由非洲猪瘟培训引发的思考

2018年，针对非洲猪瘟国家出台了许多政策、法规，以及技术支持。2019年3月，国家出台了《农业农村部关于加强屠宰环节非洲猪瘟检测工作的通知》，通知中要求各省、自治区、直辖市及部属有关事业单位，贯彻落实国务院非洲猪瘟防控工作专题会议精神，切实做好屠宰环节非洲猪瘟检测工作。我国应上级领导的指示要求，对本市范围内生猪屠宰企业的兽医化验人员进行非洲猪瘟实验室检测实操培训内容，从2019年开始至今，在经历了多次的实操培训之后，对生猪屠宰企业进行飞行检查与常规抽样调查发现，在实际中，生猪屠宰企业仍然存在不少问题，培训的内容与实际中工作的操作相差甚远，是哪个环节出现了问题，使得培训成为了纸上谈兵，市场上PCR商品化试剂盒简单化，在如此形势下检测非洲猪瘟应该相较简单，但却经常接到各种电话咨询非洲猪瘟实验室检测的问题，于是通过调查，反思培训的内容发现，培训的内容与实际生产中的检测存在一定差异，这些是集中培训的时候，没有办法具体统一讲解的内容，现归纳如下：1仪器方面的问题1.1统一培训存在的问题最大差异来自于仪器方面，因为各个屠宰企业所购置的荧光PCR仪器不同，在培训中统一培训仪器的使用是不现实的，并且也脱离实际情况，变成空谈，各个化验人员回到自己的实验室后，面对荧光PCR仪仍然不知所措，出现机器运行出错，软件设置出问题等情况，自己没办法解决，实验没办法开展下去，一脸茫然。这是集中统一培训弊端之一；统一培训只能够传授大家共通的知识，基本操作，对个人私企的PCR仪器，作为培训讲师不可能说的清楚，具体的问题具体分析，各自的PCR仪问题，还得自己想办法解决。作为培训教学者，也不是所有市场上的PCR仪器都使用过，面对市场上琳琅满目、各式各样的荧光PCR仪,也很难真正去解决企业的PCR仪存在的问题，至多在培训的解答疑惑互动环节提出存在的问题，有针对性的去推敲问题的答案，或给出解决的途径。1.2建议（1）利用PCR卖家的售后服务电话进行咨询，因本市地理位置属于偏远山区，上门售后不在本地，唯有通过电话或是微信视频等方式探讨问题的解决办法。（2）屠宰企业或是第三方公司可以邀请专家或是业内人士到他们的实验室进行现场实操指导，这种现场培训是很具有时效性的，培训效果也很好，相较于大家集中统一培训，亲临现场培训教学，收到的效果要好很多，针对性也很强，遇见问题，立马可以当场解决，效果立竿见影，经过一次实操培训下来，非洲猪瘟检测实验均可顺利展开，培训人员只需要多练习几次，熟练之后，完全可以独自开展这项操作。2试剂方面的问题2.1试剂存在的问题（1）试剂厂家的不同导致在培训的时候没办法集中讲解教学，与仪器差异一样，生猪屠宰企业选择不同试剂厂家，方法步骤会不同，虽然原理一样，但是面对的是没有基础的学员，培训的老师也难以教学到位。（2）试剂反复冻融。多个屠宰企业实验室了解其试剂使用情况，发现一盒非洲猪瘟检测试剂盒，一般需要使用5次以上才使用完，而化验员也没有意识到反复冻融对试剂的影响，试剂失效也不清楚是什么原因，询问化验员是否仔细看试剂说明书上的注意事项，多数表示只看说明书上的操作部分。（3）试剂保存不当，在观看化验员实操过程中发现，部分化验员在检测试剂盒使用结束后，没有及时将试剂放回冰箱中保存，而是长时间置于室温环境中。2.2建议（1）各个生猪屠宰企业选择与笔者培训相同的试剂厂商，所推荐的试剂也是经过国家农业部审核、考核通过后公开的厂商产品。（2）一般试剂说明书上表明，试剂不宜反复冻融超过三次以上，化验员在第一次开封检测试剂盒是将试剂进行分装，降低反复冻融回试剂的影响。（3）试剂使用结束后及时放回冰箱，防止试剂长时间置于室温环境中而导致试剂失效。3试验污染方面的问题3.1试验污染问题污染一直都是实验中比较头疼的问题。在屠宰企业，兽医实验室布局比较简单，通常是一间房间一张桌子，一台冰柜或是冰箱，没有隔间，PCR仪器放在桌子角，所有的操作，包括样品处理，核酸释放、核酸提取等的操作都在PCR仪旁边开展；笔者在部分屠宰场发现，实验人员将检测试剂盒与样品存放在同一冰柜中，这在PCR实验中是绝对不被允许的；部分实验人员在每次试验结束后，并没有对实验台进行消毒，或者只是拿抹布简单擦拭实验台，这样很难保证下一次实验过程是否被污染。按照上级文件要求，市级兽医实验室至少要划分为三个区域，样品处理区，试剂配制区，反应扩增区，要求比较严格的还要有负压区域。相较于屠宰企业的简单布局，在污染问题上已经没办法从物理上进行隔绝。一旦形成污染，将会是比较麻烦的事情，尤其是屠宰量较大的企业，每天都要进行PCR非瘟检测，很难保证没有污染，另一个问题是，化验员是否有意识到实验室已经被污染了，污染并不是试验阴性对照跳变为阳性，亦或是在重复做同样试验的时候，得不到同一的结果。3.2建议（1）对实验室进行简单的功能分区，为降低成本，可以用玻璃做墙，在房间内进行简单隔离，同时加装排气扇，通风透气，有条件的安装空调，但不建议安装电扇；（2）将样品与非洲猪瘟试剂盒分开保存，添加多一台冰柜或是冰箱，专门存放样品或是专门存放试剂。（3）实验室里面配备紫外灯或紫外灯车，每次实验结束后，对实验室台面进行紫外灯照射杀菌消毒30min以上，并用含氯消毒剂进行擦拭桌面、移液器内管等。4人员方面的问题4.1人员年龄与专业能力问题第一，生猪屠宰企业内部员工大多数为非专业人员，屠宰企业能招到兽医专业的人选，但未必可以胜任该项检测非洲猪瘟的工作；第二，PCR实验虽然简化很多步骤，商品化试剂盒也都简单化，也有预分装好的，实验人员仍然弄错，原因是，这些化验员都是屠宰企业从屠宰工中挑选的，有些工作人员年龄较大，视力减弱，看细微的东西看不清楚，PCR反应酶仅需要几微升的量，非常少，如不仔细辨认，容易出错。4.2建议（1）招聘兽医相关专业的毕业生，有一定的知识储备，能较好的胜任非洲猪瘟检测工作，但并非绝对是专业人员，积极主动、勤奋好学的人员，通过培训，多次实操练习，也可以很好的胜任非洲猪瘟检测工作；（2）从事非洲猪瘟检测的人员，需要细心、有耐心、认真负责；（3）不要经常变更化验人员，让专业的人做专业的事。5生物安全方面的问题5.1企业与员工生物安全意识较差屠宰企业管理混乱，虽然实验室的制度钉在了最显眼的地方，但是管理层也大多是松散管理；做实验没有专门的工作服，屠宰企业工作服都是统一配置，进入实验室应该更换专门的衣服；PCR实验室要求较严格。进行PCR实验时有些工作人员嫌麻烦不戴口罩、手套的情况在屠宰场很常见，在培训的时候，重点强调生物安全的知识，这是很重要的一块内容。在许多屠宰场，企业员工很少有意识去防护自己。生物安全问题自始至终都是摆在大家面前的头等大事。屠宰企业每天屠宰几百上千头猪，猪又来自各地，不可能都是无病的，比如说炭疽，是一种人畜共患病，如果不严格要求员工做好个人防护，皮肤直接接触感染炭疽的猪，或吸入带大量炭疽芽孢的气溶胶等，均可能感染炭疽。因此，每次培训的时候，都一直在强调生物安全问题。5.2建议（1）屠宰企业管理层应重视生物安全问题，组建生物安全委员会，制定生物安全制度，向员工强调生物安全问题，学习生物安全知识，定期培训；（2）配备工作服、口罩、手套等防护用品之后在上岗工作，严格要求员工做好个人防护；（3）管理层要加强管理力度，不定期检查化验员在实验室进行实验时，是否做好个人防护。6技术知识方面的问题6.1关于非洲猪瘟的知识欠缺非洲猪瘟在中国也经历了几年时间，大大小小的教学、实操培训也有很多次了，但是笔者在生猪屠宰企业调查中发现，有些化验员经过培训之后，仍然搞不清阴阳曲线。屠宰企业的荧光PCR不会很复杂，现在试剂又简单化，非常简单的几步骤，结果判定，说明书写得很简单明了，实验过程也没问题，但是问及结果，还是有化验员表示不会判定分析。6.2建议（1）招聘具有相关专业知识的员工，有知识基础能够较快上手非洲猪瘟检测工作，但并非一定是专业人员，积极主动、勤奋好学的人员，通过培训，多次实操练习，也可以很好的胜任非洲猪瘟检测工作；（2）屠宰企业要制定培训计划，加强对化验员的岗前培训，通过对化验员进行考核通过后上岗，组织化验员参与非洲猪瘟检测技术培训，让化验员熟练掌握非洲猪瘟检测技术，不仅做到检测准确，还要对实验结果进行准确的判定分析。7总结通过对集中统一培训与到屠宰企业进行现场实操培训进行比较，各有优缺点，其中集中统一培训可以讲解一些非洲猪瘟理论方面的知识，比如非洲猪瘟的临床症状，解剖的病理现象，非洲猪瘟病原学特点，流行病学特点以及国家对非洲猪瘟的防控政策等理论方面的知识，而对实操检测统一培训就捉襟见肘了，正如文中提到的由于各个生猪屠宰企业的硬件条件不同，琳琅满目的PCR仪，集中统一培训仪器、试剂是不现实的，但是实操检测这一块内容又是非常重要的，是属于实战内容，笔者在培训操作时候也只能一边讲解一边与大家讨论各自的PCR仪器特点，希望尽可能的与他们实际工作同步