鸡源大肠埃希氏菌流行病学调查及耐药性分析

鸡大肠杆菌病是养鸡生产中常见和高发病，病原菌为大肠埃希氏菌，该菌为条件性致病菌，常存在于鸡的呼吸道和消化道。该病临床病型多样，包括脐带炎、急性败血症、眼炎、气囊炎、肉芽肿、脑膜炎、滑膜炎、关节炎等，这些病型在临床上或单独发生或与其他疾病混合感染。该病不仅可以通过呼吸道、消化道传播，还可以经卵垂直传播，可以感染不同日龄的鸡，雏鸡和青年鸡易感性较高，季节性不明显，带菌鸡是本病的主要传染源，鸡粪以及被鸡粪污染的栏舍、鸡笼、垫料、饲料、饮水、鞋子、服装等均能传播本病。天气寒冷、闷热、禽舍通风不良等恶劣环境导致鸡的免疫力下降，进而引起鸡发病。大肠埃希氏菌能造成消化道代谢紊乱，引起鸡拉稀，造成鸡群均匀度差，生长受阻，料肉比高，发病率和死亡率上升，死淘率增加，严重影响鸡群的生产性能和经济效益，给养鸡业造成很大的危害。鸡大肠埃希氏菌血清型众多，且不同血清型之间的菌株缺乏交叉免疫保护，不同地区流行的优势血清型不同，鸡群无法通过接种疫苗的方式来获得保护。抗菌药物是当前防治鸡大肠埃希氏菌病的重要手段之一，但很多养殖场没有对病原菌做药物敏感性试验，一直在盲目使用抗生素，致使大肠杆菌耐药性日益严重，耐药机理改变，呈现多重耐药和交叉耐药。抗生素的乱用和滥用还会导致肉食品中的药物残留超标，残留于动物体内的抗生素，通过食物的形式进入人体，导致人体出现泛发性瘙痒、红疹、头疼等过敏反应，严重威胁着人类的健康，成为公共卫生问题。为有效控制动物细菌感染性疾病的发生与流行，防止抗生素的盲目使用和滥用，韶关市专门立项对本区域内动物细菌感染性疾病进行病原学调查及病原菌耐药性监测研究，对鸡源大肠埃希氏菌药物耐药性监测是该项研究内容之一。本研究通过2022年度采集的广东韶关地区养鸡场鸡咽喉部、泄殖腔拭子和病死鸡剖检病料进行细菌分离鉴定和药敏试验，研究广东韶关地区鸡大肠埃希氏菌流行规律及其耐药性，为临床合理用药和防治鸡大肠埃希氏菌病提供科学依据。1材料与方法1.1样品来源737份样品来自广东韶关地区41个规模养鸡场和28个土鸡散养场，用独立包装灭菌的棉拭子采集鸡喉头和肛门粪便样本700份，病死鸡肝脏、心血、脾、肠道内容物病料37羽份。采集的所有样本、病料放在保温箱中低温保存，2h内运回实验室。1.2主要实验材料麦康凯琼脂培养基、HM琼脂培养基购自广东省环凯生物科技有限公司，细菌生化鉴定微量反应管和药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司。1.3细菌分离、鉴定与纯培养每份样品划线接种于麦康凯琼脂平板培养基，置于37℃培养24h，观察菌落生长情况，挑取表面光滑湿润、边缘整齐、圆形、稍隆起的粉红色单个典型菌落在麦康凯琼脂平板培养基划线纯培养，获得纯培养物后进行革兰氏染色镜检，并参照《伯杰氏细菌鉴定手册》方法进行生化反应鉴定。镜检显示两端钝圆，散在或成对存在的革兰氏阴性短杆菌，生化反应符合靛基质试验阳性、MR试验阳性、V-P试验阴性、枸橼酸盐利用试验阴性、氧化酶试验阴性、硫化氢产生阴性、山梨醇发酵阴性、赖氨酸脱羧酶阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性、棉子糖发酵阳性和卫矛醇发酵阳性者，鉴定为埃希氏大肠杆菌。1.4分离菌的药物敏感性试验按照细菌药敏试纸使用说明书，根据K-B(Kirby-Bauer)纸片扩散法对分离菌株进行常用药物的敏感性测定，统计试验结果，分析其耐药性。药敏纸片包括青霉素、氨苄西林、阿莫西林、阿奇霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、链霉素、阿米卡星（丁胺卡那）、卡那霉素、四环素、头孢噻肟、新霉素、红霉素、强力霉素（多西环素）、壮观霉素、头孢氨苄、氟苯尼考、泰乐菌素、头孢噻吩、林可霉素、克林霉素共24种药物（见表1）。表1药敏试验标准2结果2.1细菌的分离鉴定结果通过麦康凯培养基对737份样品进行细菌分离，革兰氏染色镜检，生化特性鉴定等，结果显示541份样品分离到大肠埃希氏菌，检出率73.41%。其中37份病死鸡病料大肠埃希氏菌阳性29份，检出率78.38%。总体泄殖腔大肠埃希氏菌检出率87.78%(316/360)，咽喉部大肠埃希氏菌检出率58.24%（198/340）。2.2不同规模饲养场样品分离菌检出结果分离菌结果显示，规模场大肠埃希氏菌检出率为73.72%（303/411），散养场大肠埃希氏菌检出率为73.01%(238/326)，规模场与散养场差异不大。2.3分离菌的药敏试验结果分离菌的药敏试验结果显示（见表2），大部分分离菌株表现出多重耐药性（耐3种药物以上）。3重药物耐药菌株比例8/69，占11.60%，4重药物耐药菌株比例3/69，占4.35%，5重药物耐药菌株比例4/69，占5.80%，6重药物耐药菌株比例3/69，占4.35%，7重药物耐药菌株比例6/69，占8.70%，8重药物耐药菌株比例4/69，占5.80%，9重药物耐药菌株比例4/69，占5.80%，10重药物耐药菌株比例6/69，占8.70%，11重药物耐药菌株比例3/69，占4.35%,12重药物耐药菌株比例4/69，占5.80%,13重药物耐药菌株比例5/69，占7.25%,14重药物耐药菌株比例2/69，占2.90%,15重药物耐药菌株比例1/69，占1.45%,16重药物耐药菌株比例2/69，占2.90%。分离菌株普遍对阿奇霉素、头孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星敏感，对青霉素、氨苄西林、链霉素、卡那霉素、四环素、阿莫西林、氟苯尼考、泰乐菌素、林可霉素、克林霉素耐药，最高可达到16重药物耐药，表明韶关地区大肠埃希氏菌多重耐药现象比较严重，多重药物耐药比例高达79.71%(55/69)。表2药敏试验结果规模场分离菌多重药物耐药比例为97.56%（40/41），散养场多重药物耐药比例为53.57%(15/28)，表明规模场抗生素使用较散养场频繁。3讨论鸡大肠埃希氏菌耐药性的产生与平时饲养管理过程中长期不合理使用抗菌药物密切相关，饲料中长期使用小剂量抗菌素作为动物生长促进剂、细菌性疾病感染时盲目和长期大量使用抗菌素等均导致大肠埃希氏菌很强的耐药性。细菌的耐药性与抗生素药物的选择压力有关，由于抗菌药物的不合理使用，导致大肠埃希氏菌出现大量多重耐药菌株，相关研究表明养殖业中常用的阿莫西林、氨苄青霉素、复方新诺明、链霉素、四环素等抗生素出现普遍的耐药性，其耐药率甚至达到了100%。本研究分离的鸡大肠埃希氏菌菌株普遍对青霉素、氨苄西林、链霉素、卡那霉素、四环素、阿莫西林、氟苯尼考、泰乐菌素、林可霉素、克林霉素耐药，多重药物耐药现象比较严重，多重药物耐药比例高达79.71%，规模场分离菌株多重耐药比例高达97.56%，表明规模场盲目使用和滥用抗菌素现象非常严重。大肠埃希氏菌为人畜共患病病原体，人感染大肠埃希氏菌可引起腹泻，新生儿脑膜炎等，大肠埃希氏菌在宿主体内被杀死后所释放的内毒素可引起多种疾病，大肠埃希氏菌病的有效防控不仅可减少养鸡业的经济损失，对人类公共安全卫生也具有重要意义。由于鸡大肠杆菌病是环境条件性疾病，病原菌大肠埃希氏菌血清型众多,且不同血清型间缺乏交叉保护力,疫苗免疫接种效果不理想，疫苗免疫接种不作为预防该病的首选方法,目前该病的防治主要还是通过加强饲养环境的管理，控制鸡群的饲养密度和使用抗菌药物。大肠埃希氏菌病的防治应该根据药敏试验选择敏感抗生素，在防治过程中采取联合用药、交叉用药以及轮换用药的方式提高治疗效果，减少耐药性的产生，同时可通过加强通风换气，消毒，控制环境的温度和湿度等措施预防大肠埃希氏菌