肠道病毒71型基因组分析和sars冠状病毒结构蛋白的鉴定与分析_第1页
肠道病毒71型基因组分析和sars冠状病毒结构蛋白的鉴定与分析_第2页
肠道病毒71型基因组分析和sars冠状病毒结构蛋白的鉴定与分析_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1/1肠道病毒71型基因组分析和sars冠状病毒结构蛋白的鉴定与分析中文摘要本文对肠道病毒71型(SHZH03毒株)进行了全基因组序列测定，利用巴斯德毕赤酵母系统表达了肠道病毒71型外壳蛋白vP2，对SAILS冠状病毒的核蛋白(N)和突起子糖蛋白(s)进行了鉴定与分析，研究结果如下：

1．肠道病毒71型(SHZH03毒株)全基因组序列测定对肠道病毒71型(eaterovirus71，EV71)国(深圳)分离株SHZH03基因组建立了覆盖全基因组的8个首尾重叠的克隆，并在此基础上对全基因组昧包括多聚腺苷酸尾)的7406个碱基进行了核苷酸序列的测定和分析。

结果表明，SHZH03株基因组具有典型的肠道病毒71型的基因组结构，在编码区没有核苷酸的缺失和插入；在5’UTR和3’UTR区，SHZH03在核苷酸序列和长度上和其它EV71有差异，存在缺失和插入。

核苷酸同源性比较结果表明，在P1区，SHZH03株与台湾流行株(TW2086、TW2272)的同源性较高，为87．9～92．5％；与新加坡流行株SIN5666、SIN5865以及标准株MS和BtCr的同源性则为80．4～82．3％，而与CoxsaldevirusAl6的同源性最低，为63+6％。

氨基酸同源性比较结果表明，在P1区SHZH03株与CoxsakievirusA16的同源性最低(79．8％)，但在p2和P3区，SHZH03株与CoxsakievirusAl6的同源性最高(98．3％和96．8％)。

P1区的遗传进化分析表明，SHZH03株和台湾98年流行的EV71毒株的亲缘关系较近，而与标准株BrCr和MS的亲缘关系较远。

外壳蛋白基因vPl的遗传进化分析表明，SHZH03和SHZH98以及台湾1998年Ev71流行时的8个毒株属于同一组(dusted。

这些结果提示了我国深圳地区流行的肠道病毒71型有可能来源于台湾1998年的Ev71大规模流行时的毒株，对于我国EV71的基因分型、分子流行病学研究、EV71流行规律和疾病的治疗与预防都有借鉴意义。

2．肠道病毒7l型外壳蛋白VP2在巴斯德毕赤酵母中的表达从细胞培养物中提取EV71病毒基因组RNA，再利用RTPCR技术，扩增出EV71外壳蛋白基因VP2，连接于T载体，经测序证实目的基因VP2的序列正确：

构建酵母分泌型表达质粒peIC9KfVP2，经序列测定证实afactor信号肽和VP2的序列和阅读框正确后，经SacI酶切使之线性化，用电转化法将目的基因转化并整合到宿主菌GSl15基因组中；经G418加压筛选多拷贝整合菌株、转化子表型筛选和PCR分析鉴定后以及甲醇诱导，在Pichiapastoris酵母中实现了VP2的高效分泌性表达。

经饱和硫酸胺分级沉淀法初步纯化后，重组蛋白VP2的纯度可达90％以上。

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 作业报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论