Q-370522SXH 032-2016混合型饲料添加剂 微生物和蛋白酶被更新

1/1Q_370522SXH032-2016混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶被更新Q/370522SXH山东信合生物制药有限公司企业标准Q/370522SXH0322016混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶2016-08-01发布2016-09-01实施山东信合生物制药有限公司发布Q/370522SXH0322016I前言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。

本标准由山东信合生物制药有限公司提出并起草。

本标准主要起草人：

赵庆新、王珊珊。

Q/370522SXH03220161混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶1范围本标准规定了混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶的术语和定义、产品分类和代号、要求、抽样、试验方法、检验规则、标签、包装、运输、贮存和保质期。

本标准适用于以本公司生产或购进的饲料添加剂枯草芽孢杆菌、饲料添加剂地衣芽孢杆菌、饲料添加剂粪肠球菌、饲料添加剂酿酒酵母和饲料添加剂蛋白酶加饲料原料黄芪、饲料原料蒙脱石或饲料原料石粉或饲料原料膨润土或饲料原料淀粉按一定比例混合制成的混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶产品。

2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.5食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB10648饲料标签GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13081饲料中汞的测定GB/T13082饲料中镉的测定方法GB/T13083饲料中氟的测定离子选择性电极法GB/T13091饲料中沙门氏菌的检测方法GB/T13092饲料中霉菌总数的测定GB/T14699.1饲料采样GB/T17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB/T28715饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力的测定分光光度法JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则《中华人民共和国兽药典》2005年国家质量监督检验检疫总局第75号令《定量包装商品计量监督管理办法》3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

3.1酸性、中性蛋白酶活力单位Q/370522SXH03220162在一定温度（40℃0.2℃）和相应的PH条件下（酸性蛋白酶PH3.0，中性蛋白酶PH7.2），在1min内水解酪蛋白产生相当于1g酚基氨基酸（由酪氨酸等同物表示）的酶量，为1个酶活单位，以U表示。

3.2杂菌样品稀释液在麦康凯培养基上培养得到的菌视为杂菌。

4产品分类和代号产品分类和代号见表1。

表1产品分类和代号通用名称商品名称产品代号适用动物混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶健源态HT215仔猪混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶佳肥HT216养殖动物5要求5.1感官指标灰白至黄色粉末，无变质、结块及异味、异嗅。

5.2水分不高于10%5.3粉碎粒度全部通过0.90mm分析筛，0.60mm分析筛筛上物不大于10%。

5.4卫生指标卫生指标见表2。

表2混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶卫生指标项目指标黄曲霉毒素B1,g/kg10.0砷（以总砷计），mg/kg2.0铅（以Pb计），mg/kg5.0氟（以F计），mg/kg1000汞（以Hg计）,mg/kg0.1镉（以Cd计），mg/kg0.5杂菌率，％0.5大肠菌群，个/kg1.0105霉菌总数，个/kg＜2.0107沙门氏菌（CFU/25克）0Q/370522SXH03220163表2续混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶卫生指标项目指标致病菌（肠道致病菌及致病性球菌）不得检出5.5技术指标技术指标见表3。

表3混合型饲料添加剂微生物和蛋白酶技术指标产品代号枯草芽孢杆菌,CFU/g地衣芽孢杆菌,CFU/g粪肠球菌,CFU/g酿酒酵母,CFU/g中性蛋白酶活力，U/gHT2152.01071.01075.01071.01071.0103HT2162.01075.01075.01075.01071.01035.6净含量符合标签标注，偏差符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。

6抽样6.1组批原料不变，同一配方、同一工艺、同一生产日期生产的同种产品为一个批次。

6.2采样按GB/T14699.1的规定进行样品采集。

采样样品具有代表性，避免采样时交叉污染。

采样工具经无菌处理，如已灭菌牛皮纸袋或广口瓶、金属勺和刀。

7试验方法7.1感官指标将样品放置在白瓷盘内，在非直射日光、光线充足、无异味的环境中，用眼观的方法观察其色泽、是否有霉变、结块。

用鼻嗅的方法检查其气味。

7.2水分按GB/T6435的规定执行。

7.3粉碎粒度按GB/T5917.1的规定执行。

7.4砷方法一：

按GB/T13079的规定执行（仲裁法）。

方法二：

按《中华人民共和国兽药典》的规定执行。

Q/370522SXH032201647.5铅方法一：

按GB/T13080的规定执行（仲裁法）。

方法二：

按《中华人民共和国兽药典》的规定执行。

7.6汞按GB/T13081的规定执行。

7.7镉按GB/T13082的规定执行。

7.8氟按GB/T13083的规定执行。

7.9黄曲霉毒素B1按GB/T17480的规定执行。

7.10大肠杆菌按GB4789.3的规定执行。

7.11霉菌总数按GB/T13092的规定执行。

7.12沙门氏菌按GB/T13091的规定执行。

7.13志贺氏菌按GB4789.5的规定执行。

7.14葡萄球菌按GB4789.10的规定执行。

7.15枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母按附录A的规定执行。

7.16杂菌率按附录A的规定执行。

7.17蛋白酶活力按GB/T28715的规定执行。

7.18净含量按JJF1070的规定执行。

Q/370522SXH032201658检验规则8.1检验分类检验分为出厂检验和型式检验。

8.2出厂检验8.2.1出厂检验项目为感官指标、水分、粒度、枯草芽孢杆菌活菌数、地衣芽孢杆菌活菌数、粪肠球菌活菌数、酿酒酵母活菌数、蛋白酶活力。

8.2.2检验由本企业化验室进行。

8.2.3检验合格的，签发产品质量检验合格证。

8.3型式检验8.3.1型式检验项目为本标准规定的全部项目。

8.3.2型式检验每年至少进行一次。

有下列情况之一必须进行型式检验：

a)主要原料变化及配方有较大改变，可能影响产品性能时；b)工艺变化、设备改造后；c)停产6个月以上，重新恢复生产时；d)行业主管部门提出进行型式检验要求时；e)主成分指标与上次型式检验有较大差异时。

8.3.3型式检验由本企业化验室检验或委托检验。

8.4判定规则8.4.1按照本标准的规定执行。

有一项指标不符合本规则要求，再从双倍量的包装中抽取样品进行复检，复检结果仍有一项指标不合格，则判该批产品为不合格品。

卫生指标中的微生物指标不得复检，直接判定该批产品为不合格产品。

各项技术指标中的极限数值采用修约值比较法。

8.4.2若供需双方对产品质量发生争议时，可由双方协商，或选定法定机构按照本标准进行判定。

9标签符合GB10648的要求。

10包装、运输、贮存和保质期10.1包装包装采用无毒三复合高密度编织袋包装，包装必须符合保质、保量、运输安全和分类、分等储存的要求，严防污染。

10.2运输运输过程防雨、防潮、防止污染，保持包装的完整性。

10.3贮存存放在通风、阴凉、干燥、无污染的地方，避免污染。

Q/370522SXH0322016610.4保质期在符合运输、贮存条件的情况下，自生产之日起，原包装产品12个月。

Q/370522SXH03220167AA附录A（规范性附录）枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母的计数和杂菌率的测定A.1原理枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母在指定培养基平板上长出的菌落个数即为样品中的菌落数。

根据菌落形态可以分辨出是否为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母。

A.2试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级水或相当纯度的水。

按本标准规定的方法配制培养基或购买商品化的产品。

A.2.1枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌培养基A.2.1.1成分酵母膏5.0g；蛋白胨10.0g；NaCl10.0g；葡萄糖5.0g；琼脂粉18g；蒸馏水1000mL。

A.2.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH7.0～7.2，分装试管或锥形瓶，121℃灭菌15min。

A.2.2粪肠球菌培养基A.2.2.1成分蛋白胨10g；牛肉膏5g；酵母提取物4g；K2HPO42g；柠檬酸三铵2g；乙酸钠5g；葡萄糖20g；Tween801mL；MgSO47H2O0.2g；MnSO44H2O0.05g；琼脂20g；蒸馏水1000mL。

A.2.2.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH6.2-6.6，分装试管或锥形瓶，121℃灭菌15min。

A.2.3酿酒酵母菌培养基A.2.3.1成分马铃薯200克；葡萄糖20克；琼脂18克；蒸馏水1000mL。

A.2.3.2制法将马铃薯洗净去皮，称取200g切成小块，煮沸20-30分钟，用四层纱布过滤，再加18g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，PH自然，分装试管或锥形瓶，121℃灭菌15min。

倒平板时添加氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L备用。

Q/370522SXH03220168A.2.4麦康凯培养基A.2.4.1成分蛋白胨17g；月示胨3g；猪（牛、羊）胆盐5g；氯化钠5g；琼脂17g；蒸馏水1000mL；乳糖10g；0.01%结晶紫水溶液10mL；0.5%中性红水溶液5mL。

A.2.4.2制法将蛋白胨、月示胨、胆盐和氯化钠溶于400mL蒸馏水内，调节PH值至7.2；将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解；合并两液，分装烧瓶内，121℃灭菌15min备用；临用时加热溶化上述琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时加入结晶紫和中性红水溶液摇匀后倾注平板。

注：

结晶紫和中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

A.2.5稀释液A.2.5.1成分氯化钠8.5g；蒸馏水1000mL。

A.2.5.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

A.3仪器与设备A.3.1天平：

感量：

0.01g。

A.3.2震荡器。

A.3.3高压灭菌器：

121℃。

A.3.4生化培养箱：

精度1℃。

A.3.5冰箱：

2℃～5℃。

A.3.6无菌吸管：

1mL、10mL或微量移液器及吸头。

A.3.7无菌锥形瓶：

容量250mL、500mL。

A.3.8无菌培养皿：

直径90mm。

A.3.9pH计或pH比色管或精密pH试纸。

A.4样品制备按GB/T14699.1的规定，采取有代表性的样品不少于500g，用于制备试样，四分法将原始样品缩至200g,制作两份样品，装入灭菌样品袋，贴上标签，一份留样，一份待检，至于干燥处。

A.5测定步骤A.5.1样品稀释从样品中称取10g（精确到0.01g），加入带玻璃珠的盛有90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，静置20min后在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，即成母液的菌悬液。

用无菌吸管吸取1mL上述母液Q/370522SXH03220169的菌悬液加入盛有9mL的生理盐水的试管中，均匀成1:10稀释的菌悬液，这样依次稀释，分别得到1:102、1:103、1:108、1:109等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。

A.5.2涂布用无菌吸管选择2个适宜的连续稀释度的菌悬液0.1mL，分别加至直径为9cm的相应培养基平皿的培养基表面，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂于培养基表面。

每个样品取两个稀释梯度，每一稀释度重复3次，同时用无菌水作为空白对照。

A.5.3培养涂布好的平皿盖好，置室温中放置15min是菌悬液完全被琼脂吸收，翻转上述平皿置培养箱内培养。

枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌于37℃1℃培养16～24h，可计数枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌；粪肠球菌于37℃1℃培养24～48h，可计数粪肠球菌；酿酒酵母于28℃1℃培养，培养36～48h，可计数酿酒酵母。

A.5.4菌落特征枯草芽孢杆菌在平板上，菌落呈圆形、较厚；常呈乳白或污