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文档简介
1本文件适用于所有种类的番茄,包括番茄属(LycopersiconMiller.)下2个亚群和9个种,以及栽培24接种体制备4.1基本设备持在20℃~30℃)、塑料盆、铝锅、电炉、培养皿4.2接种体分离番茄晚疫病菌以OA培养基,采用常规组织分离法,从番茄晚疫病的发病植株的发病部位,分离病原物。分离物经形态学和分子生物学鉴定,以及致病性测定,确认为番茄晚疫病菌[Phytophthora4.3接种体确定分别选择分布较广、致病力较强的番茄晚疫病菌的优势菌株作为人4.4接种体保存4.5接种体悬浮液制备将保存在黑麦粒培养基上的晚疫病菌,在无菌操作下,移植于平皿OA,3于18℃~20℃培养12d~20d产孢,再向每个平皿内加入无菌蒸馏水5鉴定番茄苗培育露白发芽后播植于温室,采用营养钵盆栽法进行育苗,基质应自来水浇透育苗基质,随后将已催芽的待鉴定番茄种子播于上述塑料营养钵中,每钵1粒种子,然后用泥炭育苗基质覆盖,以盖住种子为宜。重复3次,每重复30钵,5.5接种前管理播种后将塑料钵置于温室中,进行培育,出苗前,温室温度保持在25℃~30℃,保持盆中土壤湿度;番茄苗出土后,温室温度保持在23℃~28℃,土壤湿度保持在60%~80%,正常栽培管理,不施用每年4月~6月和10月~12月为番茄对晚疫病抗性鉴定与抗用无菌水将接种体悬浮液稀释,配制成接种体浓度为1.0×104个孢子囊/mL~4.0×104个孢子囊/mL4接种后的番茄苗,置于温度为18℃~20℃的温室中,黑暗保湿(RH95%~100%)24h;以后每天光照12h~14h,光强35klx,RH为70%~95%,温室温度保持在18℃~Ri=×100…………(1)59结果评价9.1鉴定有效性判别当感病对照品种达到其相应感病程度(DI≥50.0),该批9.2抗病性划分12R345S69.3鉴定结果记录编号品种/种质名称来源重复病情级别病情指数平均病指抗性评价013579Ⅰ6ⅡⅢ……播种日期接种日期接种生育期接种病原物分离编号接种病原物株系类型调查时间鉴定人(签字):校核人(签字):鉴定技术负责人(签字):鉴定单位盖章)7琼脂加到15g,可用于较长时期的培养,可促使孢子产生。分装后培养基应在1h内灭菌,采用高压蒸试管分装。试管分装制作斜面培养基,主要用于菌种的扎紧。灭菌后应趁热取出,斜放在桌面制成斜面。注意:试管分装时尽量避免培养基粘粘在管口部分,否则培养基可能粘住棉花塞或引起微生物污染,影300mL蒸馏水中浸泡36h(15℃~18℃),然后倒出一部分浸泡水备用,留下的浸泡水要能淹没黑麦粒;捣碎黑麦粒1min~2min,黑麦悬浮液在50℃水浴3h,经3~4层纱布过滤,保留滤液。向浸泡水和滤液的8部分均肿胀,因此使孢囊梗的主梗和分枝先端普成粗细不匀的状态。孢子囊长可达1毫米,基部宽约10芽管侵入寄主。卵孢子膜厚,黄色,直径24-35微米。此外,本菌也能在土壤中形成薄壁圆孢了和厚垣孢子。薄壁圆
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