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文档简介
病毒的鸡胚培养
(一)实验目的(二)实验原理(三)实验器材(四)实验方法(五)实验作业2021/3/29星期一1(一)实验目的1.了解鸡胚培养有哪几种常用的接种方法。2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒的操作技术。2021/3/29星期一2(二)实验原理实验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培养两种方法,而鸡胚培养更为常见。一般而言,禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒,其他动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。2021/3/29星期一3鸡胚接种技术是养禽业中一种相对新的疫苗接种方法。这种方法就是对孵化后期的鸡胚接种某些活的病毒疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利的影响,通过这种方式接种疫苗后孵出的雏鸡具有免疫保护力。
2021/3/29星期一4(三)实验器材1.鸡胚:要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。从实践看,法氏囊炎病毒对抗体相当敏感,所以要用无母源抗体的鸡胚;而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡胚。孵化前的鸡胚应注意消毒,置37-38℃、相对湿度45-60%的孵卵器中孵育,每日翻蛋数次,孵蛋第4天开始照蛋,弃去无精蛋和死胚。多采用9-11日龄的活胚接种。2021/3/29星期一5(四)实验方法1.接种前的准备:a.鸡胚的准备:选择9-11日龄的鸡胚,在照蛋时以记号笔勾出气室,于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中,在血管之间的间隙划上记号,作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒,再用75%酒精棉球擦一遍,在接种定位处打孔,气室向上竖放于蛋托上。2021/3/29星期一6鸡胚的模式结构1.卵壳2.绒毛尿囊膜3.尿囊腔4.羊水腔5.卵黄囊6.鸡胚胎7.卵白2021/3/29星期一7b.病毒材料的准备:要分离培养的病毒材料应是无菌的,因此在处理材料的过程中,应严格按照无菌操作进行,将新城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml,为达到无菌的目的,可在每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各100-5000IU,置室温中1h处理。2021/3/29星期一8法氏囊病毒的分离取疑似感染病毒的法氏囊,称重,按1:5(w/v)加入生理盐水,研磨,-20℃,反复冻融2次;每次冷冻时间以研磨物结冰为准;将冻融物转入离心管中,3000转/分,离心5分钟,将上清取出,使用无菌滤器过滤2021/3/29星期一92.接种鸡胚接种的方法有几种:绒毛尿囊腔内接种★★绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种卵黄囊内接种2021/3/29星期一10取10-12日龄的鸡胚,照蛋选择血管较少的部位做一记号,用磨蛋器磨一于纵轴平行的裂痕,小心挑开蛋壳,将白色的壳膜用针尖小心挑破,不要伤及血管丰富而透明的绒毛尿囊膜,在气室顶端钻一小孔,用滴管贴近小孔,轻轻一吸,绒毛尿囊膜便下陷成一小凹。绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜2021/3/29星期一11
取10-12日龄的鸡胚,消毒气室顶上的蛋壳,并将气室顶端的蛋壳锉一三角形的裂痕,用灭菌镊子揭去裂痕部位的蛋壳和壳膜,用灭菌平头镊子刺破尿囊膜,并轻轻夹去羊膜,用小号针头刺进羊膜腔内,注入0.05-0.1ml的病毒接种液,以氧化锌胶布封口,滴上溶化的固体石蜡。放回孵化器,使蛋直立孵化。羊膜腔接种羊膜腔接种1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜4.羊膜2021/3/29星期一12
选择6-8日龄的鸡胚,照蛋检查,划出气室和胎位,并以气室向上竖立在蛋托上,气室端的蛋壳经消毒后以打孔器钻一小孔,将注射针头刺过小孔,沿着卵的纵轴刺入约3cm,然后注入0.2ml的病毒接种液,用氧化锌胶布及石蜡封口后放回孵化器中培养。卵黄囊内接种卵黄囊接种2021/3/29星期一13鸡胚的各种接种途径1.绒毛尿囊膜接种2.尿囊腔接种3.羊水腔接种4.卵黄囊接种2021/3/29星期一14绒毛尿囊腔内接种★★绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种卵黄囊内接种3.收毒:病毒的收毒根据接种的途径而定。尿囊液绒毛尿囊膜羊水卵黄液和卵黄膜2021/3/29星期一154.废料处理操作完毕,将所有的用具煮沸消毒,擦净后再以消毒水浸洗,卵壳、壳膜和胚胎等残物煮沸消毒后
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