2.2.2动物细胞工程（动物细胞融合单抗）高二下学期生物人教版选择性必修3

第二章细胞工程动物细胞工程（动物细胞融合+单抗）P48原理：细胞膜的流动性优点：克服远缘杂交不亲和的障碍形成单核细胞≠多核P48P49原理特点第一次筛选方法第二次筛选方法P49传统抗体：P50：①②③应用①应用②应用③思1.下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解,请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来:

议2.抗PD–L1单克隆抗体能与癌细胞膜表面的PD–L1特异性结合，因而具有治疗癌症的作用。下图是制备抗PD–L1单克隆抗体示意图，分析：（1）①多孔玻璃板中的细胞是否是B细胞和鼠瘤细胞的融合细胞？（2）②过程用到的方法？目的是？图中细胞集落a~d是否都是既能大量繁殖，又能产生抗体？能在该培养基上大量增殖的细胞产生的抗体（一定/不一定）能抗PD–L1。（3）图中③获得的杂交瘤细胞还需要经过④克隆化培养和抗体检测，原因是？

（4）图中细胞集落__________可用于扩大化培养生产抗PD–L1单克隆抗体。3.【选择培养基的筛选机理】细胞合成DNA有D和S两条途径,D途径能被氨基嘌呤阻断,小鼠B细胞中有这两种DNA合成途径,但不分裂增殖。骨髓瘤细胞尽管没有S途径但能不断分裂增殖【说明骨髓瘤细胞进行增殖存在______途径】。将这两种细胞混合加PEG促进细胞融合.筛选时，向培养液中添加____________________，则被淘汰的细胞有未融合的亲本细胞、融合的具有同种核的细胞，原因是B细胞___________，骨髓瘤细胞________________。杂交瘤细胞由于可以进行_______________途径。自由展

生产单克隆抗体时，Why不直接培养B细胞？2.抗PD–L1单克隆抗体能与癌细胞膜表面的PD–L1特异性结合，因而具有治疗癌症的作用。下图是制备抗PD–L1单克隆抗体的示意图，分析：展1（1）①多孔玻璃板中的细胞是否是B细胞和鼠瘤细胞的融合细胞？

不一定B骨B-B骨-骨B-骨共5种（2）②过程用到的方法？选择培养基

目的是？筛选出杂交瘤细胞图中细胞集落a~d是否都是既能大量繁殖，又能产生抗体？是

能在该培养基上大量增殖的细胞产生的抗体（不一定）能抗PD–L1。（3）图中③获得的杂交瘤细胞还需要经过④克隆化培养和抗体检测，原因是？

和骨髓瘤细胞融合的B细胞有多种，获得的杂交瘤不一定能产生所需抗体。

（4）图中细胞集落_a可用于扩大化培养生产抗PD–L1单克隆抗体。3.【选择培养基的筛选机理】细胞合成DNA有D和S两条途径,其D途径能被氨基嘌呤阻断,小鼠的B细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。骨髓瘤细胞中尽管没有S途径但能不断分裂增殖【说明骨髓瘤细胞进行增殖存在

D途径】。

将这两种细胞混合加PEG促进细胞融合.进行筛选时，向混合培养液中添加氨基嘌呤，则被淘汰的细胞有未融合的亲本细胞、融合的具有同种核的细胞，原因是B细胞不能增殖，骨髓瘤细胞D途径被氨基嘌呤阻断。杂交瘤细胞由于可以进行S途径。展2一、单克隆抗体制备：技术：动物细胞融合、动物细胞培养——原理：2个评12.（1）以HPV衣壳蛋白为抗原制备单克隆抗体，应向小鼠体内注射HPV衣壳蛋白

①注射抗原的目的：获得产生特定抗体的B细胞

②反复注射：获得大量B细胞。

若只考虑两两融合,融合的细胞类型有(a/aa/ab/bb/b).体系中出现多种细胞原因是:①融合是随机的②融合率达不到100%.

评2【常考点2】抗体检测：取上清液检测。技术：抗原-抗体杂交

原理：抗原、抗体特异性结合【常考点3】（1）杂交瘤细胞特点：既能无限增殖，又能产生抗体。（2）单克隆抗体优点：①能准确识别抗原的细微差异②与特定抗原特异性结合

③可以大量制备（3）传统抗体缺点：①产量低

②纯度低

③特异性差【考点4】单克隆抗体用途:①作为诊断试剂（最广泛的用途）②治疗疾病

③运载药物.【常考点1】克隆化培养：（5）②目的是获得由单个杂交瘤细胞增殖形成的细胞群。常用稀释法，即稀释到3～l0个细胞/mL,每孔加入细胞悬液0.1mL？目的：使每个孔内不多于一个细胞,达到单克隆培养的目的。

评31.抗体作用特异性识别癌细胞。

药物作用促使靶细胞凋亡【药物对靶细胞没有选择性】2.ADC治疗疾病，副作用更小原因单克隆抗体把药定向带到癌细胞所在位置,在原位杀死癌细胞。利用尿液诊断早孕的机理是孕妇尿液中的人绒毛膜促性腺激素（HCG）与试纸上的抗HCG的单克隆抗体特异性结合胞吞溶酶体裂解细胞凋亡1.杂交瘤细胞特点是既能无限增殖又能产生特异性抗体。2.单克隆抗体优点①能准确识别抗原的细微差异

②与特定抗原特异性结合

③可以大量制备3.在选择性培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。4.单克隆抗体第一次筛选的方法是选择性培养基。目的：筛选出杂交瘤细胞。5.第二次筛选的方法：克隆化培养、抗体检测。目的;筛选出产生所需抗体的杂交瘤细胞6.单克隆抗体应用的技术：动物细胞培养、动物细胞融合

原理：细胞膜的流动性、细胞增殖7.若要使能产生特定抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有将获得的细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。8.单克隆抗体扩大培养在体外从培养液中提取和在体内从腹水中提取。9.单克隆抗体的用途:①作为诊断试剂

②治疗疾病

③运载药物.10.克隆化培养的目的是获得由单个杂交瘤细胞增殖形成的细胞群。11.制备H7N9病毒单克隆抗体的过程,B细胞取自感染过H7N9动物的脾脏。12.动物细胞融合原理：细胞膜的流动性

优点:克服远缘杂交不亲和的障碍。13.与植物相比特有的诱导融合的生物诱导剂是灭活的病毒。

化学试剂是：