扩增仪操作规程

扩增仪操作规程

1目的

建立一个QS5全自动PCR仪分析系统的使用、维护保养与清洁标准操作程序，规范其

使用操作流程，保证实验结果的准确性。

2范围

本标准适用于QS5全自动PCR仪分析系统的使用、维护和保养与清洁。

3仪器介绍

全自动医用PCR分析系统用于进行实时PCR(Real-timePCR)实验并对实验数据进行

分析。仪器借助相应的试剂，使待检测物目标核甘酸在特定温度条件下产生扩增、熔解等

现象并借助荧光的形式加以体现。通过对实验中产生荧光信号的分析，实现对目标核甘酸

的定性、定量判断，或对目标核甘酸的熔解曲线、基因分型进行相应的研究。

本仪器主要用途为用于临床实验室中利用荧光聚合酶链反应方法对多种基因进行定

性或定量分析。

4仪器启动

将全自动医用PCR分析系统电源连接线连接在220V插座上，同时闭合电源开关，开

启全自动医用PCR分析系统。

5软件操作

5.1SNP分型实验简易操作流程

5.1.1、双击桌面图标QuantStud...开启QuantStudioDesign&Analysis

Design&...

Software,或从开始菜单>AllPrograms>AppliedBiosystems>QuantStudio

Design

&AnalysisSoftware>QuantStudioDesign&AnalysisSoftware开启软件。

5.1.2、进入主界面后，点击“CreateNewExperiment”。

5.1.3、在“Properties”界面设置实验属性：

a.输入实验的名称；

b.选择仪器型号；

c.选择仪器的block(加热模块)类型；

d.选择实验类型为"Genotyping”；

e.选择实验试剂类型为"TaqmaniOReagentsv；

f.选择运行模式(runmode)为"Standard"。

FiteEditAnalystsToolsHelp

PropertiesMethodDefineAssignRunResultsExport

ExperimentProperties0*Save

Name2015-11-29J24602

Barcode

Username

InstrumenttypeQuantStutee5System

Blocktype96-WelO2-mLBlock

ExperimenttypeQenotypmg*—(3)

ChemistryTaqManeReagents/e)

RunmodeStandard

Managechemistrydetails

5.1.4、点击“Next”进入“Method”界面,设置实验的运行程序。

a.勾选"pre-PCRRead”和uAmplificationn；

b.输入PCR反应体积；

c.单击更改PCR反应的温度和时间；

d.更改反应循环次数；

e.确认相机图标为亮蓝色状态，以保证信号被采集;

5.1.4.1、(可选)设置多梯度反应温度：Q单击(Advanced

Settings)；

Q勾选veriflex,◎然后更改block上相应的反应温度，相邻区域温

度差异不能超过5℃。

ExperimentMethod

VolumeCover

105(TCinclude/Pre-PCRRe

Pre-ReadSugeHoldSugePCRStagePost-ReadStag,

950,C950,C

600X60.0*C600*C

10001650015

1.65■■i

30ga1.6

1.6*C/«史仓。CD0100830

©①

StcplSteplStcpl

L«g«nds:DataCoMectkxiOnDataColKtionOff[J]PauMOnPauseOffOAdvancedSettingsVVenFtex

注:QuantStudio3可设置3个梯度反应温度；上图为QuantStudio5示

例图，可设置6个梯度反应温度。

5.1.4.2、(可选)设置暂停程序：点击。图标，Q勾选Pause,©

设置暂停前的反应循环数(Pauseaftercycles),以及暂停后的

温度

(PausingTemperature,范围：4~30℃)。

ExperimentMethod

VolumeCover

50pL1050,CincludegjPre-PCRRe

Pre-ReadStageHoldStagePCRStagePost-ReadStage

95OX950,C

600,C600*C600*C

16*C/«1SOO16・C/S0015

0】君1.6・C7・00：30

1.6*c/s0030回0

◎。QI@0

©I①

SteplSteplSteplStep2Stepl

Legends：由DataCollectionOnDataCollectionOff|QPauseOnQJPauseOffQAdvancedSettingsVVeriFlex

ExperimentMethod

VolumeCover

501050'CIncludeyPre-PCRRea

Pre-ReadStageHoldStagePCRStagePost-ReadStage

95.0,C95.0X

600*C60.0*CG00*C

10:00

1.6*C/t00:151.6

01000030

1.65a0

④QIA由。IDGO

②

7Pause③

PauseafterCycle10-

Step)Stepl

PausingTemperature25.0*

Legends:DataColectionOnGJDataCollectionOHQ]PauseOn皿.PauseOffOAdvancedSettingsVVehFlex

5.1.5、点击“Next”进入“Define”界面，编辑SNP信息和样本名称。

,SoftwatvvLl

5.1.5.1、编辑SNPAssay信息：

(1)在“SNPs”内单击"Action”,选择“Edit”进入SNPassay编辑

界面。

QQuMtStudn<Ooign&AnaiymSoftwarevLl

FiteEdrtAnafymTooKHelp

PropertiesMethodDefineAssignRunResultsExport

DefineTargetsandSamples

②在;o“SNPAssayName”中填写待测SNP位点名称;

在£)'Allelel/Allele2Name”中输入待测位点的碱基名

称；在＜o

"Reporter"和"Quencher”中选择所标记的荧光基团及淬灭基

团。对于“Quencher”的选择，如果是MGB探针，请选择

NFQ-

MGB"；如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；如果是其他形式

的非荧光淬灭基团，请选择“None”。设置完成后点击“OK”。

5.1.6、点击“Next”进入“Assign”界面，编辑反应样品板。利用

鼠标单选或拖拽以选择反应孔，然后勾选左侧的对应的SNPs及样本，

同时在“Task”选项中设定该反应孔的类型（U代表未知样本，N代表

阴性对照，口、国、7代表三种基因型的阳性对照）。

PropcrtmMethodDefin*AstiqnRunResult*Expo<1

AssignTargetsandSamples0Actionv5Sav*v

SNPs

三k

290e677l.20

二

"

Samples::.:

/

■NA108S9

一

一

■NA17KM

■NA171OS

whQ|MQaQ]oBoBoOEn<ny

PravtowNot

5.1.7、点击“Next”进入“Run”界面，点击“Save”保存文件，然

后点击“STARTRUN”开始运行。

5.1.8、实验运行结束后，进入“Results”界面，点击右上角的

“Analyze”按钮分析数据并查看结果。

5.1.8.1、查看分型结果：选择uAllelicDiscriminationPlot”查看基因分

型图。点击。在“SNPAssay”中可查看其他SNP的基因分型

图。

Results0Actionv□>Save

0

e

?£

回©7

AllelicDiscriminationPlot£&

N

$

』r

』m

』

』

*1MMaI・H«n<My*MnAl

•»«r(ri>u>A*clrIXUndrtrrnwied

PrwtouaN«n

Results查看其他位点分型图

SNPAC__10048053_10vANTCPkMTypeCartesian

回<7p

ShowCycle:40

5.1.8.2、查看“QCSummary”结果：反应孔可能存在异常情况时,

会出现黄色三角提示，数字1代表有一种情况，2代表有两种情况，以

此类推。详细信息及解决方案可以在“FlagDetails”中查看。

Results(XActionv5Save

QCSummary-View

5

FlagDetais

De«cnpttOflFrequencyB

PCFALPosCivtcontrolfated

D

CMHIICTFeCmalniirHi*rnfcamnJrtri*CTM«

FlagDetal:ThepostivecontrolcaldoesnotmatchtheenteredQ”—«*<.M•••W

genotype.・・・・・・・，

FlaggedWels:Hl,查看解决方案・•・・・・・

ViewPCFA1LTroubleshooongInformacon

Hy:*•«•、'；；

TotalWels96ProcessedWeHs96M^ualtyOmittedWells0SNPAssaysUsed2

WeNsSetUp96FlaggedWels1AnalystsOmrttedWelts0SamplesUsed7

DJssOzgliSoQo0Empty

ThermoFisher

绝对定量简易操作流程SCIENTIFIC

5.1.9、数据导出：在“Export”界面下根据需要导出数据。

5.2绝对定量简易撵铝流程

5.2.1、双击桌面图标|QuantStud...开启QuantStudioDesign&Analysis

Design&…

Software,或从开始菜单>AllPrograms>AppliedBiosystems>Quant

StudioDesign&AnalysisSoftware>QuantStudioDesign&Analysis

Software开启软件。

N«wExperimentOpenExistingExperiment

CTMUNewExperiment!vQp«n.

5.2.3、在Properties"界面设置实验属性:

a.输入实验的名称;

ThermoFisher

绝对定量简易操作流程SCIENTIFIC

b.选择仪器型号;

选择仪器的block(加热模块)类型;

d.选择实验类型：“StandardCurve”；

选择实验试剂类型：Taqman探针法选择"Taqmanreagents",

SYBR染料法选择"SYBRGreenReagents”,其他选择

“Other”；

选择运行模式(runmode)：普通试剂选择"Standard”；快

ExperimentProperties□lSav*

Name201511-29124602

Barcode

Username

InstrumenttypeQuantStudioS5System

Blocktype96-WH02mLBlock

⑥

ExpervnenttypeStandardCurve

ChematryTaqManeReagents

RoimodeStandard

Managechemistrydetails

Next

ThermoFisher

绝对定量简易操作流程SCIENTIFIC

5.2.4、点击“Next”进入“Method”界面，设置实验的运行程序。

ThermoFisher

绝对定量简易操作流程SCIENTIFIC

5.2.4.1>(可选)设置多梯度反应温度：。单击(AdvancedSettings)；

Q勾选veriflex,。然后更改block上相应的反应温度，相邻区域温

度差异不能超过5℃。

ExperimentMethod

VolumeCover

1060'C

HoldStagePCRStage

95.0,C950-C

600*C

SOO*CIQ00165ocris

1.65%1.6X/S-

01:00

16,C/s0200

m

咆I。数。

It①

Step)Step2Step1Step2

DataCollectionOffIT1PauseOnQPauseOffOAdvancedSetbngsVVenFlex

Cover

ML1050・C

HoldStage

00'C

>1

onOn

注:QuantStudio3可设置3个梯度反应温度；上图为QuantStudio5示

例图，可设置6个梯度反应温度。

ThermoFisher

绝对定量简易操作流程SCIENTIFIC

5.2.4」、（可选）设置暂停程序：点击Q图标，Q勾选Pause,O

设置暂停前的反应循环数（Pauseaftercycles）,以及暂停后的温

度

（PausingTemperature,范围：4~30℃）。

ExperimentMethod