《血红蛋白的提取和分离（第1课时）》公开课课件

应县一中血红蛋白的提取与分离

生物组刘陟3、基本单位：氨基酸蛋白质小知识（回忆）氨基NH2COOH羧基HR—C—导入新课1、含量：占细胞干重的50％以上，是细胞中含量最多的有机化合物。2、组成元素：C、H、O、N（主要）4、分子结构：氨基酸多肽蛋白质肽键：—CO—NH—脱水缩合盘曲折叠5、相对分子质量：高分子化合物导入新课学习目标学习目标：

1、了解色谱法分离生物大分子的基本原理和方法；（重、难点）2、了解电泳法分离生物大分子的基本原理和方法；1.分离生物大分子的基本思路是什么？（10组）2.蛋白质的分离和提取的原理是什么？提取分离方法？（5组）3.凝胶色谱法的概念？凝胶色谱法的原理？（3组）4.缓冲溶液的概念、作用？（1组）5.电泳法的原理？（9组）6.聚丙稀酰胺凝胶电泳原理？SDS作用机理？（7组）自学引导展示任务1.分离生物大分子的基本思路是什么？（10组）学生展示1.分离生物大分子的基本思路：

选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。基础知识2.蛋白质的分离和提取的原理是什么？提取分离方法？（5组）学生展示3、提取分离方法凝胶色谱法凝胶电泳法基础知识2.蛋白质分离和提取的原理：

根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。3.凝胶色谱法的概念？凝胶色谱法的原理？（3组）学生展示2.凝胶：

大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。

根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。1.概念：（一）凝胶色谱法（分配色谱法）基础知识3.原理：当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较大凝胶内部的通道容易进入无法进入凝胶内部的通道只能在凝胶外部移动路程较长移动速度较慢路程较短移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。凝胶色谱法分离蛋白质的原理直径大小运动方式运动速度运动路程洗脱次序相对分子质量大相对分子质量小较大较小垂直向下的运动无规则的扩散运动较快较慢较短先流出较长后流出4.缓冲溶液的概念、作用？（1组）学生展示（二）缓冲溶液1.概念:

在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液pH值基本保持不变的混合溶液。

能够抵制外界的酸和碱对溶液pH值的影响，维持pH基本不变。2.作用:基础知识3.缓冲溶液的配制:

通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。

思考：说出人体血液中缓冲液。NaH2PO4/Na2HPO4H2CO3/NaHCO3基础知识4.提问：在本课题中使用的缓冲液是:___________,其目的是:

利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究(活性)磷酸缓冲液基础知识

（三）电泳：1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。基础知识5.电泳法的原理？（9组）学生展示2.原理：

①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。

②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。

③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。基础知识影响蛋白质分子运动速度的因素

决定运动方向形成库仑力形成阻力决定运动速率电荷性质电荷量分子形状分子大小√√√√√√√基础知识

在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动琼脂糖凝胶电泳示意图3.类型:琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。测定（）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量基础知识6.聚丙稀酰胺凝胶电泳原理？SDS作用机理？（7组）学生展示

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。1.聚丙稀酰胺凝胶电泳原理：

SDS能使蛋白质发生完全变性。解聚成单条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。2.SDS作用机理:基础知识血液血浆水分固体物质：血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（90％）两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团思考：血液有哪些成分？1．凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。A.分子的大小B.相对分子质量的大小C.带电荷的多少D.溶解度2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（）基本不变。A.温度B.pHC.渗透压D.氧气浓度3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。A.相同B.相反C.相对D.相向BBB目标检测4、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是（）A相对分子质量较小