TCI 308-2024 饲料级 绿藻多糖

CCSB50/59Feedgrade—Greenalgalpolysacc2024-03-25发布中国国际科技促进会发布T/CI308-2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由青岛海兴源生物科技有限公司提出。本文件由中国国际科技促进会归口。本文件起草单位：青岛海兴源生物科技有限公司、威海迪普森生物科技有限公司、中国海洋大学、南京益纤生物科技有限公司、青岛市畜牧工作站（青岛市畜牧兽医研究所）、国科联盟（北京）国际信息科学研究院。本文件主要起草人：牟海津、姚闽、王建磊、朱琳、郝小静、陈飞扬、朱常亮、付晓丹、肖梦诗、马琳。本文件为首次发布。1T/CI308-2024饲料级绿藻多糖本文件规定了饲料级绿藻多糖的生产工艺、技术要求、试验方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存。本文件适用于以石莼、浒苔等干（或湿）大型绿藻为原料，经粉碎（或破碎）、提取、分离、浓缩（或不浓缩）、添加（或不添加）辅料、灭菌、干燥（或不干燥）等工序制得的饲料用绿藻多糖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6438饲料中粗灰分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB10648饲料标签GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13091饲料中沙门氏菌的测定GB/T14699饲料采样3术语和定义本文件没有术语和定义。4生产工艺原料→粉碎（或破碎）→提取→分离→浓缩（或不浓缩）→添加（或不添加）辅料→灭菌→干燥（或不干燥）→包装→检验合格→入库2T/CI308-20245技术要求5.1原料要求应根据绿藻形态特征或种质证明等材料确认原料为大型绿藻，原料新鲜无腐败，无异味，杂质或杂藻的含量不超过干重的20%。5.2辅料要求可添加麦芽糊精、抗结剂、增稠剂作为辅料，所添加辅料应符合国家相关标准的规定。5.3感官要求感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求固态绿藻多糖液态绿藻多糖色泽白色或浅绿色到深绿色白色或浅绿色到深绿色气味具有绿藻应有的气味，无异味具有绿藻应有的气味，无异味状态均匀粉末或颗粒，无肉眼可见杂质液态，无肉眼可见杂质5.4理化指标理化指标应符合表2的规定。表2理化指标固态绿藻多糖液态绿藻多糖总糖含量，%≥30.06.0鼠李糖占总糖比例，%≥25.020.0固形物含量，%≥-粗灰分，%≤50.0水分，%≤20.0-粒度（40目标准筛通过率），%≥99.0-总砷，mg/kg≤3.0铅，mg/kg≤5.03.03T/CI308-20245.5微生物指标微生物指标应符合表3的规定。表3微生物指标固态绿藻多糖液态绿藻多糖沙门氏菌（/25g）不得检出不得检出6试验方法本文件所用试剂和水，除特殊注明外，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水，色谱分析中所用水均为符合GB/T6682中规定的一级水。溶液按照GB/T603配制。6.1感官要求取适量试样置于洁净的白色盘（瓷盘或同类容器）中，观察色泽、状态和杂质，闻其气6.2理化指标6.2.1总糖含量按照附录A规定的方法测定。6.2.2鼠李糖占总糖比例按照附录B规定的方法测定。6.2.3固形物含量取5.0-10.0g样品，置于已烘干至恒重的水分测定仪托盘中，用水分测定仪将水分蒸干，然后将托盘放入100-105℃烘箱中烘干2h，置于干燥器内放置30min，称量，然后，再放入100-105℃烘箱中烘干1h，置于干燥器内放置30min，称量。反复上述操作，直至恒重。按公式（1）计算固形物含量：N=×100%…………………（1）式中：N—样品中的固形物含量，单位为百分率（%n—固形物和托盘的质量，单位为克（g）；n1—托盘的质量，单位为克（g）；M—样品取样质量，单位为克（g）。4T/CI308-20246.2.4粗灰分按GB/T6438规定的方法测定。6.2.5水分按GB/T6435规定的方法测定。6.2.6粒度按GB/T5917.1规定的方法测定。6.2.7总砷按GB/T13079规定的方法测定。6.2.8铅按GB/T13080规定的方法测定。6.3微生物指标按GB/T13091规定的方法测定。7检验规则7.1批次以同一班次、同一品种、同一工艺的产品为一个批次。7.2采样按GB/T14699进行。7.3检验7.3.1出厂检验每批产品应进行出厂检验，固态绿藻多糖的检验项目包括感官要求、总糖含量、粗灰分、水分、粒度，液态绿藻多糖的检验项目包括感官要求、总糖含量、粗灰分、固形物含量。检验合格后签发合格证，产品凭检验合格证出厂。7.3.2型式检验有下列情况之一时，应进行型式检验。检验项目为本文件中规定的全部项目:a)停产6个月以上，恢复生产时；b)原料变化或改变主要生产工艺，可能影响产品质量时；c)国家行政监管部门提出进行型式检验要求时；d)出厂检验与上次型式检验有大差异时；e)正常生产时，每年至少两次的周期性检验；f)对质量有争议，仲裁需要时。5T/CI308-20247.4判定规则7.4.1所检项目全部合格，判定为该批次产品合格。7.4.2检验项目如出现不合格时，应重新自同批产品中抽取两倍量样品进行复检，以复检结果为准。若仍有1项不合格，判定该批产品不符合本文件的规定。8标签、包装、运输、贮存8.1标签按GB10648执行。8.2包装应采用符合国家相关标准的、无毒的包装材料。8.3运输产品在运输过程中应防止日晒雨淋、包装破损，严禁与有毒、有害物质混装、混运。8.4贮存产品应贮存于避光、干燥处，避免与有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。密闭保存。8.5销售和召回销售和召回应符合相关国家标准和有关规定。6T/CI308-2024附录A总糖含量的测定A.1原理绿藻多糖在酸性条件下水解，水解物在硫酸的作用下，迅速脱水生成糖醛衍生物，并与苯酚反应生成橙黄色溶液，反应产物在490nm处比色测定，标准曲线法定量。A.2试剂A.2.1除另有说明外，所用试剂均为分析纯。A.2.2水为GB/T6682中规定的三级水。A.2.3浓硫酸：ρ=1.18g/mA.2.4苯酚溶液（50g/L称取5.0g苯酚，用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，摇匀，置4℃冰箱中避光贮存。A.2.5葡萄糖标准储备溶液（200μg/mL）：精密称取葡萄糖0.02g（精确至0.0001g），用水溶解并定容至100mL容量瓶中，摇匀，置4℃冰箱中避光贮存。A.3仪器A.3.1可见分光光度计。A.3.2分析天平：感量0.0001g。A.3.3涡旋混合器。A.3.4棕色比色管：25mL。A.3.5移液管：1mL、5mL。A.3.6容量瓶：100mL。A.4测定步骤A.4.1标准曲线的制定100μg/mL、200μg/mL的葡萄糖标准溶液。分别移取上述溶液1mL于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，然后立即加入浓硫酸5.0mL（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便反应液充分混合），静置10min，涡旋混匀，室温下静置20min，在490nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制定标准曲线。A.4.2测定称取绿藻多糖样品0.01g（精确至0.0001g用水溶解并定容至100mL容量瓶中，摇匀。吸取样品溶液1.0mL按A4.1步骤操作，测定吸光度。7T/CI308-2024A.4.3结果计算样品中总糖含量按下式（2）计算：X=×100%……………（2）式中：X——样品中的总糖含量，单位为百分率（%）；m1——从标准曲线上查得样品溶液中的总糖含量，单位为微克每毫升(μg/mLV——样品定容的体积，单位为毫升（mL）；m——样品的质量，单位为克（g10-6——换算系数。A.5精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。8T/CI308-2024鼠李糖占总糖比例的测定B.1一般规定B.2原理B.3试剂B.3.1三氟乙酸（C2HF3O2）。B.3.2甲醇（CH3OH）。B.3.3氢氧化钠（NaOH）。B.3.4盐酸（HCl）。B.3.5乳糖（C12H22O11）。B.3.61-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O）。B.3.7二氯甲烷（CH2Cl2）。B.3.8磷酸二氢钾（KH2PO4）。B.3.9乙腈（C2H3N）：色谱纯。B.4酸解处理条件B.4.1酸解称取绿藻多糖样品5.0mg于安瓿瓶中，加入2mol/L三氟乙酸2mL，充氮封管，于95℃下酸解6h。反应结束后，旋蒸挥干试剂，再加入3mL甲醇旋蒸挥干，重复多次以尽量去除三氟乙酸残留，最后将蒸干后的固体用超纯水溶解并调至中性，定容至1mL备用。9T/CI308-2024B.4.2衍生将450μL酸解后样品与50μL10mg/mL乳糖内标混合均匀后，吸取200μL于试管中，加入420μL0.3mol/L氢氧化钠溶液、400μLPMP衍生试剂，80℃水浴60min。反应结束后，加入420μL0.3mol/L盐酸溶液中和。B.4.3萃取向衍生后的溶液中加入1mL二氯甲烷，充分振荡，离心，吸弃下层液体，重复3次以彻底将PMP除净。最后，取上层溶液过膜后作为待测液。使用高效液相色谱仪进行单糖组成测定。B.5色谱条件a)色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；b)流动相：17%乙腈-83%50mmol/L磷酸盐缓冲液（pH6.9）；c)流速：1.0mL/min；d)检测波长：245nm；e)柱温：25℃;f)进样量：10μL。B.6分析步骤B.6.1标准溶液的制备B.6.1.1鼠李糖标准溶液（10mg/mL称取0.01g鼠李糖（精确至0.0001g溶于1mL水中，置于-20℃冰箱中贮存。B.6.1.2鼠李糖标准溶液（1mg/mL将0.1mL鼠李糖标准溶液贮备液（10mg/mL）与0.9mL水混合均匀，置于-20℃冰箱中贮存。B.6.1.3将450μL鼠李糖标准溶液（1mg/mL）与50μL乳糖（10mg/mL）内标混合均匀后，吸取200μL于试管中，加入420μL0.3mol/L氢氧化钠溶液、400μLPMP衍生试剂，80℃水浴60min。反应结束后，加入420μL0.3mol/L盐酸溶液中和。萃取处理按照步骤B.4.3中的方法进行。B.6.2试样的测定分别对标准溶液和待测液（B.4.3）进行测定，记录主峰面积，根据公式计算出试样中鼠李糖占总糖的比例。B.7