制药用水的制备及质量保证课件

制药用水的制备及质量保证1制药用水的制备与质量保证的控制制药用水的制备及质量保证2

前言药品生产用水的质量直接影响药品的质量。因此，制药用水的质量控制，特别是其微生物学指标的控制是极其重要的。合理的操作规程、水系统的日常监测策略以进一步降低系统的风险指数。制药用水的制备及质量保证3制药用水的分类、定义及用途定义制药用水是药物生产用量大，使用广的一种辅料用于生产过程及药物制剂的制备。分类

2010版药典收载的制药用水，根据使用的范围不同分为饮用水、纯化水、注射用水及灭菌注射用水。制药用水的原水通常为饮用水。制药用水的制备及质量保证4

制药用水的用途制药用水的选择

应根据生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水。药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求。制药用水的制备及质量保证5制药用水的用途饮用水

为天然水经净化处理所得的水，其质量必须符合现行中华人民共和国国家标准《生活饮用水》。用途⒈制备纯化水的水源。⒉药材净制时的漂洗、制药用具的粗洗用水。除另有规定外，也可作为药材的提取溶剂。⒊设备、容器的初洗。制药用水的制备及质量保证6制药用水的用途纯化水为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制备的制药用水。不含任何附加剂，其质量应符合二部纯化水项下的规定。用途⒈制备注射用水的水源。⒉配制普通药物制剂用的溶剂或试验用水。⒊中药注射剂、滴眼剂等灭菌制剂所用药材的提取溶剂。⒋口服外用制剂配制用溶剂或稀释剂。⒌非灭菌制剂用器具的精洗。⒍非灭菌制剂所用药材的提取溶剂。⒎纯化水不得用于注射剂的配制与稀释。制药用水的制备及质量保证7制药用水的用途

注射用水

为纯化水经蒸馏所得的水，应符合细菌内毒素试验的要求。注射用水必须在防止细菌内毒素产生的设计条件下生产、储藏及分装。其质量应符合注射用水项下规定。用途⒈无菌产品直接接触药品的包装材料最后一次精洗。⒉配制注射剂、滴眼剂等的溶剂和稀释剂。制药用水的制备及质量保证8制药用水的用途灭菌注射用水

为注射用水按照注射剂生产工艺制备所得。

不含任何添加剂。其质量应符合灭菌注射用水项下规定。用途

主要用于注射用的灭菌粉末的溶剂或注射剂的稀释剂。制药用水的制备及质量保证9GMP对制药用水的要求

药品生产用水应适合其用途，应至少采用饮用水作为制药用水。各类药品生产选用的制药用水应符合《中华人民共和国药典》的相关要求。制药用水的制备及质量保证10GMP对制药用水的要求

-水处理设备及其输送系统的设计、安装和维护应能确保制药用水达到设定的质量标准。

-水处理设备的运行不得超出其设计能力。-应定期清洗,并对清洗效果进行验证。

-纯化水、注射用水储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀；储罐的通气口应安装不脱落纤维的疏水性除菌滤器；管道的设计和安装应避免死角、盲管。

-结构设计应简单、可靠、拆装简便。

-为便于拆装、更换、清洗零件,执行机构的设计尽量。制药用水的制备及质量保证11GMP对制药用水的要求

-应对制药用水及原水的水质进行定期监测，并有相应的记录。

-纯化水、注射用水的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生，如注射用水可采用70℃以上保温循环。-应按照书面规程消毒纯化水、注射用水管道,必要时包含其他供水管道，并有相关记录。

-SOP还应详细规定制药用水微生物污染的警戒限度、纠偏限度和应采取的措施。制药用水的制备及质量保证12

GMP对制药用水设备清洗的要求

设备清洗的规程应遵循以下原则⒈有明确的清洗方法和清洗周期。⒉明确关键设备的清洗验证方法。⒊清洗过程和清洗后检查的数据记录并存档保存。⒋无菌设备的清洗,尤其是直接接触药品的部位和部件必须灭菌,并表明灭菌日期,必要时进行无菌验证。经灭菌的设备在3天内使用。⒌某些可移动的设备可移到清洁区进行清洗、消毒和灭菌。制药用水的制备及质量保证13纯化水管道清洗与灭菌参考示例管道的清洗及灭菌⒈纯化水预冲洗：在贮液罐中注入足够的常温纯化水，用水泵加以循环，15分钟后打开排水阀，边循环边排放。⒉碱液冲洗：用2%的氢氧化钠溶液，用泵循环3小时后排放。⒊冲洗：将纯化水加入贮液罐，启动水泵，打开各使用点排放，直到各出口水的PH值与罐中水的PH值一致。⒋钝化：8%的硝酸溶液，启动水泵，循环60分钟后排放。⒌初始冲洗：再用纯化水冲洗30分钟。⒍蒸汽消毒：蒸汽冲洗各使用点30分钟。⒎最后冲洗：制新纯化水，再次冲洗各使用点3-5分钟。制药用水的制备及质量保证14工艺用水的制备与分配纯化水纯化水机生产纯化水设备分成两部分-预处理部分-纯化部分预处理部分：-去除原水中的颗粒、悬浮物、胶体、微生物、硬度、余氯和臭味等。-常用设备：机械(砂)过滤器、软化器、活性炭过滤器、超滤设备纯化部分：

-进一步去除微生物、内毒素、无机物、有机物。

-常用设备：两级RO或RO+EDI制药用水的制备及质量保证15工艺用水的制备与分配纯化水工艺示例原水-原水加压泵-多介质过滤器-活性炭过滤器-软水器

-精密过滤器-第一级反渗透-软水器-精密过滤器-第一级反渗透-PHPH调节-中间调节-中间水箱-第二级反渗透-纯化水箱

-纯水泵-紫外线灭水箱-第二级反渗透-纯化水箱-纯水泵

-紫外线灭菌器-微孔过滤器-用水点制药用水的制备及质量保证16工艺用水的制备与分配注射用水蒸馏水机生产注射用水蒸馏法，进一步去除原水中微生物、内毒素和无机离子常用设备：多效蒸馏水机工艺示例纯化水-多效蒸馏-注射用水储罐-微孔过滤器（超滤）-用水点制药用水的制备及质量保证17

我国GMP对制药企业制水系统微生物污染的要求

《药品生产质量管理规范》对生产企业工艺用水系统的要求,可以看出，新版GMP强调了水系统的“制备、储存和分配应能防止微生物的滋生，这就对整个系统设备和管道的材料构成、管道回路的布局和设备性能提出了特别的要求。并加强了微生物限度的检测。制药用水的制备及质量保证18工艺用水系统的验证

一般性要求一般是参照FDA的观点进行验证，采用以下两类方法验证系统的可靠性：⑴定期检测微生物学指标。⑵在特定的监控部位安装监控装置，对水系统的有关部位取样检测，以确保整个系统始终达标运行。制药用水的制备及质量保证19

一般性要求

FDA在1993年的《高纯水检查指南》中论述，工艺用水系统的验证一般可分为3个阶段。⑴初始验证阶段当确认所有设备和管路均已正确安装并能按要求运行，则可以进入水系统的初始验证阶段。在此阶段，应制定出运行参数、清洁消毒规程及频率。工艺用水系统的验证制药用水的制备及质量保证20工艺用水系统的验证

一般性要求⑵运行阶段也称同步验证阶段。通过系统验证的第二阶段应能证明，按SOP运行，系统始终能稳定地产出符合质量标准的水。取样方案及检测时间与第一阶段相同。⑶长期考察阶段通过系统验证的第三阶段证明，按SOP运行，系统能在相当长的时间内始终产生符合质量要求的水。在此阶段，需找出因原水的质量变化而给系统运行和成品水质所造成的影响。不过FDA认为以上验证方案并非唯一的方法，现在普遍采用的方法是二阶段制，即安装以后的验证和运行后1年的数据累积。制药用水的制备及质量保证21工艺用水系统的验证

一般性要求⑵运行阶段也称同步验证阶段。通过系统验证的第二阶段应能证明，按SOP运行，系统始终能稳定地产出符合质量标准的水。取样方案及检测时间与第一阶段相同。⑶长期考察阶段通过系统验证的第三阶段证明，按SOP运行，系统能在相当长的时间内始终产生符合质量要求的水。在此阶段，需找出因原水的质量变化而给系统运行和成品水质所造成的影响。不过FDA认为以上验证方案并非唯一的方法，现在普遍采用的方法是二阶段制，即安装以后的验证和运行后1年的数据累积。制药用水的制备及质量保证22工艺用水系统的验证一般性要求

我国工艺用水验证的基本思路⑴证明水系统在已有的或未来的操作情况下，工艺用水的质量与预期设计的一致。⑵验证必须用文件证明，当根据设计的操作方法和规程，管理工艺用水系统时，系统能稳定地生产出一定数量和质量的水。⑶虽然验证通常需要进行适当的挑战性实验，但验证方法需认真考虑；如给水系统人为接种微生物或加入内毒素以考察其去除污染的能力是不切实际的。制药用水的制备及质量保证23

工艺用水系统的验证程序URS多个系统的规划水质标准与投资预算的综合考虑用水情况表：使用点位置、用水时间、流量、用水量、用水水温、压力等.选材要求系统功能监测和记录的参数自控配置要求制药用水的制备及质量保证24

工艺用水系统的验证程序DQ-设计文件确认-系统基本生产参数的确认-主要组件的确认（生产能力、材料、抛光等）

制药用水的制备及质量保证25工艺用水系统的验证

-关键仪表的确认（量程、精度等）

-施工程序的确认（焊接、坡度、死角、压力测试、钝化等-系统功能的确认（主要的报警联锁功能、消毒/灭菌方式等）-偏差报告

制药用水的制备及质量保证26

工艺用水系统的验证程序IQ-文件确认

P&ID和布局图的检查-组件的检查

-仪表和仪表校准的检查

制药用水的制备及质量保证27工艺用水系统的验证

-材料和表面抛光的检查-组件结构的检查-死角的确认-焊接文件-排放能力的确认-水压测试的确认-脱脂钝化的确认-公用设施的确认-控制系统硬件组件的检查-控制系统软件配置的检查-偏差报告

制药用水的制备及质量保证28

工艺用水系统的验证

程序OQ-验证仪器校准的确认-人机界面的确认-运行程序的确认-报警和联锁检查-生产参数的确认-峰流量的确认-系统消毒/灭菌的确认-偏差报告

制药用水的制备及质量保证29

工艺用水系统的验证程序

●

第1阶段：2-4周-每个制水工序点和使用点每天取样，连续进行2～4周-运行参数的确认-系统清洁和消毒程序和周期的确认-确定SOP

●

第2阶段：2-4周-每个制水工序点和使用点每天取样，连续进行2～4周-目的:确认水系统能持续生产出合格的水

●

第3阶段：1年

-每天至少1个使用点取样，每周所有使用点轮换取样-目的：确认季节的变化对水的影响制药用水的制备及质量保证30

工艺用水系统验证实施制定验证方案验证方案是企业重要技术标准。是进行验证的依据，应包括一下内容：-项目名称（方案名称）-方案编号-方案制定人、制定日期-方案审核人、审核日期-方案批准人、批准日期-项目概述-验证目的-验证方法-采用文件-控制标准-验证步骤-验证周期-验证记录制药用水的制备及质量保证31工艺用水系统验证实施

-批准验证方案

验证方案应经验证项目负责人批准后生效.

-组织实施由验证项目负责人组织验证小组成员.根据验证方案所规定的方法、步骤、标准具体实施.在验证过程中应做好验证记录,实施前做好培训.

制药用水的制备及质量保证32工艺用水系统验证实施-提出验证报告验证工作结束后，验证人员应及时汇总验证结果，编制验证报告-验证报告内容应包括：验证项目名称验证日期验证人员验证结果偏差处理最终结论报告起草人签名证小组组长审核签名提交企业验证工作负责人制药用水的制备及质量保证33工艺用水系统验证实施批准验证报告由企业验证工作负责人批准-建立验证档案应建立完整的验证档案，将每项验证工作的有关文件归档。制药用水的制备及质量保证34纯化水检查验证参考示例1、纯化水系统验证所需各类文件纯化水系统设备说明书饮用水水质标准纯化水标准水预处理系统标准操作规程反渗透装置标准操作规程紫外灭菌器标准操作规程纯化水系统运行监测、维护、保养操作程序纯化水系统清洗消毒程序制药用水的制备及质量保证35纯化水检查验证参考示例⒉取样频率⑴整个水质监测分为三个验证周期，每个周期为七天。①取样点取样频率：②纯化水贮罐：天天取样。③纯化水回水口：天天取样。④纯化水总送水口：天天取样。⑤纯化水使用点（轮流取样）：一个周期一次。说明：每次取样均做全项检测。制药用水的制备及质量保证36纯化水检查验证参考示例⑵纯化水系统日常监控取样点二级反渗透后、总送水口、总回水口、各使用点（轮流取样）取样频率每月一次检测项目全项检验最终分析和评价制药用水的制备及质量保证37纯化水检查验证参考示例⑶验证周期1．纯化水系统若较长时间停用，在正式生产三个星期前开启纯化水系统，并做三个周期的监控。2．纯化水系统改造或大修后，应做三个周期的监控。3．每月对纯化水系统消毒一次。每年对纯化水系统进行一次验证。制药用水的制备及质量保证38制药工艺用水的污染

水是一种良好的溶剂，能溶解各种固态、液态和气态的物质;⑴含有各种盐类和化合物，溶有CO2。⑵胶体和大量的非溶解性物质如腐殖质胶体、黏土、沙石、微生物、浮游生物等。⑶排放的废水、废气和废渣等有害物质。因此，自然界的水是不纯水，必须要经过复杂的处理程序才能用于制药生产中。制药用水的制备及质量保证39制药用水系统的污染

大体上可分为外源性污染和内源性污染两种。

外源性污染主要指原水及系统外部原因所致的污染。

内源性污染指制药用水系统运行过程中所致的污染。我国药典规定，注射用水是由纯化水经蒸馏制得，因此纯化水及注射用水的质量与原水污染有很大的关系，制药用水存在微生物和细菌内毒素污染的风险,而各种离子、有机化合物、微粒等经制药用水系统进行适当处理后，不再是构成污染制药用水的主要风险因素。制药用水的制备及质量保证40

原水的污染是制药用水最主要的外源性污染源。美国药典、欧洲药典及中国药典均明确要求制药用水的原水至少要达到饮用水的质量标准。⑴饮用的水质与其水源的污染相关。这是外源性污染的一大特点，它往往随季节的变化而变化。如我国有的地区梅雨季节饮用水水质相对较差。水系统的外源性污染制药用水的制备及质量保证41

水系统的外源性污染

⑵贮罐的排气口无保护措施或使用了劣质气体过滤器、用于混和混床中阴阳离子树脂的压缩空气中存在污染菌。⑶水从污染了的出口倒流。⑷地漏的缺陷以及更换活性炭和去离子树脂来的外源性污染。制药用水的制备及质量保证42

水系统的内源性污染

内源性污染的影响因素⑴制水系统的设计⑵选材⑶运行⑷维护⑸贮存⑹使用以上因素与水系统的内源性污染密切相关，它与外源性污染也有十分密切的相关性。如饮用水系统的微生物污染有可能导致细菌内毒素的增加，使制药用水的质量发生变化。制药用水的制备及质量保证43

水系统的内源性污染

水系统的组成单元均可能成为微生物内源性污染源。原水中的微生物被吸附于活性炭、去离子树脂、过滤膜或其它设备的表面上，可形成生物膜。生物膜中的微生物受到生物膜的保护，增强了抵抗力如对消毒剂有一定的抵抗力。如果其中某些微生物从生物膜脱落并被冲往水系统其它区域时，微生物可吸附于悬浮粒子上，生长繁殖,成为纯化水设备和分配系统的污染源。制药用水的制备及质量保证44

细菌内毒素

热原药学上通常是指那些能致热的微生物代谢产物。大多数细菌和许多霉菌都能产生热原。革兰阴性杆菌的代谢产物，致热能力强是造成热原反应的最主要因素。内毒素的危害性-除了引起高烧外，还有凝血、致代谢紊乱、血小板积聚、骨髓坏死等毒副作用，这是各国重视控制细菌内毒素污染的重要原因。制药用水的制备及质量保证45

我国现行饮用水质量标准

GB5749-2006替代了GB5749-1985标准,微生物检查指标由2项增至6项;增加了大肠埃希菌、耐热大肠菌群、贾第鞭毛虫和隐孢子虫检查,修订了大肠菌群的检验方法。

标准指标限值大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出耐热大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出大肠埃希菌／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出菌落总数／cfu／ml100贾第鞭毛虫／10L＜1个隐孢子虫／10L＜1个注①大肠菌群MPN表示最可能数。当水样检出总大肠菌群时,应进一步检验大肠埃希菌或耐热大肠菌群。②CFU表示菌落形成单位。制药用水的制备及质量保证46

饮用水管理饮用水的标准储水池定期清洗，清洗要有卫生防疫部门的认可有储水池要有二次供水证书储水池的人孔、维修孔必须密闭并且加锁加氯杀菌（国标总氯»0.05)自来水泵定期切换。

制药用水的制备及质量保证47

制药用水的质量标准

1、纯化水ChP2005BP2008/EP6.2USP2009ChP2010酸碱度酸碱度氯化物

硫酸盐

钙盐

硝酸盐(60ppb)硝酸盐(2ppm)硝酸盐(60ppb)亚硝酸盐(20ppb)亚硝酸盐(20ppb)氨(0.3ppm)氨(0.3ppm)电导率电导率

电导率易氧化物TOC或易氧化物TOCTOC或易氧化物不挥发物(1mg/100ml)不挥发物(1mg/100ml)重金属(0.3ppm)重金属(0.1ppm)重金属(0.1ppm)铝盐(10ppb)微生物总数不得过100个/1ml微生物总数不得过100个/1ml微生物总数不得过100个/1ml制药用水的制备及质量保证48

制药用水的质量标准

2、注射用水

ChP2005BP2008/EP6.2USP2009ChP2010pH5.0-7.0pH5.0-7.0(加KCL)

氨(0.2ppm)氯化物、硫酸盐、钙盐、硝酸盐、亚硝酸盐、二氧化碳、易氧化物、不挥发物与重金属均同纯化水硝酸盐(2ppm)

铝盐(10ppb)、电导率硝酸盐，亚硝酸盐，总有机碳、电导率、不挥发物与重金属均同纯化水。细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)微生物总数不得过10个/1ml微生物总数不得过10个/1ml微生物总数不得过10个/1ml制药用水的制备及质量保证49

制药用水的质量标准

3、灭菌注射用水ChP2005BP2008/EP6.2USP2009ChP2010pH5.0-7.0酸碱度pH5.0-7.0(加KCL)pH5.0-7.0(加KCL)氯化物氯化物氯化物氯化物硫酸盐硫酸盐硫酸盐硫酸盐钙盐钙盐和镁盐钙盐钙盐硝酸盐(60ppb)硝酸盐(2ppm)硝酸盐(60ppb)亚硝酸盐(20ppb)亚硝酸盐(20ppb)氨(0.2ppm)氨(0.2ppm)氨(0.2ppm)氨(0.2ppm)二氧化碳二氧化碳二氧化碳易氧化物易氧化物易氧化物易氧化物不挥发物(1mg/100ml)不挥发物(1mg/100ml)不挥发物(1mg/100ml)重金属(0.3ppm)重金属(0.1ppm)重金属(0.1ppm)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)细菌内毒素(0.25Eu/ml)

电导率电导率无菌，可见异物，

不溶性微粒无菌，可见异物无菌，可见异物无菌，可见异物，

不溶性微粒制药用水的制备及质量保证50

制药用水的质量标准

2010版《中国药典》关于制药用水的质量标，除适当减少了某些化学检查项外，主要是增加两项检查：⑴电导率检查：用于控制各种阴阳离子的污染程度。⑵总有机碳检查：控制有机污染（有机小分子）上述两项的在线检测可对制水系统进行实时流程监控。制药用水的制备及质量保证51我国制药用水质量标准概况1980年电子工业的高纯水试行标准。1994年电子机械工业部制定了高纯水JB/T7621-1994行业标准。制药行业参照电子机械工业部行业标准的个别项目。2000版《中国药典》收载了纯化水和注射用水的标准并规定了使用范围。2005版《中国药典》在纯化水和注射用水项下增加了微生物限度标准和检验方法。以上发展可以看出我国对制药用水的质量规定在不断加强,GMP对制药企业制水系统的要求也逐渐加强。2010版《中国药典》制药用水的制备及质量保证52我国现行制药用水微生物质量标准及检验方法

饮用水

GB5749-2006替代了GB5749-1985标准,微生物检查指标由2项增至6项;增加了大肠埃希菌、耐热大肠菌群、贾第鞭毛虫和隐孢子虫检查,修订了大肠菌群的检验方法。

标准指标限值大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出耐热大肠菌群／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出大肠埃希菌／MPN／100ml或cfu／100ml不得检出菌落总数／cfu／ml100贾第鞭毛虫／10L＜1个隐孢子虫／10L＜1个注①大肠菌群MPN表示最可能数。当水样检出总大肠菌群时,应进一步检验大肠埃希菌或耐热大肠菌群。②CFU表示菌落形成单位。制药用水的制备及质量保证53我国现行制药用水微生物质量标准及检验方法纯化水

标准微生物限度细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。

检验方法取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查。注射用水

标准细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10个。

检验方法取本品至少200ml，采用薄膜过滤法处理后,依法检查。灭菌注射用水

标准无菌应符合规定。

检验方法照2010版《中国药典》附录无菌检查法检查。制药用水的制备及质量保证54

检验方法总大肠菌群检验意义大肠菌群作为水质污染的指示菌有近90年的历史。大肠菌群基本上包括了正常人畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌，代表范围广,质量控制更为严格。制药用水的制备及质量保证55大肠菌群分类生化试验大肠埃希菌属枸橼酸菌属克雷伯菌属肠杆菌属ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅠⅡⅢⅣⅠⅡ靛基质试验（I）+-+--+-+---+甲基红试验（M)++++++------V–P------++++++枸橼酸盐利)----++++-+++用试验(CH2S----（+）（+）------乳糖（44.5℃）+--+-----+--制药用水的制备及质量保证56

大肠菌群检验方法

我国GB／T5749-2006收载的检验方法有三种;多管发酵法、滤膜法(薄膜过滤法)及酶底物法,检验步骤如下;

一、多管发酵法⒈乳糖发酵试验⒉分离培养典型菌落革兰染色⒊证实试验⒋结果判断⒌报告制药用水的制备及质量保证57大肠菌群检验方法二、滤膜法(薄膜过滤法)⒈滤膜及滤器灭菌⒉过滤取水样100ml全部过滤。⒊培养取出滤膜贴在制备好的培养基上培养

(品红亚硫酸钠培养基)。⒋挑选典型菌落⒌确认试验⒍结果判断⒎报告制药用水的制备及质量保证58大肠菌群检验方法三、酶底物法在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶(β-Dgalactosidse)的细菌群组分解色原底物释放出色原体,使培养基ONPG-MUG(MMO-MUG)的颜色改变来检测大肠菌群。⒈检验程序⑴水样稀释⑵定性反应

100ml水样加入2.7gMMO-MUG培养基,完全溶解,培养。⑶10管法①100ml水样加入2.7gMMO-MUG培养基,完全溶解。②分别取10ml加入无菌试管中,培养。⑷定量盘(51孔)法①100ml水样加入2.7gMMO-MUG培养基,完全溶解。②将上述溶解的水样全部倒入无菌51孔定量盘内,培养。制药用水的制备及质量保证59大肠菌群检验方法⒉结果判断及报告

培养24h后判断结果,必要时可延长至28h报告。⑴定性反应结果判断培养后呈现黄色为阳性反应,表示水样中含总大肠菌群。报告检出或未检出总大肠菌群。⑵10管法

结果判断培养后呈现黄色为阳性反应,表示该试管中含总大肠菌群。报告计算阳性管数从表中查出总大肠菌群最可能数(MPN)

,结果以MPN／100ml表示。制药用水的制备及质量保证60大肠菌群检验方法⑶定量盘(51孔)法结果判断培养后孔内培养物呈现黄色为阳性反应,表示该孔含总大肠菌群。报告计算阳性孔数从表中查出总大肠菌群最可能数(MPN)

,结果以MPN／100ml表示。制药用水的制备及质量保证61

耐热大肠菌群检验方法

是一群不仅能在35~37℃生长,在44.5℃仍能生长的大肠菌群称为耐热大肠菌群,多是直接来自近期人和动物粪便中的大肠菌群亦称为粪大肠菌群。检验方法采用多管发酵法和滤膜法(薄膜过滤法)检验方法步骤同总大肠菌群检验方法。

制药用水的制备及质量保证62

大肠埃希菌检验方法

GB5749-2006收载三种检验方法；多管发酵法、滤膜法、酶底物法

1、多管发酵法是指总大肠菌群检验阳性培养，在含有荧光底物培养基上，44.5℃培养24h产生β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外灯下产生特征性荧光的细菌