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文档简介
DB13河北省质量技术监督局发布I本标准主要起草人：袁万哲、孙继国、宋勤叶、马增军、金东航、李丽敏、张磊、李1猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法DEPC：焦碳酸二乙酯（diethypyrocarbondNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxy-ribonucleosidetrPCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreacRNA：核糖核酸（ribonucleicRT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（reverse-transcriptionpolymerasechainre24.102×TaqMasterMix（Dye）。以灭活的猪流行性腹泻病毒Vero细胞培养将棉拭子深入肛门转一圈沾取粪便；将采集后的棉拭子放入盛有1.0mLPBS（见附录A中A.5）的用绳子将胃或肠两端扎紧，用剪刀采集胃肠等，装入一次性灭菌容器，3样品采集后放入密闭的塑料带内（一个采集点的样品放一个塑料带内），于保r/min离心15min，取上清液转入无菌的1.5mL离心管中将所采集的胃或肠及内容物至于洁净，灭菌并烘干的搪瓷盘中，抽取内容物或者取刮取胃肠按照质量体积比（1:1）加入样品保存液进行充分研磨，4℃条件下3000r/min离心15min。取上清转42℃水浴1h，即得到cDNA溶液，直接用于下面的P4阳性对照的扩增产物经电泳检测，在预期大小的条带产物电泳图见附录C中C.1则判定为猪流行性腹泻病毒核酸检测阳性；如果样品的RT-PCR产物电泳5核酸染料，均匀铺板，厚度为3mm～5mm。Na2HPO46引物浓度(μmol/L）
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