




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
实验二问题分析气孔密度(单位):固定法比印迹法多气孔大小(开度):Na+可以代替K+,但效果较差取样时间、位置及照光时间实验三硝酸盐和光诱导对硝酸还原酶活性的影响
硝酸盐还原硝酸盐的还原由硝酸还原酶(nitratereductase)催化。硝酸还原酶存在于细胞液中,为一种诱导酶。诱导酶(inducedenzyme)
植物体本来不含有,但在特定的外来物质(如底物)的影响下诱导形成的酶NR基因表达的调控实验证明NO3-能诱导NR的表达NO3-的还原在根或叶中均可进行NO3-供应少时,主要在根中还原NO3-供应量大而根中还原力不足时,NO3-运到叶片进行还原亚硝酸盐还原为氨亚硝酸还原或在根中的前质体,或在叶中的叶绿体中进行。还原所需的电子来自还原态的铁氧还蛋白。NO3-还原为NO2-后,NO2-被迅速运进质体即根中的前质体或叶中的叶绿体,并进一步被亚硝酸还原酶(NiR)还原为NH3或NH4+。叶绿体叶绿体中,还原反应所需的一对电子由还原态铁氧还蛋白提供一实验目的理解硝酸还原酶的特性;
掌握硝酸还原酶活性测定方法。
实验原理NR是诱导酶,在取样前一天用50mMKNO3-
或NaNO3-加到培养苗的水中以诱导硝酸还原酶的产生。NO2-产生
NO3-
+NADH++
H+→NO2-
+NAD++H2O
外界溶液中的NO3-渗入植物组织后,经硝酸还原酶作用,所产生的NO2-可以从组织内渗透到外界溶液中;测定反应溶液中NO2-含量的增加,即表现该酶活性的大小。在一定条件下,NO2-的生成量与硝酸还原酶活性呈正相关。NO2-含量的测定用磺胺比色法。在酸性溶液中磺胺与NO2-形成重氮盐,再与α-萘胺偶联形成红色的偶氮化合物,可用分光光度计在540nm下比色测定。NH2NO2-含量测定NO2-含量测定当磺胺与α-萘胺均过量时,所生成的红色深浅与NO2-含量成直线关系。NO2-含量标准曲线:[NO2-]
(µMol/ml)=0.0026+0.359OD540
硝酸还原酶活性测定NR酶活性(NO2-µMol/h•gfw)=[NO2-]×10ml/1ml÷(鲜重g×0.5h)三材料与方法两种处理的小麦材料[水(W),KNO3(N)]A液磷酸缓冲液:水:DNP溶液:蔗糖溶液=5:5:1:1B液磷酸缓冲液:KNO3:DNP溶液:蔗糖溶液=5:5:1:1磺胺试剂α-萘胺试剂四实验步骤两种材料[水(W),KNO3(N)]各取2份新鲜叶片中段,用蒸馏水洗净、擦干,剪成0.5cm小段,各称取0.3克两份;将两份(W、N)叶段分别置于含有10mlA、B溶液的两只试管中,即WA、WB,NA、NB四管(每个试管塞蓝色纱网);将试管放在真空干燥器中抽气0.5h,放气后摇晃直至叶段沉于溶液中;将试管置于25-30℃温箱中黑暗保温0.5h;取四支试管,标号为WA´、WB´,NA´、NB´,分别吸取1ml对应反应液,各加入2ml磺胺试剂和2mlα-萘胺试剂(注意顺序),混合摇匀,25℃水浴5min,取出室温静置25min。再取两支试管分别取A液或B液1ml代替反应液,各加入2ml磺胺试剂和2mlα-萘胺试剂。设空白对照管在540nm测定吸光值。表硝酸还原酶的活性处理A液B液吸光度吸光度ODB-ODANR活性
H2OKNO3结果记录、计算[NO2-](µmol/ml)=0.0026+0.359OD540酶活性(NO2-
µmol/h•gfw)=[NO2-]×10ml/1ml÷(鲜重g×时间h)六思考题为何提前一天施KNO3,并且取样应在晴天进
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2025年 莎车县第二中等职业技术学校招聘考试笔试试题附答案
- 挤压冰淇淋生产线行业深度研究分析报告(2024-2030版)
- 中国空气干燥机行业发展前景预测及投资战略研究报告
- 2018-2024年中国水产养殖与捕捞市场运营态势分析及投资前景预测报告
- 中国灰浆泵行业市场全景分析及投资前景展望报告
- 2025年中国精密玻璃模压行业市场发展监测及投资战略规划报告
- 地热发电项目节能评估报告(节能专用)
- 2025年中国移动式压力容器行业发展运行现状及投资潜力预测报告
- 心态培训课件下载
- 中国电动扫地机行业运行态势及未来发展趋势预测报告
- 2025年心理健康指导师职业资格考试试题及答案
- 石油行业采购物资质量事故案例规律分析课件
- 七年级下册道德与法治期末复习必刷主观题含答案
- 2024年广东省揭西县教师招聘考试《教育学和心理学基础知识》真题库及答案
- 2025年新高考2卷(新课标Ⅱ卷)英语试卷(含答案解析)
- 北京市顺义区2023-2024学年六年级下学期数学期末试卷(含答案)
- 公司安全廉政管理制度
- JG/T 283-2010膨胀玻化微珠轻质砂浆
- 电力法规考试试题及答案
- 江苏省泰州市泰州中学2025届英语八年级第二学期期末复习检测试题含答案
- 2025昆明医科大学海源学院辅导员考试试题及答案
评论
0/150
提交评论