别置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成系列浓度对照品溶液。精密量取上述系列溶液各2.0ml,置具塞试管中，分别加5%苯酚溶液1.0ml，混匀，迅速加入硫酸7.0ml,摇匀，于40℃水浴保温30分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以第一份为空白，照分光光度法（附录VB）,在490nm波长处测定吸收度值，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。进行回归，标准曲线方程为：Y=9.9786×10-3X+61.0512,r=0.9964。以上结果表明，在24μg-76μg范围内，无水葡萄糖的量与吸收度值呈良好的线性关系。测定结果见表13。表13标准曲线制备测定结果No.ml数浓度（mg/ml）吸收度值10.00.00.021.00.00240.174431.50.00360.227942.00.00480.309752.50.00600.356863.00.00760.4563（3）.样品提取条件考察取雪莲药材粉末0.5g,精密称定，置锥形瓶中，加80%乙醇，水浴加热回流1小时，过滤，弃取滤液，残渣用80%乙醇洗涤两次,每次5ml。将滤纸与残渣一起置锥形瓶中，加水80ml,加热回流1小时，滤过，残渣用热水洗涤两次,每次5ml，合并滤液，再将滤纸与残渣一起置锥形瓶中，加水80ml,加热回流1小时，滤过，残渣用热水洗涤两次,每次5ml，合并两次滤液，水浴加热浓缩至适量，放冷，定量转移置100ml量瓶中,加水稀释至刻度。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度。再精密吸取2ml照标准曲线制备项下的方法，自“加5%苯酚溶液1.0ml”起，依法测定吸收度值，从标准曲线读取供试品溶液中相当于多糖的重量（mg），计算，即得。按上述方法，由于多糖不溶于80%乙醇，用80%乙醇脱去脂溶性成分后，加水回流提取经一次和两次比较，两次提取能基本将多糖提尽，故选择两次回流提取。（4）显色稳定性考察精密称取样品0.5g（编号：GL-03），按上述方法操作，每间隔一定时间，即0分钟，30分钟，60分钟和120分钟，测定一次吸收度值并计算含量，结果表明样品在显色之后2小时之内稳定。测定结果见表14。表14显色稳定性考察结果放置时间（分钟）吸收度值含量（%）00.34280.54300.34230.54600.34570.551200.34380.54(5).重复性试验精密称取同一样品(编号：GL-03)5份，每份0.5g，照前述方法分别进行测定，结果平均含量为0.522%，RSD=8.6%；测定结果表明，本测定方法的重复性较好。测定结果见表15。表15重复性试验测定结果No.取样量（g）吸收度值含量（%）RSD（%）10.50030.33860.5420.50200.36550.5830.50070.32430.538.640.50260.29780.5050.49160.28850.46(6).样品的测定分别精密称取12批不同产地天山雪莲药材粉末各0.5g,照前述方法分别进行测定，结果平均含量为0.464%。因方法较为繁琐，多糖含量较低，对雪莲多糖提纯分析需待进一步考察，故暂未列入正文。测定结果见表16。表16样品测定结果（n=2）ResultsofSampleDetermination(%)样品编号 产地 吸收度值多糖含量(%)sampleNo.habitatabsorptionpolysaccharids1.FK-99阜康0.20030.3372.GL-02巩留0.10200.1643.HJ-02和静0.12190.2034.KC-02库车0.17320.2875.HJ-02和静0.48680.8616.GNS-02巩乃斯0.35820.6207.BLK-02巴里坤0.26700.4568.QH-02青河0.21460.3629.KKTH-02可可托海0.10800.17310.TKS-03特克斯0.67571.18511.NLK-03尼勒克0.20690.35412.GL-03巩留0.31290.568平均X0.26890.464【药理毒理作用】（1）消炎镇痛作用李观海1978-1990年报导，天山雪莲花总生物碱对蛋清引起的大鼠后踝关节急性炎症有明显的对抗作用，95%乙醇提取液，对大鼠蛋清性急性关节炎症，均有对抗作用，其作用强度与水杨酸钠相似。何新等报导，雪莲黄酮对大鼠蛋清性关节急性炎有明显的对抗作用（P0.05），并具有较强的镇痛作用（P0.05），雪莲黄酮对小鼠毛细管通透性无明显影响（P0.05），但对去肾上腺大鼠蛋清性关节急性炎症的对抗作用则明显减弱（P0.05），通过对小鼠肾上腺内维生素C含量测定，表明雪莲黄酮可使其维生素C含量明显降低（P0.05），说明抗炎作用不是由于血管通透性的改变，主要是通过促进肾上腺皮质激素合成增加而产生的。陈希元等报导雪莲注射液对大鼠蛋清性急性关节炎，致炎前1小时和致炎同时各腹腔注射1ml/只，有明显的抗炎消肿作用（P0.01），在小鼠热板法中腹腔注射0.2ml/10g的雪莲注射液，可明显提高痛阈值，呈现明显的镇痛作用（P0.05）。张本国等将雪莲注射液注入犬硬膜外腔，另将兔一侧坐骨神经暴露，喷上雪莲注射液后缝合切口，进行实验观察，发现犬，兔的脊髓，坐骨神经无病理学改变。（2）抗肿瘤作用刘力生等报导雪莲中提取的黄酮单体jaceosidin和高车前素对腹水型肝癌和S108癌细胞的DNA合成均有明显抑制作用。二者对腹水型肝癌细胞DNA合成的抑制均比S180的高，对腹水型肝癌细胞DNA合成的ID50依次为708和116mg/ml,jaceosidin对癌细胞DNA合成的抑制机理可能是DNA模板损伤型。肖显华等报导：雪莲总生物碱对L7712癌细胞DNA合成的ID50为57.70g/ml。80ug/ml总生物碱对DNA，RNA和蛋白质合成都有显著抑制作用，作用24小时，抑制率均在80%以上。（3）抗生育作用陈希元等报导：雪莲总多糖腹腔注射，对各期妊娠小鼠都有明显的终止妊娠作用（P0.001）；另外对幼鼠子宫无增重作用（P0.05），说明无雌激素样活性。（4）其它郑荣梁等报导，雪莲多糖用氮蓝四唑比色法得清除超氧阴离子自由基的半清除浓度为22.0ug/ml，95%可信限为19.9-24.1ug/ml，多糖能明显抑制小鼠肝匀浆硫代巴比妥酸反应物的产生，IC50为2.3mg/g鲜肝重，95%可信限为2.05-2.55mg/g鲜肝重。多糖ip25mg/kg×5d可降低小鼠耗氧量34.4%，ip同样剂量×6d使游泳时间延长1.69倍。王宪楷报导，紫丁香甙对雌性小鼠口服5-7mg/kg。3d可增加前列腺和精囊重量，提高RNA含量。（5）毒性雪莲总多糖按寇氏法计算LD50为2.959±2.544g/kg（95%可信限）；雪莲注射液的LD50为18.75g/kg。［３4-４6］【临床研究与应用】张本国等用雪莲注射对60列肩周炎和40列要腿疼患者分别进行肩胛上神经阻滞和腰大肌沟阻滞，效果良好，与进口药康宁克通A比较无显著性差异（P0.05）［39］。博源等对临床48列创伤性骨膜炎患者一次性灌洗和注射雪莲注射液治疗，症状均消失，功能恢复良好，一年后随访无复发［４6］。【性味】详见正文。【功能与主治】详见正文。【用法与用量】详见正文。【禁忌】详见正文。【贮藏】详见正文。【类似品及伪品】连文琰等最早进行了雪莲花原植物的调查,整理了6种作为雪莲花使用的原植物检索表，它们是雪荷花Saussureainvolucrata、鼠雪兔子S.gnaphalodes、绵头雪兔子S.laniceps、雪兔子S.gossypiphora、三指雪兔子S.fridactyla及水母雪兔子S.medusa。陈发菊等综述了我国雪莲植物的种类，生境分布及化学成分研究情况。李君山等对全国雪莲花类商品药材进行了调查和鉴定，结果雪莲花类商品药材有15种之多，但主流商品有天山雪莲花、水母雪莲、雪兔子Saussureagossypiphora和簇枝雪莲Saussureapolylada四种。天山雪莲花Saussureainvolucrata(Kar.etKir.)Sch._Bip.Linnaea我国仅分布在新疆。同科同属有三个不同种作为藏药使用，按两个品种收载于《卫