NQO1基因多态性与食管癌易感性的病例对照研究-0

1/1NQO1基因多态性与食管癌易感性的病例对照研究NQO1基因多态性与食管癌易感性的病例对照研究NQO1基因多态性与食管癌易感性的病例对照研究作者：

周艳丽，陈华芳，史习舜，周紫荆，李国梁，潘培川，陈子龙，吴清波【摘要】［目的］研究NQO1基因多态性与食管癌易感性的关系。

［方法］采用1：

2配对的病例对照研究，运用PCR,RFLP技术检测NQO1基因C609T多态性。

［结果］NQO1609CC、CT和TT各基因型在病例组中的频度分别为％、％和%，在对照组分别为％、％和％，两组间的分布差异有统计学意义。

携带NQO1609TT基因型的个体患食管癌的风险高于崾携带609CC或609CT基因型者。

蛲吃葱蒜与NQO1基因型TT之间存在次崭相乘模型的交互作用(OR=，95％CI=～)；饮烫茶与NQO1TT危险基庖因型之间存在次相乘模型的交互作用(O梆R=，95％CI=～)。

［结论］NQO1609TT基因型是食管癌的危险因素之一；609TT基因型食管癌发生风臆险的作用有明显的放大效应。

【关键词】食管肿瘤病例对照研究NQO1基因э多态性交互作用ACase,cont幻rolStudyonthePolym巽orphismsofNQO1andS┾usceptibilityofEso斛phagealCancerAbs纳tract:［Purpose］Toi＆nvestigatetherelatニionshipbetweengene珏ticpolymorphismofNQO1andsusceptibili味tytoesophagealcanc梆er.［Methods］Thisin晖vestigationwascond贱uctedby1∶2matchedc整ase,controlstudy,a晗ndtheC609TpolymorphismingeneNQO1wasd琥eterminedwithPCR,R黜FLPtechnique.［Resu齐lts］Thefrequencies硫ofNQO1609CC,CTandTTgenotypeinesophag臆ealcancergroupwere意%,%and%respectivel附y,while%,%and%inco瞠ntrolgroup,respect子ively.Thedistribut汞ionwasstatisticall脱ysignificantdiffer菽encebetweenbothgro挹ups.Individualscar呐ryingNQO1609TTgeno╋typehadasignifican洮tincreasedriskfore猓sophagealcancer(ad骄justedOR=,95%CI:～)comparedtothosewith609CCor609CTgenot肋ype.Therewerethein骇teractionofsubmultiplicitymodelbetwe箩enalliumvegetables租consumptionandNQO1欺TTgenotype(OR=,95％驳CI:～),andbetweenover,hotteadrinkinga郢ndNQO1gene(OR=,95％扔CI:～).［Conclusions滗］NQO1609TTgenotypeisoneoftherisksfor鬏esophagealcancer.T部heNQO1609TTgenotyp兕ehassignificantamplificationeffecton孬theriskofesophagea馋lcancer.Keywords:徜esophagealneoplasm疾s;case,controlstud褶y;NQO1genepolymorpюhisms;interaction代嵬谢酶基因多态性是不同个体代谢酶活性差⑽异的主要原因，从而影响个体患癌的易感衢性。

依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ：

醌氧化还原酶(NQO1)又称D,硫辛酰胺脱氢酶墨，催化醌类及其衍生物发生还原反应转化碘为氢醌，为人体内一种重要的Ⅱ相反应酶伴。

而醌是一类在自然界中广泛存在的有毒┝化合物，能诱发哺乳动物细胞癌变和坏死欣。

研究发现NQO1存在多态性，即C6茕09T，这个变异使酶活性显著降低。

我们以福建省食管癌高发区安溪县为研究现阀场，在进行环境因素调查研究的同时，对昝NQO1基因多态性与食管癌的关系进行莠了探讨，并结合安溪高发区的环境危险因颀素对基因与环境的交互作用进行了初步分析。

1材料与方法研究对象病例琥组为XX年11月至XX年8月间，经安焦溪县医院内窥镜及病理诊断确诊为食管癌┞的新发病例，剔除年龄＞75岁及体质虚忸弱者。

对照组按1∶2配对，选择与病例居住同一乡村、无血缘关系、同民族、同性别、年龄相差3岁以内的同期同院的逍非肿瘤患者为对照。

病例和对照均为安溪〔县居民，并为当地常住户口(20年以上睐)。

调查方法及内容采用统一编制的徘调查表，由经过培训考核合格的调查员直鹬接询问每名研究对象后填写。

调查内容主氓要有：

一般情况、日常生活行为习惯、饮崤食习惯、饮食结构、居住史、家庭消费情暂况，消化系统疾病史及食管癌家族史等。

NQO1基因多态性的检测运用聚合酶哐链反应限制性片段长度多态性技术检测鞍研究对象的NQO1C609T基因型。

茫标本收集及DNA提取抽取各研究对阋象外周血5ml，置于一次性生化采血管镁中，离心分层，分装上层血清和下层血凝吊块，置于低温冰箱保存。

采用常规高盐沉淀法提取基因组DNA[1]。

PCR冒扩增[2](1)引物序列为：

Pri逍merF：

5,AAGCCCAGAC斓CAACTTCT,3，Primer伞R：

5,GCGTTTCTTCCATCCTTC,3，由上海博亚生物技术葱有限公司合成。

(2)PCR扩增反应体檐系：

反应总体积为25l，其中含10徙PCRbufferl，mmol/LMgCl2，200mol/LdNИTPs，引物F、R各mol/L，TaqDNA聚合酶，基因组DNA80n贲g~100ng。

(3)PCR循环参数：

95℃预变性5min，然后94℃变轹性30s、56℃复性30s、72℃延哀伸45s，35个循环后，72℃延伸10min。

HinfⅠ酶切反应酶切┯体系为20l，包括：

10buff弑er2l，HinfⅠ内切酶l，超纯水l，PCR扩增产物10l。

酶缵切反应条件为：

37℃水浴6h。

酶切产笙物用2％琼脂糖凝胶、电压90V电泳1h。

NQO1基因型的判断：

酶切片段仅195bp者为纯合野生基因型CC；措195bp、119bp和76bp者为寡杂合基因型CT；119bp和76bp∷者为纯合突变基因型TT。

统计分析方寇法全部数据采用软件建立数据库。

运用2检验比较NQO1基因频率的Har而dy,WEinberg遗传平衡检验，轹NQO1C609T基因在病例组和对照诊组分布的特点和差异。

运用叉生分析的原锊理观察NQO1C609T基因型、环境喳因素、遗传因素之间的交互作用。

参照文晶献[3]的方法评价交互作用：

多因素L铭ogistic回归模型中包括单独遗传因素、单独环境因素和两因素共同组成变炖量的效应，g、e和eg分别为三湖者的回归系数，也即ORg、ORe和O剩Reg的自然对数。

交互作用系数＝焰eg/e，＞1，表示遗传因素对环缟境暴露效应有放大作用；＜1，表示遗曜传因素对环境暴露效应有减弱作用；＝1，则两者没有交互作用。

当OReg＝熄OReORg为交互作用的相乘模型；苒OReg＞OReORg为交互作用的的超相乘模型；OReg＜OReOR趺g为交互作用的次相乘模型；OReg＝触ORe＋ORg-1时，则为相加模型。

ボ2结果病例组和对照组一般特征的偈描述本次研究按1∶2配对，共有96降对完成了问卷调查和实验室检测，其中男锨性58对，女性38对，性别比为∶1。

葛食管癌病例组和对照组在性别、年龄、经毋济状况及文化程度等方面的分布差异无统检计学意义，但职业分布差异有统计学意义，与对照组相比，食管癌患者以农民为主漶，文盲所占比重较高。

NQO1基因型天频率及遗传平衡检验对病例组和对照组NQO1C609T基因型频率进行了H字ardy,WEInberg遗传平衡检鳕验，两组的基因型频率观察值与期望值之菅间差异无统计学意义，表明病例组和对照眉组的NQO1基因型频率均符合Hard肃y,Weinberg遗传平衡定律，样咯本具有群体代表性。

食管癌病例组和对┏照组NQO1基因型分布及等位基因频率奏见表2、3、4。

NQO1609CC、CT和TT各基因型在病例组中的分布分别为％、％和%，在对照组中的分布分别傍为％、％和％，表明NQO1各基因型在剥病例组和对照组的分布差异有统计学意义蒈。

与609CC和609CT基因型相比罂，609TT基因型与食管癌的发生有显始著性关联，在年龄、性别和住址等因素调霁整后OR＝，95％CI=～。

病例组与对照组609T等位基因频率分别为％和埂％，两组间的差异有统计学意义。

NQO1基因多态性与各危险因素的交互作用蕨的分析分别分析NQO1609CC、起CT、TT基因型及危险基因型TT与食善管癌发生相关危险因素的交互作用。

经年龄、性别、居住地、经济状况及文化程度祀等因素调整后，仅发现TT基因型与不吃措葱蒜之间存在交互作用。

未发现NQO1并基因多态性与饮酒、高盐饮食、食用红薯鹏干、食管癌家族史及食用新鲜蔬菜之间存在交互作用。

与食用葱蒜史之间交互作瑞用分析结果显示，在TT基因型存在时，不吃葱蒜者患食管癌的风险增大，OR值化为，而吃葱蒜者OR值降至，TT基因型与不吃葱蒜存在次相乘模型的交互作用。

灼饮乌龙茶与食管癌的关系本次研究发现饮烫茶的人群较饮温茶或凉茶的人群更胛易患食管癌，而且茶叶质量越好患食管癌的风险越低。

交互作用分析中发现喝烫茶嗉与NQO1基因多态性及食管癌家族史之阳间存在显著的交互作用，结果见表6、7蟮。

表6显示，单独暴露于饮烫茶的估计麓相对危险性ORe为，当同时携带NQO槌1TT危险基因型时，其OReg值升至斤，增加了暴露于饮烫茶的危险效应，两者凇的交互作用符合次相乘模型。

而食管癌家族史与饮烫茶之间的交互作用为超相乘效酴应，同时暴露于食管癌家族史和饮烫茶者发生食管癌的风险明显高于单独暴露于食晃管癌家族史者或饮烫茶者。

3讨论NQO1，即NAD(P)H：

醌氧化还原卒酶，是体内一种重要的Ⅱ相反应酶。

NQ鲥O1以NAD(P)H为受体，可将NA注DH或NADPH的电子传递给醌类及其蓖衍生物，发生双电子还原反应，生成低毒席的氢醌类化合物，其催化特性在于无单电魍子还原产物半醌及自由基等氧化产物形成肝，避免了对细胞的损伤，降低具有致癌性砍和致畸性的醌类化合物的危害[4]。

N抓QO1与其他Ⅰ、Ⅱ相代谢酶一起构成了体内对外源致癌物质的代谢网络，在机体孱的解毒代谢中发挥着重要作用。

在正常粳人群中,该酶的活性存在差异。

20世纪卵90年代初期，有研究发现NQO1基因彩cDNA609位点上存在C/T间单核罔苷酸多态性，可能改变了酶的二级结构，使酶的活性降低，增加了氧自由基的生成啻[5，6]。

纯合野生基因型CC具有完全的NQO1酶活性,杂合基因型CT的旁酶活性较纯合野生型降低3倍，纯合突变榈基因型TT的酶活性则完全丧失[7，8泮]。

因此，NQO1缺陷可降低细胞解毒澧致癌物的能力，从而影响细胞代谢途径，臻增加致癌物负荷并能导致某些易感个体恶挚性变。

由于NQO1在醌类化合物的解毒勺过程中起着很重要的作用，所以它的基因嫒多态性日益受到人们的重视。

经研究发现瞽NQO1多态性与大肠癌[9]、肺癌[钼10]、白血病[11，12]等有显著颟相关性。

目前关于NQO1多态性与食杏管癌关系的研究并不多，我们采用匹配的毯病例对照研究，以福建省食管癌高发区之绗一安溪县为现场，分析了NQO1基因多酶态性与当地食管癌易感性的关系，研究发忤现NQO1基因多态性与食管癌的遗传易略感性有关。

因为携带纯合突变基因型TT驺者完全丧失NQO1酶活性，故我们进一睡步分析比较了病例组和对照组TT基因型啾的分布差异，结果表明，携带纯合突变基腾因型TT的个体发生食管癌的危险性比携带野生型基因型CC和杂合突变基因型C菏T的个体高倍，提示具有纯合突变基因型祈TT的个体可能是当地发生食管癌的高危人群。

ZhangJ等[13]研究显示蝶NOQ1C609T基因型分布在高加索彬人和中国人群中具有显著差异，携带TT祛基因型者比携带CC、CT基因型的个体軎发生食管癌的危险性分别增高倍和倍，与镖本次研究结果相似。

交互作用分析结果裥表明：

不吃葱蒜与NQO1TT基因型之间的交互作用符合次相乘模型，这与葱蒜氘其中所含化合物对机体氧化还原代谢酶系苯的诱导作用有关。

本次研究未发现食管癌啁家族史与NQO1基因之间存在交互作用裕，但是在同时暴露于食管癌家族史和TT躜危险基因型发生食管癌的风险会高于单独诋暴露于这两个危险因素者。

而Zhang僻J等研究发现，在中国人群中，暴露于上消化道肿瘤家族史者会增加发生食管癌的风险[13]，提示携带NQO1纯合突た变基因型造成的NQO1酶活性的缺乏可ⅴ能为家族中上消化道肿瘤聚集的遗传机制阜之一。

这些结果均进一步说明了食管癌的鄯发生是环境因素和遗传因素相互作用的结拖果。

目前已有大量的研究资料表明饮茶饺对食管癌具有保护作用，这主要与茶叶中含有的茶多酚、茶色素、L,茶氨酸有关，这些物质具有抗氧化作用，可以清除体妞内的氧自由基，抑制生物大分子DNA、费蛋白质等的氧化损伤[14]。

实验结果铨发现无论是绿茶还是红茶都可在甲基苄基片亚硝胺(NMBzA)和甲基烷基亚硝胺拢(MANA)的动物模型中减少鼠的肿瘤抓发生[15]。

本次研究发现饮用质量好泖的乌龙茶是食管癌的保护因素，而饮烫茶逦是食管癌的危险因素，这可能与安溪县是莹乌龙茶的主要产地，当地居民饮茶现象比苒较普遍，但是不同经济水平的人群饮用茶蝽叶的质量不同，而茶叶质量越好，其含有苫的有效成分较一般茶叶多，而含有较少的肄有害物质，从而降低食管癌的发病风险。

氡饮烫茶在当地是居民饮茶的一个普遍习惯笼，已有实验证实70℃以上烫食对食管黏扒膜上皮细胞的增殖周期会产生严重影响，并且为细胞在有害代谢产物作用下产生癌雾变创造了有利条件[16]。

这也是国内酐外大量流行病学研究结果一致证实了热刺蕨激是食管癌发病因素之一的依据。

因此不皂良的饮茶习惯可以降低饮茶的保护作用，Ⅺ这是致癌或抗癌因素的混杂与交互作用的结果。

饮茶习惯与基因、遗传因素的交铍互作用分析显示：

饮烫茶与NQO1TT危险基因型之间存在次相乘效应的交互作祭用，而食管癌家族史与饮烫茶之间的交互作用为超相乘效应，同时暴露于食管癌家骠族史和饮烫茶者发生食管癌的风险明显高昧于单独暴露于食管癌家族史或饮烫茶者。

综上所述，NQO1基因C609T多态荞性可能是安溪县食管癌高发的危险因素之舶一，TT基因型是食管癌的危险基因型，锹其与多种环境因素之间存在交互作用，从⒕而增强或减弱了它对食管癌的危险效应。

暖在人群防治食管癌过程中，应考虑到易感堋基因与环境因素的交互作用，综合分析多期种代谢酶之间的协同作用，从而有针对性唠地进行行为干预和化学预防，以降低食管れ癌的发病风险。

【参考文献】[1髟]SalazarLA,HirataM犒H,CavalliSA,etproc描edureforDNAisolationfromfreshandcryo勒preservedclottedhu耸manbloodusefulincl婊inicalmoleculartes执ting[J].ClinChem,1纤998,44(8Pt1):1748-1750.[2]林月好,卢锡林,邵☆明,等.NQO1基因多态性与肺癌遗传鹱易感性[J].癌症,2000,19(徇5):450-452.[3]沈靖,碎王润田,徐希平.代谢酶基因多态性与环般境暴露交互作用的分析方法及其应用[J僖].中华流行病学杂志,2001,22(1):61-64.[4]Dink々ova,KostovaAT,Tala旧layevidencethatqui瘰nonereductasetype1劾(DTdiaphorase)prot橛ectscellsagainstth否etoxicityofelectroшphilesandreactivef羌ormsofoxygen[J].FrЁeeRadicBiolMed,200归0,29(3-4):231-240.[5]TraverRD,Horiko挽shiT,DanenbergKD,e九t(P)H:quinoneoxido禾reductasegeneexpressioninhumancolonc瘤arcinomacells:char柬acterizationofamut觌ationwhichmodulate茅sDT,diaphoraseacti笃vityandmitomycinse泐nsitivity[J].Cance唳rRes,1992,52(4):79锡7-802.[6]TraverRD心,SiegelD,BeallHD,e雉tofapolymorphismin惑NAD(P)H:quinoneoxi媛doreductase(DT,dia梆phorase)[J].BrJCanよcer,1997,75(1):69-姻75.[7]SiegelD,Anw绒arA,WinskiSL,etpol畀yubiquitinationand澡proteasomaldegrada佥tionofamutantformo彩fNAD(P)H:quinoneox鳐idoreductase1[J].M招olPharmacol,2001,5沣9(2):263-268.[8]MヤoranJL,SiegelD,Rosиspotentialmechanis醮munderlyingtheincreasedsusceptibilit氯yofindividualswith贿apolymorphisminNAD刚(P)H:quinoneoxidoreductase1(NQO1)tob数enzenetoxicity[J].实ProcNatlAcadSciUSA,1999,96(14):8150-螵8155.[9]vanderLog条tEM,BergevoetSM,Ro忤elofsHM,etofepoxid纨ehydrolase,NAD(P)H:quinoneoxidoreduc汉tase,cytochromeP45及02E1oralcoholdehydＩrogenasegenotypesiмnsusceptibilitytoc虐olorectalcancer[J]绩.MutatRes,XX,593(1骤-2):39-49.[10]LawsonKA,WoodsonK,Vir郁tamoJ,etal.Associa座tionoftheNAD(P)H:q溅uinoneoxidoreducta猊se(NQO1)609C,Tpol格ymorphismwithlungc栲ancerriskamongmale