制药用水的质量保证与控制课件

制药用水的质量保证与控制1制药用水的质量保证与控制制药用水的质量保证与控制2

药品生产用水的质量直接影响药品的质量。因此，制药用水的质量控制，特别是其微生物学指标的控制是极其重要的。合理的操作规程、水系统的日常监测策略以进一步降低系统的风险指数。制药用水的质量保证与控制制药用水的质量保证与控制3制药用水的分类、定义及用途定义制药用水是药物生产用量大，使用广的一种辅料用于生产过程及药物制剂的制备。分类

2010版药典收载的制药用水，根据使用的范围不同分为饮用水、纯化水、注射用水及灭菌注射用水。制药用水的原水通常为饮用水。制药用水的质量保证与控制4

制药用水的用途制药用水的选择

应根据生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水。药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求。制药用水的质量保证与控制5制药用水的用途饮用水

为天然水经净化处理所得的水，其质量必须符合现行中华人民共和国国家标准《生活饮用水》

用途⒈制备纯化水的水源。⒉药材净制时的漂洗、制药用具的粗洗用水。除另有规定外，也可作为药材的提取溶剂。⒊设备、容器的初洗。制药用水的质量保证与控制6制药用水的用途纯化水为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制备的制药用水。不含任何附加剂，其质量应符合《中国药典2010年版》二部纯化水项下的规定。用途⒈制备注射用水的水源。⒉配制普通药物制剂用的溶剂或试验用水。⒊中药注射剂、滴眼剂等灭菌制剂所用药材的提取溶剂。⒋口服外用制剂配制用溶剂或稀释剂。⒌非灭菌制剂用器具的精洗。⒍非灭菌制剂所用药材的提取溶剂。⒎纯化水不得用于注射剂的配制与稀释。制药用水的质量保证与控制7制药用水的用途

注射用水

为纯化水经蒸馏所得的水，应符合细菌内毒素试验的要求。注射用水必须在防止细菌内毒素产生的设计条件下生产、储藏及分装。其质量应符合《中国药典2010年版》二部注射用水项下规定。用途⒈无菌产品直接接触药品的包装材料最后一次精洗。⒉配制注射剂、滴眼剂等的溶剂和稀释剂。制药用水的质量保证与控制8制药用水的用途灭菌注射用水

为注射用水按照注射剂生产工艺制备所得。

不含任何添加剂。其质量应符合《中国药典2010年版》二部

灭菌注射用水项下规定。用途

主要用于注射用的灭菌粉末的溶剂或注射剂的稀释剂。制药用水的质量保证与控制9GMP对制药用水的要求

药品生产用水应适合其用途，应至少采用饮用水作为制药用水。各类药品生产选用的制药用水应符合《中华人民共和国药典》的相关要求。制药用水的质量保证与控制10GMP对制药用水的要求

-水处理设备及其输送系统的设计、安装和维护应能确保制药用水达到设定的质量标准。-水处理设备的运行不得超出其设计能力。-应定期清洗,并对清洗效果进行验证。

-纯化水、注射用水储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀；储罐的通气口应安装不脱落纤维的疏水性除菌滤器；管道的设计和安装应避免死角、盲管。

-结构设计应简单、可靠、拆装简便。

-为便于拆装、更换、清洗零件,执行机构的设计尽量采用标准化、通用化、系统化零部件。制药用水的质量保证与控制11GMP对制药用水的要求

-应对制药用水及原水的水质进行定期监测，并有相应的记录。

-纯化水、注射用水的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生，如注射用水可采用70℃以上保温循环。-应按照书面规程消毒纯化水、注射用水管道,必要时包含其他供水管道，并有相关记录。

-SOP还应详细规定制药用水微生物污染的警戒限度、纠偏限度和应采取的措施。制药用水的质量保证与控制12

GMP对制药用水设备清洗的要求

设备清洗的规程应遵循以下原则⒈有明确的清洗方法和清洗周期。⒉明确关键设备的清洗验证方法。⒊清洗过程和清洗后检查的数据记录并存档保存。⒋无菌设备的清洗,

-直接接触药品的部位和部件必须灭菌

-表明灭菌日期,必要时进行无菌验证。经灭菌的设备在3天内使用。⒌某些可移动的设备可移到清洁区进行清洗、消毒和灭菌。制药用水的质量保证与控制13纯化水管道清洗与灭菌参考示例

管道的清洗及灭菌⒈纯化水预冲洗⒉碱液冲洗⒋钝化⒌初始冲洗⒍蒸汽消毒⒎最后冲洗制药用水的质量保证与控制14工艺用水的制备与分配纯化水纯化水机生产纯化水设备分成两部分-预处理部分-纯化部分

制药用水的质量保证与控制15工艺用水的制备与分配纯化水工艺示例

原水－原水加压泵－多介质过滤器－活性炭过滤器－软水器－精密过滤器－第一级反渗透－软水器－精密过滤器－第一级反渗透－PH调节－中间调节－中间水箱－第二级反渗透－纯化水箱－纯水泵－紫外线灭水箱－第二级反渗透－纯化水箱－纯水泵－紫外线灭菌器－微孔过滤器－用水点制药用水的质量保证与控制16工艺用水的制备与分配注射用水注射用水的生产蒸馏法，进一步去除原水中微生物、内毒素和无机离子常用设备：多效蒸馏水机工艺示例

制药用水的质量保证与控制17工艺用水的制备与分配储存和分配系统的特点-连续循环运行

-通常包括储罐+水泵+循环管路+在线仪表

-自动化运行，实时曲线记录按系统分为：

-纯化水储存和分配系统

-注射用水储存和分配系统制药用水的质量保证与控制18

我国GMP对制药企业制水系统微生物污染的要求

《药品生产质量管理规范》对生产企业工艺用水系统的要求,可以看出，新版GMP强调了水系统的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生，这就对整个系统设备和管道的材料构成、管道回路的布局和设备性能提出了特别的要求。并加强了微生物限度的检测。制药用水的质量保证与控制19工艺用水系统的验证

一般性要求一般是参照FDA的观点进行验证，采用以下两类方法验证系统的可靠性：⒈定期检测微生物学指标。⒉在特定的监控部位安装监控装置，对水系统的有关部位取样检测，以确保整个系统始终达标运行。制药用水的质量保证与控制20

一般性要求

FDA《高纯水检查指南》中论述，工艺用水系统的验证一般可分为3个阶段。⒈初始验证阶段当确认所有设备和管路均已正确安装并能按要求运行，则可以进入水系统的初始验证阶段。在此阶段，应制定出运行参数、清洁消毒规程及频率。工艺用水系统的验证制药用水的质量保证与控制21工艺用水系统的验证

一般性要求⒉运行阶段也称同步验证阶段。通过系统验证的第二阶段能证明，按SOP运行，系统始终能稳定地产出符合质量标准的水。取样方案及检测时间与第一阶段相同。

制药用水的质量保证与控制22工艺用水系统的验证

一般性要求

⒊长期考察阶段通过系统验证的第三阶段证明，按SOP运行，系统能在相当长的时间内始终产生符合质量要求的水。在此阶段，需找出因原水的质量变化而给系统运行和成品水质所造成的影响。

制药用水的质量保证与控制23工艺用水系统的验证一般性要求

我国工艺用水验证的基本思路⒈证明水系统在已有的或未来的操作情况下，工艺用水的质量与预期设计的一致。⒉验证必须用文件证明，当根据设计的操作方法和规程，管理工艺用水系统时，系统能稳定地生产出一定数量和质量的水。⒊验证通常需进行适当的挑战性实验，但验证方法需认真考虑。制药用水的质量保证与控制24

工艺用水系统的验证

URS(工程技术标准确认SQ)工程技术指标是用于满足用户需求的工程技术实现方式，包括功能指标及工程技术指标。工程技术指标确认包含设备/系统的详细工程技术信息描述。是供应商／制造厂供货技术文件的依据。其具体内容需要与供货商／制造商共同确认。为了清晰完整的表示用户需求，建议使用表格。在签署合同前，需对供应商进行审计，以确保其有能力按照功能设计制造相应设备。

制药用水的质量保证与控制25

工艺用水系统的验证程序DQ(设计确认)-设计文件确认-系统基本生产参数的确认-主要组件的确认（生产能力、材料、抛光等）

制药用水的质量保证与控制26工艺用水系统的验证程序关键仪表的确认（量程、精度等）

-

规格确认是否购入安装了符合规格的仪表。-厂商资质的确认确认所购仪器出厂前的检验记录。-设置确认确认是否设置了符合规格要求的仪表。

制药用水的质量保证与控制27工艺用水系统的验证程序

施工程序的确认焊接、坡度、死角、压力测试等。系统功能的确认主要的报警联锁功能、消毒/灭菌方式等。

偏差报告制药用水的质量保证与控制28

工艺用水系统的验证

程序IQ（安装确认）-文件确认

P&ID（管道仪表流程图）和布局图的检查（非管道图）-组件的检查

-仪表和仪表校准的检查（确认重要仪表与标准仪表的误差）在记录里附上所使用的标准仪表的校正说明书等。制药用水的质量保证与控制29工艺用水系统的验证

程序

-材料和表面抛光的检查-组件结构的检查-死角的确认-焊接文件-排放能力的确认-水压测试的确认-脱脂钝化的确认-公用设施的确认-控制系统硬件组件的检查-控制系统软件配置的检查-偏差报告

制药用水的质量保证与控制30

工艺用水系统的验证程序

●

第1阶段：2-4周-每个制水工序点和使用点每天取样，连续进行2～4周-运行参数的确认-系统清洁和消毒程序和周期的确认-确定SOP

●

第2阶段：2-4周-每个制水工序点和使用点每天取样，连续进行2～4周-目的:确认水系统能持续生产出合格的水

●

第3阶段：1年

-每天至少1个使用点取样，每周所有使用点轮换取样-目的：确认季节的变化对水的影响制药用水的质量保证与控制31

工艺用水系统验证实施⒈制定验证方案验证方案是企业重要技术标准。是进行验证的依据，应包括以下内容：-项目名称（方案名称）-方案编号-方案制定人、制定日期-方案审核人、审核日期-方案批准人、批准日期-项目概述-验证目的-验证方法-采用文件-控制标准-验证步骤-验证周期-验证记录制药用水的质量保证与控制32工艺用水系统验证实施

⒉批准验证方案

验证方案应经验证项目负责人批准后生效.

⒊组织实施由验证项目负责人组织验证小组成员.根据验证方案所规定的方法、步骤、标准具体实施.在验证过程中应做好验证记录,实施前做好培训.

制药用水的质量保证与控制33工艺用水系统验证实施⒋提出验证报告验证工作结束后，验证人员应及时汇总验证结果，编制验证报告-验证报告内容应包括：验证项目名称验证日期验证人员验证结果偏差处理最终结论报告起草人签名证小组组长审核签名提交企业验证工作负责人制药用水的质量保证与控制34工艺用水系统验证实施⒌批准验证报告由企业验证工作负责人批准⒍建立验证档案应建立完整的验证档案，将每项验证工作的有关文件归档。制药用水的质量保证与控制35纯化水检查验证参考示例1、纯化水系统验证所需各类文件纯化水系统设备说明书饮用水水质标准纯化水标准水预处理系统标准操作规程反渗透装置标准操作规程紫外灭菌器标准操作规程纯化水系统运行监测、维护、保养操作程序纯化水系统清洗消毒程序制药用水的质量保证与控制36纯化水检查验证参考示例⒉取样频率整个水质监测分为三个验证周期，每个周期为七天。⑴取样点取样频率：-纯化水贮罐：天天取样。-纯化水回水口：天天取样。-纯化水总送水口：天天取样。-纯化水使用点（轮流取样）：一个周期一次。说明：每次取样均做全项检测。制药用水的质量保证与控制37纯化水检查验证参考示例⑵纯化水系统日常监控取样点二级反渗透后、总送水口、总回水口、各使用点（轮流取样）取样频率每月一次检测项目全项检验最终分析和评价制药用水的质量保证与控制38纯化水检查验证参考示例⑶验证周期1．纯化水系统若较长时间停用，在正式生产三个星期前开启纯化水系统，并做三个周期的监控。2．纯化水系统改造或大修后，应做三个周期的监控。3．每月对纯化水系统消毒一次。每年对纯化水系统进行一次验证。制药用水的质量保证与控制39制药工艺用水的污染

水是一种良好的溶剂，能溶解各种固态、液态和气态的物质;⒈含有各种盐类和化合物，溶有CO2。⒉胶体和大量的非溶解性物质如腐殖质胶体、黏土、沙石、微生物、浮游生物等。⒊排放的废水、废气和废渣等有害物质。因此，自然界的水是不纯水，必须要经过复杂的处理程序才能用于制药生产中。制药用水的质量保证与控制40制药用水系统的污染

大体上可分为外源性污染和内源性污染两种。

外源性污染主要指原水及系统外部原因所致的污染。

内源性污染指制药用水系统运行过程中所致的污染。我国药典规定，注射用水是由纯化水经蒸馏制得，因此纯化水及注射用水的质量与原水污染有很大的关系，制药用水存在微生物和细菌内毒素污染的风险,而各种离子、有机化合物、微粒等经制药用水系统进行适当处理后，不再是构成污染制药用水的主要风险因素。制药用水的质量保证与控制41

原水的污染是制药用水最主要的外源性污染源。美国药典、欧洲药典及中国药典均明确要求制药用水的原水至少要达到饮用水的质量标准。⒈饮用的水质与其水源的污染相关。这是外源性污染的一大特点，它往往随季节的变化而变化。如我国有的地区梅雨季节饮用水水质相对较差。水系统的外源性污染制药用水的质量保证与控制42

水系统的外源性污染

⒉贮罐的排气口无保护措施或使用了劣质气体过滤器、用于混和混床中阴阳离子树脂的压缩空气中存在污染菌。⒊水从污染了的出口倒流。⒋地漏的缺陷以及更换活性炭和去离子树脂带来的外源性污染。制药用水的质量保证与控制43

水系统的内源性污染

内源性污染的影响因素⑴制水系统的设计⑵选材⑶运行⑷维护⑸贮存⑹使用以上因素与水系统的内源性污染密切相关，它与外源性污染也有十分密切的相关性。如饮用水系统的微生物污染有可能导致细菌内毒素的增加，使制药用水的质量发生变化。制药用水的质量保证与控制44

水系统的内源性污染

水系统的组成单元均可能成为微生物内源性污染源。原水中的微生物被吸附于活性炭、去离子树脂、过滤膜或其它设备的表面上，可形成生物膜。生物膜中的微生物受到生物膜的保护，增强了抵抗力如对消毒剂有一定的抵抗力。如果其中某些微生物从生物膜脱落并被冲往水系统其它区域时，微生物可吸附于悬浮粒子上，生长繁殖,成为纯化水设备和分配系统的污染源。制药用水的质量保证与控制45

细菌内毒素

热原药学上通常是指那些能致热的微生物代谢产物。大多数细菌和许多霉菌都能产生热原。革兰阴性杆菌的代谢产物，致热能力强是造成热原反应的最主要因素。内毒素的危害性-除了引起高烧外，还有凝血、致代谢紊乱、血小板积聚、骨髓坏死等毒副作用，这是各国重视控制细菌内毒素污染的重要原因。制药用水的质量保证与控制46

我国现行饮用水质量标准

GB5749-2006替代了GB5749-1985标准,微生物检查指标由2项增至6项;增加了大肠埃希菌、耐热大肠菌群、贾第鞭毛虫和隐孢子虫检查,修订了大肠菌群的检验方法。

标准指标限值大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出耐热大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出大肠埃希菌／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出菌落总数／cfu／ml100贾第鞭毛虫／10L＜1个隐孢子虫／10L＜1个注①大肠菌群MPN表示最可能数。当水样检出总大肠菌群时,应进一步检验大肠埃希菌或耐热大肠菌群。②CFU表示菌落形成单位。制药用水的质量保证与控制47

饮用水管理饮用水的标准储水池定期清洗，清洗要有卫生防疫部门的认可，储水池要有二次供水证书，储水池的人孔、维修孔必须密闭并且加锁加氯杀菌（国标总氯0.05)自来水泵定期切换。

制药用水的质量保证与控制48

制药用水的质量标准

1、纯化水ChP2005BP2008/EP6.2USP2009ChP2010酸碱度酸碱度氯化物

硫酸盐

钙盐

硝酸盐(60ppb)硝酸盐(2ppm)硝酸盐(60ppb)亚硝酸盐(20ppb)亚硝酸盐(20ppb)氨(0.3ppm)氨(0.3ppm)电导率电导率

电导率易氧化物TOC或易氧化物TOCTOC或易氧化物不挥发物(1mg/100ml)不挥发物(1mg/100ml)重金属(0.3ppm)重金属(0.1ppm)重金属(0.1ppm)铝盐(10ppb)微生物总数不得过100个/1ml微生物总数不得过100个/1ml微生物总数不得过100个/1ml制药用水的质量保证与控制49

制药用水的质量标准

2、注射用水

ChP2005BP2008/EP6.2USP2009ChP2010pH5.0-7.0pH5.0-7.0(加KCL)

氨(0.2ppm)氯化物、硫酸盐、钙盐、硝酸盐、亚硝酸盐、二氧化碳、易氧化物、不挥发物与重金属均同纯化水硝酸盐(2ppm)

铝盐(10ppb)、电导率硝酸盐，亚硝酸盐，总有机碳、电导率、不挥发物与重金属均同纯化水。细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)微生物总数不得过10个/1ml微生物总数不得过10个/1ml微生物总数不得过10个/1ml制药用水的质量保证与控制50

制药用水的质量标准

3、灭菌注射用水ChP2005BP2008/EP6.2USP2009ChP2010pH5.0-7.0酸碱度pH5.0-7.0(加KCL)pH5.0-7.0(加KCL)氯化物氯化物氯化物氯化物硫酸盐硫酸盐硫酸盐硫酸盐钙盐钙盐和镁盐钙盐钙盐硝酸盐(60ppb)硝酸盐(2ppm)硝酸盐(60ppb)亚硝酸盐(20ppb)亚硝酸盐(20ppb)氨(0.2ppm)氨(0.2ppm)氨(0.2ppm)氨(0.2ppm)二氧化碳二氧化碳二氧化碳易氧化物易氧化物易氧化物易氧化物不挥发物(1mg/100ml)不挥发物(1mg/100ml)不挥发物(1mg/100ml)重金属(0.3ppm)重金属(0.1ppm)重金属(0.1ppm)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)

电导率电导率无菌，可见异物，

不溶性微粒无菌，可见异物无菌，可见异物无菌，可见异物，

不溶性微粒制药用水的质量保证与控制51

制药用水的质量标准

2010版《中国药典》关于制药用水的质量标，除适当减少了某些化学检查项外，主要是增加两项检查：⑴电导率检查：用于控制各种阴阳离子的污染程度。⑵总有机碳检查：控制有机污染（有机小分子）上述两项的在线检测可对制水系统进行实时流程监控。制药用水的质量保证与控制52我国制药用水质量标准概况1980年电子工业的高纯水试行标准。1994年电子机械工业部制定了高纯水JB/T7621-1994行业标准。制药行业参照电子机械工业部行业标准的个别项目。2000版《中国药典》收载了纯化水和注射用水的标准并规定了使用范围。2005版《中国药典》在纯化水和注射用水项下增加了微生物限度标准和检验方法。以上发展可以看出我国对制药用水的质量规定在不断加强,GMP对制药企业制水系统的要求也逐渐加强。2010版《中国药典》制药用水的质量保证与控制53我国现行制药用水微生物质量标准及检验方法

饮用水

GB5749-2006替代了GB5749-1985标准,微生物检查指标由2项增至6项;增加了大肠埃希菌、耐热大肠菌群、贾第鞭毛虫和隐孢子虫检查,修订了大肠菌群的检验方法。

标准指标限值大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出耐热大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出大肠埃希菌／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出菌落总数／cfu／ml100贾第鞭毛虫／10L＜1个隐孢子虫／10L＜1个注①大肠菌群MPN表示最可能数。当水样检出总大肠菌群时,应进一步检验大肠埃希菌或耐热大肠菌群。②CFU表示菌落形成单位。制药用水的质量保证与控制54我国现行制药用水微生物质量标准及检验方法纯化水

标准微生物限度细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。

检验方法取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查。注射用水

标准细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10个。

检验方法取本品至少200ml，采用薄膜过滤法处理后,依法检查。灭菌注射用水

标准无菌应符合规定。

检验方法照2010版《中国药典》附录无菌检查法检查。制药用水的质量保证与控制55

检验方法总大肠菌群检验意义大肠菌群作为水质污染的指示菌有近90年的历史。大肠菌群是指一群在35~37℃培养能发酵乳糖,24h能产酸产气,需氧和兼性厌氧、氧化酶阴性的革兰阴性无芽孢杆菌。除包括埃希菌属(Escherichia)还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯菌属(Klebsiella)。肠杆菌属中以产气肠杆菌(E.aerogenens)和阴沟杆菌(E.cloacae)多见，克雷伯菌属中以肺炎克雷伯菌(K.pneumonlae)多见。实际上大肠菌群基本上包括了正常人畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌，较大肠埃希菌代表范围更广,以大肠菌群为指示菌,质量控制更为严格。制药用水的质量保证与控制56大肠菌群分类生化试验大肠埃希菌属枸橼酸菌属克雷伯菌属肠杆菌属ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅠⅡⅢⅣⅠⅡ靛基质试验（I）+-+--+-+---+甲基红试验（M)++++++------V–P------++++++枸橼酸盐利)----++++-+++用试验(CH2S----（+）（+）------乳糖（44.5℃）+--+-----+--制药用水的质量保证与控制57

大肠菌群检验方法

我国GB／T5749-2006收载的检验方法有三种;多管发酵法、滤膜法(薄膜过滤法)及酶底物法,检验步骤如下;

一、多管发酵法⒈乳糖发酵试验接种乳糖胆盐培养基。⒉分离培养伊红美兰培养基典型菌落深紫黑色、具金属光泽，紫黑色、不带或略带金属光泽，淡紫红色、中心较深。革兰染色革兰阴性无芽孢杆菌。⒊证实试验取上述典型菌落接种乳糖胆盐培养基,发酵乳糖并产酸、产气。⒋结果判断发酵乳糖;产酸、产气,判总大肠菌群存在。⒌报告查总大肠菌群检索表报告每100ml水样中总大肠菌群最可能数(MPN)值或总大肠菌群阴性。

制药用水的质量保证与控制58大肠菌群检验方法二、滤膜法(薄膜过滤法)

将水样置过滤器中抽滤,水样全部通过孔径0.45um的滤膜,将污染微生物全部截留在滤膜上。⒈滤膜及滤器灭菌⒉过滤取水样100ml全部过滤。⒊培养取出滤膜贴在制备好的培养基上培养(品红亚硫酸钠培养基)。⒋挑选典型菌落紫红色、具金属光泽，深红色不带或略带金属光泽，深红色、中心较深。⒌确认试验接种乳糖胆盐培养基。⒍结果判断发酵乳糖;产酸、产气,判总大肠菌群存在。⒎报告总大肠菌群菌落数(cfu／100ml)＝滤膜菌落数×100／水样体积。制药用水的质量保证与控制59大肠菌群检验方法三、酶底物法在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶(β-Dgalactosidse)的细菌群组分解色原底物释放出色原体,使培养基ONPG-MUG(MMO-MUG)的颜色改变来检测大肠菌群。⒈检验程序⑴水样稀释⑵定性反应

100ml水样加入2.7gMMO-MUG培养基,完全溶解,培养。⑶10管法①100ml水样加入2.7gMMO-MUG培养基,完全溶解。②分别取10ml加入无菌试管中,培养。⑷定量盘(51孔)法①100ml水样加入2.7gMMO-MUG培养基,完全溶解。②将上述溶解的水样全部倒入无菌51孔定量盘内,培养。制药用水的质量保证与控制60大肠菌群检验方法⒉结果判断及报告

培养24h后判断结果,必要时可延长至28h报告。⑴定性反应结果判断培养后呈现黄色为阳性反应,表示水样中含总大肠菌群。报告检出或未检出总大肠菌群。⑵10管法

结果判断培养后呈现黄色为阳性反应,表示该试管中含总大肠菌群。报告计算阳性管数从表中查出总大肠菌群最可能数(MPN)

,结果以MPN／100ml表示。制药用水的质量保证与控制61大肠菌群检验方法⑶定量盘(51孔)法结果判断培养后孔内培养物呈现黄色为阳性反应,表示该孔含总大肠菌群。报告计算阳性孔数从表中查出总大肠菌群最可能数(MPN)

,结果以MPN／100ml表示。制药用水的质量保证与控制62

耐热大肠菌群检验方法

是一群不仅能在35~37℃生长,在44.5℃仍能生长的大肠菌群称为耐热大肠菌群,多是直接来自近期人和动物粪便中的大肠菌群亦称为粪大肠菌群。检验方法采用多管发酵法和滤膜法(薄膜过滤法)检验方法步骤同总大肠菌群检验方法。

制药用水的质量保证与控制63

大肠埃希菌检验方法

GB5749-2006收载三种检验方法；多管发酵法、滤膜法、酶底物法

1、多管发酵法是指总大肠菌群检验阳性培养，在含有荧光底物培养基上，44.5℃培养24h产生β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外灯下产生特征性荧光的细菌以此来检测水中大肠埃希菌的方法。制药用水的质量保证与控制64大肠埃希菌检验方法检验步骤