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文档简介
动物科学实验设计目录TOC\o"1-2"\h\u31442动物科学实验设计 143531.实验设计 168471.1实验材料 1139071.2实验原理 182231.3实验方案设计 1144181.4肝脏标本的采集及大体观察 234341.6脂肪肝指数分析 265891.7图像分析 3255692.总结 316973参考文献: 3摘要:实验一般是开展研究的重要手段,通过合理的实验设计,能够更好地实现理论验证。实验结果也能为理论提供强大的支持,增加理论的说服力。本次为了更好地进行动物科学实验研究,以家兔为研究对象,通过分组法、控制变量法,对家兔脂肪肝研究进行了相应的实验设计。关键词:家兔;脂肪肝;实验1.实验设计1.1实验材料本次实验对象为家兔,通过市场购买20只家兔,雌雄各10只。1.2实验原理通过控制家兔食用饲料的种类,改变饲料当中胆固醇,脂肪酸成分的含量,在相同时间,相同环境下,培养相同周期的时间,观察兔子的基本情况,最后利用显微光景,观察不同环境培养下家兔脂肪肝切片的情况。1.3实验方案设计本次实验分为5组,在相同的环境下,养殖家兔100天,并且在100天时间内给家兔喂食胆固醇,脂肪酸含量不同的饲料。具体实验步骤如下:步骤一:将20只家兔分为五组,每一组4只,分别编号A,B,C,D,E,每组当中两只雄兔,两只雌兔。步骤二:选择相同饲料,添加定量的胆固醇,脂肪酸成分,设计五组,胆固醇和脂肪酸含量从0.1g到0.5g含量递增。步骤三:在相同环境下,对20只家兔进行养殖,观察100天,100天后家兔的基本情况,并且通过切片的方式观察脂肪肝的基本情况。表1家兔脂肪肝的动物实验设计表家兔组别胆固醇含量(g)脂肪酸含量(g)100天后家兔脂肪肝情况A0.10.1B0.20.2C0.30.3D0.40.4E0.50.51.4肝脏标本的采集及大体观察实验结束时,禁食12小时,于处死动物前称量体重,采用氯胺酮全身麻醉处死动物,开腹取出肝脏,称量肝脏湿重,观察肝脏大小、形态、颜色、表面光滑度、叶间裂宽度、边缘锐利度及切面情况。进行左、右叶肝组织冰冻切片SudanIV脂肪染色。同时留取10%福尔马林固定标本肝组织标本,经常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(片厚4~6μm),分别进行HE及Masson’s三色染色。
1.5肝脂肪变程度及肝脏指数分析根据SudanIV染色标本光镜下脂肪变肝细胞面积分为4度:正常肝脏,脂肪变面积<10%;1+度:脂肪变面积10%~33%,为轻微脂肪变性;2+度:轻度脂肪肝、脂肪变面积33%~50%;3+度:中度脂肪肝、脂肪变面积50%~66%;4+度:严重脂肪肝、66%以上肝细胞脂肪变性。1.6脂肪肝指数分析正常肝脏的肝小叶构造完整,肝细胞索排有序,肝细胞中偶有脂滴。实验组形成脂肪变,主要表现为小泡。轻度脂肪肝主要由腺泡III带和IV染色肝细胞内散布着大小比较均匀、直径3~5μm的鲜红脂滴组成;中度脂肪肝脂肪变50%以上,随脂质的积累,脂滴可有融合,胞核偏位或脂滴围绕细胞核形成“梅花样”改变;重度脂肪肝全小叶布满脂滴,肝细胞胀大、窦间隙变窄,细胞核和细胞器被脂滴挤压移位至细胞边缘,H&E染色可呈“泡沫状”,或细胞核被挤压移位呈“印戒样”,可为正常肝细胞大小的4~5倍,细胞内结构不能辨认;轻、中、重度脂肪肝均可发生不同程度的肝小叶内炎症,肝细胞浊肿、气球样变、点或灶状坏死及中性粒细胞或淋巴细胞浸润,中、重度脂肪肝多伴有不同程度纤维化。根据IV染色冰冻切片光镜下脂肪变面积分组结果,进行图像分析,正常肝组织肝细胞内偶见脂肪滴,Aa<10%,轻、中、重度脂肪肝Aa值依次为10%~25%,26%~35%,>35%。1.7图像分析用图像中心真彩色病理图像分析系统对家兔IV染色病理切片。方法:选择左、右肝叶染色较好的肝组织切片,在低倍光镜下取每片随机取5个视场,选择单色分割分析法测量各视场内脂滴在总视场内的比例〔单位测试面积上被测物的面积(positiveareainmeasurementarea,Aa)=阳性目标总面积/统计场总面积×100%〕,取10个视野Aa的均值作为观测值。
1.8数值的统计与分析所测得数值全部数据输入计算机,采用SAS8.2版,单因素方差分析进行统计处理,两组均数差异的比较采用Fisher’sLSD法,P<0.05确定有统计意义。2.总结本次动物科学实验设计,主要模拟家兔脂肪肝检测。通过分组实验的形式,将20只家兔分为A、B、C、D、E等5个组别,同时通过控制唯一变量,观察不同地组别的动物相关指标有何变化,进而根本变化数据得出相应的结论。为保证科学的严谨性,分别针对影响家兔脂肪的几大因素进行了详细地测量,并制定了测量方法。相对而言,本次实验设计较为科学,能够准确地测量出家兔脂肪的变化情况。参考文献:[1]杜坤,毛初阳,任安勇,等.家兔前
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