JJF 2116-2024 特定蛋白分析仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范JJF2116—2024特定蛋白分析仪校准规范CalibrationSpecificationforSpecificProteinAnalyzers2024-06-14发布2024-12-14实施国家市场监督管理总局发布JJF2116—2024特定蛋白分析仪校准规范CalibrationSpecificationforSpecificProteinAnalyzers→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→归口单位:全国生物计量技术委员会主要起草单位:南京市计量监督检测院参加起草单位:中国计量科学研究院上海市计量测试技术研究院本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释JJF2116—2024本规范主要起草人:殷瑶(南京市计量监督检测院)陈鸿飞(南京市计量监督检测院)徐昇(南京市计量监督检测院)参加起草人:米薇(中国计量科学研究院)金有训(中国计量科学研究院)刘刚(上海市计量测试技术研究院)JJF2116—2024Ⅰ引言 1范围 (1)2引用文件 (1)3术语和计量单位 (1)4概述 (1)5计量特性 (2)6校准条件 (2)6.1环境条件 (2)6.2校准用的标准物质及其他设备 (2)7校准项目和校准方法 (3)7.1校准前准备及检查 (3)7.2加液体积示值误差和加液重复性 (3)7.3设定温度偏差和稳定性 (3)7.4特定蛋白测量示值误差 (4)7.5特定蛋白测量重复性 (4)7.6携带污染率 (4)7.7线性相关性 (5)8校准结果表达 (5)8.1校准结果处理 (5)8.2校准结果的测量不确定度 (5)9复校时间间隔 (6)附录A校准记录和校准证书的格式及内容 (7)附录B特定蛋白分析仪示值误差测量结果的不确定度评定示例 (10)附录C国际温标纯水密度表 (12)附录D线性相关性校准溶液的配制方法 (13)参考文献 (14)JJF2116—2024ⅡJJF1071—2010《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001—2011《通用计量术语及定义》、JJF1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑本规范制定工作的基础性系列文件。本规范的制定主要参考了GB/T26124—2011《临床化学体外诊断试剂(盒)》、CLSIEP06-A《定量测量程序的线性评估:统计学方法批准指南》(EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures:AStatisticalApproach;ApprovedGuideline)及现行特定蛋白分析仪相关技术文件。本规范为首次发布。JJF2116—20241特定蛋白分析仪校准规范1范围本规范适用于基于免疫比浊法为测量原理的特定蛋白分析仪的计量性能的校准。2引用文件本规范引用了下列文件:JJF1001—2011通用计量术语及定义JJF1059.1—2012测量不确定度评定与表示JJF1071—2010国家计量校准规范编写规则JJF1265—2022生物计量术语及定义凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3术语和计量单位JJF1001—2011、JJF1265—2022中界定的及以下术语和定义适用于本规范。3.1特定蛋白specificprotein机体内执行某些生理功能或在疾病状态时起到表现病理特征的蛋白质的总称。注:特定蛋白有时也被称为“特种蛋白”。3.2标准物质的互换性commutabilityofareferencematerial对于给定标准物质的规定量,由两个给定测量程序所得测量结果之间关系与另一个指定物质所得测量结果之间关系一致程度表示的标准物质特性。注:1定义中,给定的标准物质通常是校准器,而另一指定物质通常是日常用的样品。2定议中涉及的两个测量程序,依据校准等级关系,通常一个标准物质是校准等级中上一等级的,而另一个是下一等级标准物质(校准器)。3可互换标准物质的稳定性要定期监测。[来源:JJF1001—2011,8.16]4概述特定蛋白分析仪是检测血清、血浆或尿液中特定蛋白含量的蛋白质分析仪器。特定蛋白分析仪测量方法有免疫比浊法、免疫荧光法、金标法等,其中免疫比浊法应用最多。免疫比浊法的原理是利用抗原与抗体在特殊反应体系中反应形成可溶性蛋白复合物。在稀释系统中的促聚剂的作用下从反应液析出,形成微粒,使反应液出现浊度。特定蛋白分析仪通过检测反应液的散射光或透射光强度得到样品中特定蛋白的浓JJF2116—20242度。部分特定蛋白分析仪利用微小的胶乳颗粒联结抗体,再与抗原结合时形成抗原-抗体-胶乳颗粒复合物,增加免疫复合物的直径,称为胶乳增强免疫比浊法。特定蛋白分析仪根据自动化程度的不同分为全自动特定蛋白分析仪和半自动特定蛋白分析仪两种。全自动特定蛋白分析仪主要由控制系统(包括自动进样模块、试剂处理模块、反应模块、清洗模块组成)、检测系统、应用软件系统组成。半自动特定蛋白分析仪主要由检测系统、应用软件系统组成。5计量特性特定蛋白分析仪的计量性能指标见表1。表1特定蛋白分析仪的计量性能指标计量性能计量性能指标加液体积示值误差*±10%加液重复性*≤8%温度偏差*±1.0℃温度稳定性*±1.0℃特定蛋白测量示值误差±20%特定蛋白测量重复性≤15%携带污染率*≤2%线性相关性≥0.99注:以上技术指标不用于合格判别,仅供参考,计量性能指标可参照分析仪制造厂商给出的技术要求。*如分析仪适用,可进行该项目的校准。6校准条件6.1环境条件6.1.1环境温度(10~30)℃,相对湿度不大于80%。6.1.2室内应防潮、避光、防热、无腐蚀性物品,通风良好。6.2校准用的标准物质及其他设备6.2.1温度测量设备:测量范围:(-10.0~50.0)℃,最大允许误差±0.3℃。6.2.2电子天平:分度值为0.01mg,级。6.2.3标准物质特定蛋白分析仪的校准中应根据该分析仪所能检测项目和用户要求,采用C反应蛋白或白蛋白或免疫球蛋白等有证标准物质。标准物质需要有高、低两个浓度,并且有互换性,标准物质相对不确定度小于10%。标准物质使用时应遵守标准物质证书的使用说明。JJF2116—202436.2.4可调移液器:容量范围(10~100)μL。7校准项目和校准方法7.1校准前准备及检查检查待校特定蛋白分析仪配套试剂是否在有效期内,是否批号相同且保存完好。将待校特定蛋白分析仪开机预热,并使用分析仪自带定标品进行定标。7.2加液体积示值误差和加液重复性自动进样的特定蛋白分析仪可以进行此项目的校准。首先将可密封容器(如500μL带盖离心管,可以防止容器内的水分挥发)在电子天平上称量质量;然后将去盖容器放到分析仪加样模块的合适位置,通过分析仪命令控制样品针(或试剂针)往该容器中加入20μL平衡至室温的除气纯水,立即盖上容器在电子天平上称量质量;用温度计测量纯水温度并从附录C中查找到对应的密度,根据公式(1)计算加液体积;重复测量6次,取后3次测量结果根据公式(2)计算加液体积示值误差;根据公式(3)计算加液体积重复性。(1)式中:V—加液体积,μL;m—容器和纯水的总质量,mg;m0—容器质量,mg;ρ—室温下水的密度,g/mL。式中:EV—加液体积示值误差;Vi—后3次加液体积测量值,μL;V0—体积设定值,μL。式中:RV—加液体积重复性;Vi—第i次加液体积测量结果,μL;V—6次加液体积测量结果平均值,μL;7.3设定温度偏差和稳定性n—测量次数,n=7.3设定温度偏差和稳定性JJF2116—20244试剂仓或反应仓对外敞开的特定蛋白分析仪可以进行此项目的校准。将温度计探头固定在试剂仓和反应仓中试剂相应的位置,将分析仪通电,设置为常用的储存和反应温度。待温度稳定后,记录下温度计温度读数并开始计时,每隔2min记录一次读数,共计15次,求出平均值。根据公式(4)计算设定温度偏差。根据公式(5)计算设定温度稳定性。式中:ΔT—式中:ΔT—设定温度偏差,℃;T—15次测量的平均值,℃;Td—分析仪设置温度,℃。式中:ΔTf=T0-T0(5)ΔTf—设定温度稳定性,℃;T0max—15次测量中的最高温度,℃;T0min—15次测量中的最低温度,℃。7.4特定蛋白测量示值误差根据待测特定蛋白分析仪所检测的特定蛋白项目和用户的要求,分别选取高、低两个浓度相应特定蛋白有证标准物质(以下简称标准物质),每个浓度在分析仪上连续测量3次,记录每次测定值,该浓度下示值误差按公式(6)计算。×100%(6)式中:δ—特定蛋白分析仪示值误差;c—测定的特定蛋白含量的平均值,选择的标准物质单位;cs—特定蛋白标准物质标准值,选择的标准物质单位。7.5特定蛋白测量重复性选取低值标准物质在特定蛋白分析仪上连续测量6次,记录每次的测定值ci,并根据公式(7)计算相对标准偏差作为重复性的表征。式中:R—重复性;ci—第i次特定蛋白的测定值,选择的标准物质单位;c—测定的特定蛋白含量的平均值,选择的标准物质单位;7.6携带污染率n—测量次数,n=7.6携带污染率JJF2116—20245对于全自动进样的特定蛋白分析仪可以进行携带污染率项目的校准。选择低值标准物质和高值标准物质(低值标准物质浓度需接近分析仪检测下限,高值标准物质需接近分析仪检测上限),首先连续测定低值标准物质4次,结果记为(L1、L2、L3、L4)后,立即连续测定高值标准物质4次(H1、H2、H3、H4)再连续测定低值标准物质1次,结果记为L5。根据公式(8)计算分析仪从高浓度到低浓度的携带污染率(CHL)。式中:CHL—从高浓度到低浓度的携带污染率;Li—低值标准物质第i(i为2~4)次的测量值,选择的标准物质单位;Hi—高值标准物质第i(i为2~4)次的测量值,选择的标准物质单位。7.7线性相关性对至少5个浓度的特定蛋白标准物质(或配制的校准溶液)进行测量,重复测量3次,取其平均值。线性相关性校准溶液的配置方法请见附录D。将测量结果的平均值与标准物质的标准值(或校准溶液的配制值)进行线性回归,用软件进行线性拟合或按公式(9)计算线性相关系数r作为线性相关性的表征。式中:r—线性相关系数;xi—各个浓度水平标准物质的标准值,选择的标准物质单位;x—各个浓度水平标准物质的平均值,选择的标准物质单位;yi—各个浓度水平标准物质的测量值,选择的标准物质单位;y—各个浓度水平标准物质的测量值平均值,选择的标准物质单位;n—被分析项目浓度水平的个数,n=5。8校准结果表达8.1校准结果处理经校准后的特定蛋白分析仪应核发校准证书,校准证书应符合JJF1071—2010中5.12的要求,并给出各校准项目名称和测量结果以及扩展不确定度。校准原始记录格式(推荐性表格)及校准证书内页格式(推荐性表格)见附录A。8.2校准结果的测量不确定度特定蛋白分析仪校准结果的不确定度按JJF1059.1—2012的要求评定,特定蛋白示值误差的不确定度及评定示例见附录B。JJF2116—202469复校时间间隔建议特定蛋白分析仪复校准间隔一般不超过1年。由于复校时间间隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等诸因素所决定的,因此送校单位可根据实际使用情况自主决定复校时间间隔。如果在使用过程中对仪器测量结果产生怀疑或更换主要部件应及时校准。JJF2116—20247附录A校准记录和校准证书的格式及内容图A.1为校准记录的内页格式及内容。(推荐性表格)共2页,第1页仪器名称型号制造厂商出厂编号委托单位名称联系人地址电话温度湿度大气压试剂和校准品批号记录编号证书编号校准员核验员本次使用的主要计量标准器具规格型号不确定度/准确度等级/最大允许误差器具编号有效性确认一、加液体积示值误差和加液重复性实测温度:纯水密度:项目123456空管质量加样后重量计算体积加样示值误差加样重复性二、设定温度偏差和稳定性试剂仓:温度测量次数123456789101112131415设定值平均值温度偏差稳定性图A.1校准记录的内页格式及内容JJF2116—20248反应仓:温度测量次数123456789101112131415设定值平均值温度偏差稳定性三、示值误差测量标准物质名称及编号:标准物质标准值测定值平均值相对示值误差高值低值四、测量重复性标准物质测定值低值平均值相对标准偏差/%五、携带污染率标准物质12345携带污染率低值高值六、线性相关性标准物质标准值123平均值12345线性相关系数共2页,第2页图A.1(续)JJF2116—20249图A.2为校准证书格式及内容。共页,第页序号校准项目校准结果不确定度1加样示值误差—2加样重复性—3设定温度偏差4设定温度稳定性—5相对示值误差6测量重复性—7携带污染率—8线性相关性—校准员:核验员:图A.2校准证书的格式及内容JJF2116—202410附录B特定蛋白分析仪示值误差测量结果的不确定度评定示例B.1测量方法采用特定蛋白有证标准物质(此实验中使用C反应蛋白标准物质),并与标准物质标准值进行比较。B.2测量模型示值误差可由公式(B.1)给出:×100%(B.1)式中:δ—特定蛋白分析仪示值误差;c—测定的特定蛋白含量的平均值,mg/L;cs—特定蛋白标准物质标准值,mg/L。B.3不确定度来源不确定度来源包括:(1)特定蛋白分析仪测量重复性引入的不确定度。(2)C反应蛋白标准物质引入的不确定度。B.4不确定度分量的估算B.4.1特定蛋白分析仪测量重复性引入的不确定度分量uc选定一台特定蛋白分析仪,对C反应蛋白标准物质连续测量10次,得到一组测量值:13.4mg/L,12.5mg/L,13.0mg/L,12.8mg/L,13.4mg/L,12.9mg/L,12.8mg/L,13.2mg/L,13.1mg/L,12.6mg/L。则单次测量结果的实验标准差s(ci):实际校准时在重复性条件下连续测量3次,以3次测量的算术平均值作为结果,则由测量重复性引入的标准不确定度为:B.4.2标准物质引入us确(c定i)0u.s1mg/L/3≈0.18mg/L由标准物质引入的不确定度分量ucs可以根据标准物质证书提供的扩展不确定度Ucs和包含因子kcs根据公式(B.2)计算:ucs=(B.2)式中:ucs—标准物质引入的标准不确定度,mg/L;JJF2116—202411Ucs—标准物质证书提供的扩展不确定度,mg/L;kcs—标准物质证书提供的包含因子,通常为2。的标准不确定度为:C反应蛋白标准物质的标准值为(12.3±0.9)mg/L(k=2),的标准不确定度为:B.5标准不确定度一览表标准不确定度一览表见表B.1。表B.1特定蛋白分析仪测定结果标准不确定度一览表不确定度分量不确定度来源标准不确定度uc测量重复性0.18mg/Lucs标准物质0.31mg/LB.6合成标准不确定度uc由于各不确定度不相关,故B.7扩展不确定度49mg/LJJF2116—202412附录C国际温标纯水密度表表C.1为1990年国际温标纯水密度表。表C.11990年国际温标纯水密度表(kg/m3)t90/℃00.10.20.30.40.50.60.70.80.915999.099999.084999.069999.053999.038999.022999.006998.991998.975998.95916998.943998.926998.910998.893998.876998.860998.843998.826998.809998.79217998.774998.757998.739998.722998.704998.686998.668998.650998.632998.61318998.595998.576998.557998.539998.520998.501998.482998.463998.443998.42419998.404998.385998.365998.345998.325998.305998.285998.265998.244998.22420998.203998.182998.162998.141998.120998.099998.077998.056998.035998.01321997.991997.970997.948997.926997.904997.882997.859997.837997.815997.79222997.769997.747997.724997.701997.678997.655997.631997.608997.584997.56123997.537997.513997.490997.466997.442997.417997.393997.396997.344997.32024997.295997.270997.246997.221997.195997.170997.145997.120997.094997.06925997.043997.018996.992996.966996.940996.914996.888996.861996.835996.80926996.782996.755996.729996.702996.675996.648996.621996.594996.566996.53927996.511996.484996.456996.428996.401996.373996.344996.316996.288996.26028996.231996.203996.174996.146996.117996.088996.059996.030996.001996.97229995.943995.913995.884995.854995.825995.795995.765995.753995.705995.67530995.645995.615995.584995.554995.523995.4939