3.1重组DNA技术的基本工具课件高二下学期生物人教版选择性必修32

第三章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具（第一课时）目录/CONTENTS01基因工程的诞生和发展02重组DNA技术的基本工具03DNA的粗提取与鉴定04习题检测学习目标：1.简述重组DNA技术所需的三种基本工具及其作用。2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。3.进行DNA的粗提取与鉴定。旧识回顾优良供体母牛受体母牛受体发情同期发情处理超数排卵处理发情配种或人工受精移植胚胎收集胚胎并检查对受体进行妊娠检查具有优良性状的后代优良公牛冲卵正常繁殖或两三个月后进行另一次移植①②③⑤

④新课导入我国是棉花的生产和消费大国，棉花在种植过程中常常会受到棉铃虫的侵袭，使棉花大量减产，严重时甚至绝收。如果能培育出自身就能抵抗虫害的棉花新品种，就能减少农药污染的解决这一问题。棉花本身不具有“杀虫基因”苏云金杆菌有一种“杀虫基因”如何得到抗虫棉新品种？基因工程目录01一、基因工程的诞生和发展一、基因工程的诞生和发展1.基因工程的概念

是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术（转基因技术）。操作对象及环境操作水平操作原理结果基因DNA分子水平赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因重组优点：

①与杂交育种相比：能克服远缘杂交不亲和的障碍；②与诱变育种相比：定向改造生物的遗传特性。一、基因工程的诞生和发展1944年艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可以在同种生物个体间转移。1961年尼伦伯格和马太破译了第一个编码氨基酸的密码子。截至19666年，64个密码子均被破译成功。1970年科学家在细菌中发现了第一个限制性核酸内切酶（简称限制酶）1972年，伯格首先在体外进行了DNA的改造，成功构建了第一个体外重组DNA分子。1982年，第一个基因工程药物-重组人胰岛素被批准上市。基因工程药物成为世界各国研究和投资开发的热点。1953年沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出了遗传物质自我复制的假说。1967年，科学家发现，在细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞间转移。20世纪70年代初，多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。1973年，科学家证明了质粒可以作为基因工程的载体，构建重组DNA，导入受体细胞，使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现了物种间的基因交流。至此，基因工程正式问世。1985年，穆里斯等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。2.基因工程的发展过程一、基因工程的诞生和发展3.基因工程的理论基础1.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？（1）DNA的基本组成单位都是

。（2）双链DNA分子的空间结构都是

。2.为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？（1）

是控制生物性状的独立遗传单位。（2）遗传信息的传递和表达都遵循

。（3）生物界共用一套

。四种脱氧核苷酸规则的双螺旋结构基因中心法则遗传密码1’2’3’4’5’脱氧核苷酸聚合成3’5’一条脱氧核苷酸链3’，5’-磷酸二酯键形成两链之间：A、T间形成2个氢键，C、G间形成3个氢键ACTGDNA双链平面结构----------DNA（基因）

转录翻译mRNA蛋白质ATCG一、基因工程的诞生和发展3.基因工程的理论基础DNA的结构特点：5’3’3’5’②

和

交替连接，排列在外侧，构成

；

排列在内侧。③两条链上的碱基通过

连接成碱基对，且遵循

。①DNA是由两条单链组成的，这两条链按

方式盘旋成双螺旋结构。反向平行脱氧核糖磷酸碱基基本骨架氢键碱基互补配对原则一、基因工程的诞生和发展DNA拼接DNA切割DNADNA导入DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。那么，科学家究竟用到了哪些“分子工具”这些“分子工具”各具有什么特征呢？一、基因工程的诞生和发展重组DNA技术所需的三种工具：“分子手术刀”准确切割DNA分子“分子缝合针”“分子运输车”将DNA片段连接起来将体外重组好的DNA分子导入受体细胞限制性内切核酸酶DNA连接酶基因进入受体细胞的载体【易错警示】工具酶≠工具目录02二、重组DNA技术的基本工具二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶——“分子手术刀”切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶。（1）来源：（2）种类：主要从原核生物中分离纯化出来迄今分离的限制酶有数千种（限制酶不是一种酶，而是一类酶）二、重组DNA技术的基本工具资料卡—限制酶的命名：用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如，一种限制酶是从大肠杆菌(Escherichiacoli)的R型菌株分离来的，就用字母EcoR表示；如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶，则进一步表示成EcoRI。（3）命名：EcoRⅠEscherichiacoli属名(大写)种名(小写)属名的头一个字母种加词的头两个字母大肠杆菌的R型菌株分离来的R型菌株中分离出来的第一种限制酶流感嗜血杆菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:___________________________________。HindⅠ、HindⅡ、HindⅢ练习：粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesens）中分离的第一种限制酶即_______；SmaⅠ二、重组DNA技术的基本工具（4）作用：①识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，②并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。“两个特定”磷酸二酯键切点磷酸二酯键—AGTC——TCAG—5’3’3’5’磷酸二酯键二、重组DNA技术的基本工具识别序列：大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成；也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。特点1：都可以找到一条中（心）轴线；特点2：中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列。正向读与另一条链反向读的碱基顺序完全一致（3）作用：中轴线5'5'3'3'限制酶所识别的序列，呈现碱基互补对称。EcoRⅠ限制酶中轴线5'5'3'3'SmaⅠ限制酶二、重组DNA技术的基本工具（4）切割结果：形成________末端

或_____末端黏性平二、重组DNA技术的基本工具5’3’5’3’例如，EcoRⅠ限制酶的识别序列为从5’→3’方向的识别序列均为GAATTC，切割特定部位为G和A之间的磷酸二酯键中轴线二、重组DNA技术的基本工具5’3’5’3’例如，EcoRⅠ限制酶的识别序列为从5’→3’方向的识别序列均为GAATTC，切割特定部位为G和A之间的磷酸二酯键3’5’5’3’黏性末端黏性末端当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是黏性末端；*形成的黏性末端（从5’往3’读）为___________AATT二、重组DNA技术的基本工具5’3’5’3’例如，SmaⅠ限制酶的识别序列为从5’→3’方向的识别序列均为CCCGGG，切割特定部位为C和G之间的磷酸二酯键中轴线二、重组DNA技术的基本工具5’3’5’3’例如，SmaⅠ限制酶的识别序列为从5’→3’方向的识别序列均为CCCGGG，切割特定部位为C和G之间的磷酸二酯键平末端当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。3’5’5’3’二、重组DNA技术的基本工具（4）切割结果：形成________末端

或_____末端黏性平现学现用：写出下列限制酶切割形成的黏性末端BamHⅠ________EcoRⅠ________HindⅢ________BglⅡ________GATCAATTAGCTGATC*思考：不同种限制酶切出的黏性末端一定不同吗？不同的限制酶也可能切割形成相同的黏性末端。同种限制酶产生的黏性末端相同，二、重组DNA技术的基本工具请判断：以下黏性末端是由

种限制酶作用产生的。①②③3方法：①找到第一个限制酶的识别序列：

；

②找到切割位点是：

之间二、重组DNA技术的基本工具技巧：图片倒转180°，完全相同则为同一种限制酶切割下列黏性末端最可能由同种限制酶切割而成的是()

①

②

③

④

A.①②

B.①③

C.①④

D.②③二、重组DNA技术的基本工具请结合限制酶的作用特点，回答以下问题：（1）限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？不能（2）请结合右图，推断限制酶切一次可断开

个磷酸二酯键，产生

个游离的磷酸基团，产生

个黏性末端，消耗

分子水。

限制酶只能识别并切开双链DNA分子两22两中轴线5'5'3'3'EcoRⅠ限制酶二、重组DNA技术的基本工具【P71旁栏思考题】限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、起防御作用。原核细胞DNA中不存在限制酶的识别序列或能被识别的序列被修饰了。【P74拓展应用1】为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？二、重组DNA技术的基本工具G

AA

TT

CC

TT

AA

GG

AA

TT

CC

TT

AA

GG

C

TT

AA

AA

TT

C

GGC

TT

AA

AA

TT

C

G用同种限制酶切割(EcoRⅠ)把两种来源不同的DNA进行重组，应该怎样处理？思考：二、重组DNA技术的基本工具G

C

TT

AA

AA

TT

C

GGCTTAA

AA

TT

C

G

缺口怎么办？二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”1.作用：将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。

注意：不是连接氢键（氢键的形成不需要酶的催化）。GCTTAAAATTCG2.DNA连接酶的种类：种类E·coli

DNA连接酶T4DNA连接酶来源功能特性相同点大肠杆菌T4噬菌体只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来；既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端；恢复的都是磷酸二酯键不能连接具有平末端的DNA片段。又可以连接双链DNA片段的平末端（但连接平末端的效率相对较低）。二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”（1）E.coliDNA连接酶连接黏性末端的作用两个DNA片段要具有互补（相同的）黏性末端才能连接起来。把两个DNA片段黏性末端间的缝隙“缝合”起来；，DNA连接酶将两个双链DNA片段“缝合”连接起来，形成一个双链DNA分子，恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但效率相对较低。（2）T4DNA连接酶的缝合作用①作用部位②作用底物磷酸二酯键DNA片段★注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的两条单链缺口，但不能连接单链DNA！二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”（3）比较DNA连接酶与DNA聚合酶AATTGAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用C①作用部位②作用底物磷酸二酯键脱氧核苷酸二、重组DNA技术的基本工具旁栏思考（P72）：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质化学本质不同点模板作用对象作用结果用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质

不需要需要DNA的一条链作模板形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键二、重组DNA技术的基本工具拓展：与DNA相关的几种酶的比较名称作用部位作用结果限制酶

DNA连接酶DNA聚合酶DNA(水解)酶DNA解旋酶磷酸二酯键碱基对之间的氢键将DNA切成两个片段磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸将双链DNA分子局部解旋为单链二、重组DNA技术的基本工具(1)通过基因工程产生的变异是不定向的(

)(2)限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核苷酸序列()(3)DNA连接酶能将两碱基间通过氢键连接起来(

)(4)E.coliDNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端(

)(5)限制酶和解旋酶的作用部位相同(

)

×××××二、重组DNA技术的基本工具3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1、作用：作为运输工具，与外源/目的基因的DNA片段结合，将外源基因送入受体细胞中。2、种类：质粒（最常用的载体）动植物病毒噬菌体/细菌病毒如：λ噬菌体的衍生物(一种经过人工改造的λ噬菌体,可用于基因工程的载体。它是一种温和噬菌体，遗传物质是DNA,专门侵染大肠杆菌。)质粒：一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，具有自我复制能力的环状双链DNA分子。二、重组DNA技术的基本工具3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”大肠杆菌及质粒结构模式图真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。①作为运输工具，将外源基因导入受体细胞。②质粒携带外源DNA片段在细胞内大量复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制二、重组DNA技术的基本工具3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”思考：分析归纳载体需要具备的条件：思考1：载体要与外源基因连接，需要具备什么条件？条件①：具有一个或多个限制酶切割位点；思考2：要使携带的外源基因在受体细胞中稳定存在，载体需要具备什么条件？条件②：能在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；问题3：我们用肉眼看不到载体是否进入受体细胞，为了便于筛选重组DNA分子，载体需要具备什么条件？条件③：具有标记基因，便于重组DNA分子的筛选。条件④：载体DNA必须是安全的，不会对受体细胞有害。二、重组DNA技术的基本工具【核心探讨】标记基因的筛选原理载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。导入受体细胞培养加入氨苄青霉素只有含有载体，并且载体上的抗性基因表达的大肠杆菌才能存活并增殖含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒）标记基因通常有:①抗生素的抗性基因，如:抗氨苄青霉素基因(ampr)、抗四环素基因(tetr)②荧光蛋白基因，如:绿色荧光蛋白基因(GFP)、红色荧光蛋白基因(RFP)二、重组DNA技术的基本工具下列操作中选用哪种限制酶切割来构建重组质粒？1.选目的基因两端和运载体都有的酶切位点；2.所选酶切位点不能破坏目的基因以及标记基因、启动子；3.含目的基因的DNA片段和切割后载体确保出现相同的粘性末端原则。规律——选择酶切位点的原则：①用图1中的质粒和图2中的外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是

。②图2不选用EcoRⅠ切割，原因是

。SmaⅠ会破坏质粒中的抗性基因以及破坏目的基因防止目的基因自身环化因此最好使用不同的限制酶切割目的基因和质粒二、重组DNA技术的基本工具(1)作为载体的质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选基因()(2)质粒是环状双链DNA分子，是基因工程常用的载体(

)(3)载体（如质粒）和细胞膜中的载体蛋白的成分相同(

)(4)作为载体必须要有标记基因(

)

×√××目录03三、DNA的粗提取与鉴定三、DNA的粗提取与鉴定1、提取生物大分子的基本思路：实验设计思路：DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。2、提取生物大分子的提取原理与鉴定原理1.提取原理（1）DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。（2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液。2.鉴定原理在一定温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。

00.14NaCI浓度（mol/L）DNA溶解度三、DNA的粗提取与鉴定3、材料用具1.选材：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑；选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。三、DNA的粗提取与鉴定3、材料用具2.试剂：①研磨液：②体积分数为95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺试剂⑤蒸馏水含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA析出DNA溶解DNA鉴定DNA取材、研磨过滤或离心取上清液预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鉴定4、方法步骤二苯胺试剂——要现配现用，水浴加热三、DNA的粗提取与鉴定称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL

研磨液，充分研磨。破碎细胞，使核物质溶解在研磨液中充分研磨：研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而影响提取的DNA含量（2）研磨时间不宜太长：防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量（3）研磨不宜太用力；（4）有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶。

研磨效果好（有利于充分研磨）

1.取材、研磨：（1）研磨的目的：三、DNA的粗提取与鉴定在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。（1）过滤能用滤纸代替吗？不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。（2）上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？可能含有核蛋白、多糖等杂质（3）低温放置几分钟的作用：①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。2.过滤或离心取上清液：三、DNA的粗提取与鉴定3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。（1）搅拌时应轻缓、并沿一个方向：减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子（2）酒精预冷的作用：同“低温放置的作用”三、DNA的粗提取与鉴定4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。加入2mol/L氯化钠溶液不加入丝状物加入4ml二苯胺试剂加入2mol/L氯化钠溶液加入丝状物加入4ml二苯胺试剂实验组对照组水浴加热三、DNA的粗提取与鉴定1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。本实验可以采取分组的方式进行。可以选取不同的实验材料；也可以查阅资料了解其他提取DNA的方法，对同种材料采用不同的方法。最后从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。三、DNA的粗提取与鉴定拓展探究：1.如果选用鸡血细胞进行实验，如何快速破碎细胞？将鸡血细胞置于蒸馏水中，待细胞涨破后，收集滤液。利用蛋白酶分解杂质蛋白，不分解DNA，有利于DNA与蛋白质分开。进一步纯化DNA——用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。2.有时会在DNA滤液中添加嫩肉粉（木瓜蛋白酶），这样有什么好处？3.有时还会反复利用不同浓度的NaCl溶液来溶解、析出DNA，试猜想该操作的目的？以血液（如鸡血细胞）为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。习题检测一、概念检测1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（）A．能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键B．能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键C．能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键D．只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端2．在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是（）A．大肠杆菌的质粒B．切割DNA分子的酶C．DNA片段的黏性末端D．用来识别特定基因的DNA探针CA习题检测关于下图所示黏性末端的叙述，正确的是A.①与③是由相同限制酶切割产生的B.DNA连接酶可催化①与③的连接C.经酶切形成④需要脱去2分子水D.DNA连接酶与DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端B习题检测有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeI进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、XbaI、EcoRV和XhoI进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。（1）哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶SpeI切割A片段产生的DNA片段相连接?为什么?XbaⅠ因为XbaI与SpeI切割产生了相同的黏性末端。习题检测（2）不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义?识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断；这时可以考虑用合适