基因工程超级题库

基因工程题库

一、名词解释

1、定点诱变：取代、插入或缺失克隆基因或DNA序列中的任何一个特定的碱基，这种体外

特异性改变某个碱基的技术叫作定点诱变。

2、重组DNA分子：由外源的目的基因或目的DNA片段与载体连接形成的DNA。

3、锚定PCR:锚定PCR也被称为单链特异引物PCR,是一种根据已知目的基因的一小段序列

信息来快速扩增已知序列上游或下游片段的技术。

4、限制性核酸内切酶：可以识别特定的脱氧核甘酸序列，并在每条链中特定部位的两个核

昔酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制性内切酶。

5、穿梭载体：是指可以再两种截然不同的生物细胞中复制的载体。

6、Ti质粒：存在于能够引起植物形成冠瘦瘤的土壤农杆菌中，称为诱导肿瘤的质粒。

7、基因家族：核甘酸序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的一组基因

8、基因工程：利用遗传重组技术，在体外通过人工剪切和拼接等方法。将包含目的基因、

特殊载体在内的各种必需元件的DNA分子经过改造和重组后,转入另一受体生物细胞内。

9、TDNA:能导入宿主细胞并插入其DNA中发挥作用的Ti质粒部分DNA前段。

10、P1噬菌体载体：是含有许多P1噬菌体来源的顺式作用元件，能容纳70~100kb大小的

基因组DNA片段。

11、基因:是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核甘酸序列,是遗传物质的最小功能单位。

12、限制：是指细菌的限制性核酸酶对入侵DNA的降解作用

13、质粒：存在于细胞质中的一类独立于染色体的可自主复制的遗传成分，绝大多数为共价

闭合环状DNAo

14、柯斯质粒载体:一类人工构建的含"DNAcos序列和质粒复制子的特殊类型的载体，也称

黏粒载体。

15、转基因动物：由于外源基因导入动物的基因组并能遗传给后代的一类技术。

16、假基因：因其碱基顺序发生缺失、倒位或点突变等失去活性，成为无功能基因，他们或

者不能转录，或者转录后可合成无功能的异常多肽

17、转基因植物：利用DNA重组技术，在离体条件下对不同生物的DNA进行加工，并按照人

们的意愿和适当的载体重新组合，再将重组DNA转入生物体或细胞内，并使其在生物内

或细胞中表达的植物

18、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA

的感染，可讲解外来DNA,从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而

生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解。限制酶和

甲基转移酶组成限制与修饰系统。

19、受体Ti质粒：带有重组T-DNA的大肠杆菌质粒衍生载体称为“中间载体”，而接受中

间载体的Ti质粒称为受体Ti质粒

20、双元载体系统：指由两个分别含有T-DNA和vir区的相容性突变Ti质粒构成的双质粒

系统。

21、重叠基因：在某些生物中，不同基因可共用同一段DNA的核昔酸序列，它们的核甘酸序

列是彼此重叠的，这样的基因称为重叠基因。

22、同源区：两段双链DNA中序列基本相同的区域。

23、转基因动物技术：以动物个体作为基因受体的基因表达技术。

24、SD序列：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。

25、转座基因：可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置，甚至在不同的染色体

之间跳跃的基础成分

26、一元载体系统：是中间表达载体与改造后的受体Ti质粒之间，通过同源重组所产生的

一种复合型载体，通常一成为共整合载体。

27、同尾酶：切割不同的DNA片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶

28、基因工程：对不同的遗传物质在体外进行剪组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通

过载体注入微生物、植物和动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需的基因在细胞中表达，

产生人类所需的产物或新生物类型

29、分泌信号序列:也称信号序列，编码前体蛋白上N端一段17s30个氨基酸残基的分泌信

号肽。

30、锌指结构：指的是在很多蛋白中存在的一类具有指状结构的模体

31、终止子：为基因3'端非翻译去与转录终点下游紧邻的一段非转录的核甘酸短序列

32、反应元件：是一类能介导基因对细胞外的某种信号产生反应的DNA序列

33、修饰：是指细菌的修饰酶对于自身DNA碱基分子的甲基化等化学修饰作用

34、反转录病毒：是一类含单链RNA的动物病毒

35、cDNA文库：以mRNA为模板，在体外经反转录酶催化反转录生成cDNA,与适当载体连接

后转化宿主菌并繁殖扩增，这样包含着组织细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该

组织细胞的cDNA文库

36、受体细胞：能够摄取外源DNA并能够使其稳定存在的细胞，又称宿主细胞或寄主细胞

37、转化：细菌获得外源质粒DNA,产生新遗传性状的过程

38、转导：以噬菌体为媒介，将外源DNA导入细菌的过程

39、转染：指感受态的受体细胞捕获和表达以噬菌体为载体的重组DNA分子的进程

40、感受态：细菌能从周围环境中吸收DNA的生理状态为感受态

41、接合转化：通过供体细胞同受体细胞间的直接接触而传递外源DNA的方法

42、融合蛋白：将外源蛋白基因与受体菌自身蛋白基因重组在一起，但不改变两个基因的阅

读框，这样形成的蛋白质为融合蛋白

43、非融合蛋白：不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白称为非融合蛋白

44、同义密码子：编码相同氨基酸的一组密码子为同义密码子

45、基因工程细胞：含有表达型重组DNA的生物细胞，能够通过工程方法在体外进行规模化

培养，获得大量的外源基因的表达产物，这样的细胞称为基因工程细胞

46、补料分批培养：发酵反应器中接种培养一段时间后，间歇或连续的补加新鲜培养基，发

酵结束前一段时间停止补料，发酵结束后一次性放料的培养方法

47、离心沉淀法：利用固体颗粒在外力作用下与液体物质做相对运动最终实现固液分离的细

胞分离技术

48、超声波破碎法：利用一定功率的超声波，机械振动处理细胞悬液，使细胞在急剧震荡中

破裂

49、酶解法：利用能降解细胞壁的酶将菌体细胞壁破坏，使细胞暴露在低渗溶液或者含变性

剂的溶液中从而破裂

50、载体：携带外源基因或DNA片段进入宿主细胞进行复制和表达的运载工具

51、基因重排：某些基因片段改变原有的序列，通过调整有关基因片段衔接序列，重新组成

一个完整的转录单位

52、转化子：是指得到外源DNA分子并稳定存在的受体细胞

53、重组子：得到重组DNA分子的转化子

54、基因表达：结构基因所包含的遗传信息，遵照中心法则通过转录生成RNA,以及转录后

再经过翻译生成蛋白质的过程

55、光穿孔法：利用激光产生的热量，使细胞壁产生空洞，将外源物质导入细胞

56、冲击波法：利用细胞受冲击后细胞膜通透性瞬时增加，将外源基因导入细胞

57、电穿孔法：是指在高压脉冲的作用下使细胞膜上出现微小的孔洞，从而导致不同细胞之

间的原生质膜发生融合作用的细胞生物学过程

58、抗体转染法：利用抗体作为载体，介导基因注入表达特定表面抗原细胞的方法

59、核移植：将外源性细胞核作为供体转入到去核卵母细胞中，细胞核发生基因程序重排而

获得多能性，开始新的胚胎发育

60、反向重复序列：是指两个顺序相同的拷贝在DNA链上呈反向排列

61、看家基因：在机体生长发育过程中，有些基因在几乎所有细胞中持续表达，这类属于基

础或组成型表达的基因为看家基因

62、基因超家族：是指一组有多基因家族及单基因组成的更大的基因家族

63、显微注射转化法：利用显微注射仪将外源DNA直接注入受体的细胞质或细胞核中

二、选择题

1、下列关于PCR介导定点诱变的优点不包括（B）

A、突变体回收率高B、PCR产物错误率低

C、快去简便D、高温度的利用降低模板DNA形成二级结构的能力

2、关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确（C）

A、具有可诱导性B、具有可转移性

C、细菌生长的任何时期都可以出现D、不同细菌出现感受态的比例是不同的

3、固相亚磷酸三酯法是目前最通用的一种合成寡核甘酸的方法，其合成的一个循环周期可

分为四个步骤，正确的序号应是：（B）

a.偶联反应b.氧化作用c.去保护d.封端反应

A.abedB.cadbC.cbadD.bacd

4、在小量快速提取DNA样品时为了降低污染物对限制性内切酶活性的抑制作用，以下不正

确的方法是（A）

A、增加限制性内切酶的用量

B、增加酶切反应的总体积，降低抑制物的浓度

C、延长酶切反应时间

D、加入高浓度的盐离子，升高DNA样品的温度

5、关于酵母载体Leu2营养缺陷体，下列说法正确的是：（A）

A、只有在添加亮氨酸的条件下才能正常生长

B、添加亮氨酸的条件下不能正常生长

C、菌体本身自带Leu2合成基因，能在基本培养基上生长

D、能自身合成Leu

6、下列中关于Ti质粒改造表达错误的是（D）

A、保留T-DNA的转移功能

B、取消TDNA的致瘤性

C、通过简便的手段可使外源DNA插入T-DNA,并随着『DNA整合到植物染色体上

D、易进行DNA重组操作

7、关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法是不正确的？（C）

A具有可诱导性B具有可转移性

C细菌生长的任何时期都可以出现

D不同细菌出现感受态的比例是不同的

8、用CsCl-EB密度梯度平衡离心的方法分离纯化质粒DNA时，（A）与Cs离子结合，密

度最大，沉积管底。

A、RNAB、染色体DNAC、质粒D、蛋白质

9、PBerg构建SV40二聚体时用了几种不同的酶，其中（B）的作用是制造隐蔽的5'端

A、末端转移酶B、外切核酸酶

C、外切酶mD、DNA连接酶

10、YAC载体的选择标记主要采用（A）

A、营养缺陷型基因B、噬菌体

C、免疫缺陷型基因D、病毒

11、下列是细胞RNA提取过程最关键的是（C）

A、样品或组织的有效破碎B、有效地是使酸蛋白复合体变性解离

C、抑制RNA酶的活性D、有效地将RNA从DNA和蛋白质混合物中分离

12、在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用（D）

A、T4DNA聚合酶B、Klenow酶

C、大肠杆菌DNA聚合酶D、T7DNA聚合酶

13、琼脂糖凝胶电泳时电压不应超过（C）V/cm。

A、7B、8C、5D、6

14、下列那些不是质粒载体（C）

A、PSC101B、PBR322C、C0L123D、PUC

15、柯斯质粒载体的特点（D）

A、噬菌体的特点B、质粒载体的特点C、高容量的克隆能力D、整合其他基因

16、动物细胞表达系统中常用的表达载体有（C）

A农杆菌B酵母

C腺病毒D芽抱杆菌

17、基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中

只有哪一种质粒被视为用作基因工程载体的天然质粒载体（B）

ApBR322BpSClOl

CpUBllODpUC18

18、采用基因工程技术将人凝血因子基因倒入山羊受精卵培育出了转基因羊。但是人凝血因

子之存在于该转基因羊的乳汁中，下列有关叙述，正确的是（B）

A、人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基数目的3倍

B.可用显微镜注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵

C.在该转基因羊中，人凝血因子只存在与乳腺细胞，而不存在与其他体细胞中

D.人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成DNA

19、以下哪样不是基因芯片的制备方法D

A点样法B压电印刷法

C光蚀刻合成法D点击转化法

20、下列有关基因工程的应用中，对人类不利的是（c）

A.制造“工程菌”用于药品生产。

B.制造“超级菌”分解石油、农药

C.重组DNA诱发受体细胞基因突变

D.导入外源基因替换缺陷基因

21、下列不是高等植物基因的诱导表达系统的是（c）

A.外源基因的四环素诱导系统

B.外源基因的乙醇诱导系统

C.外源基因的甲醇诱导系统

D.外源基因的类固醇诱导系统

22、（A）是革兰氏阴性菌，是目前遗传背景最清楚的原核生物之一。

A大肠杆菌B芽抱杆菌C链霉菌D蓝藻

23、下列细胞中不能用作转基因动物技术宿主细胞的是（D）

A、BHK-21细胞B、CH0-K1细胞

C、鼠骨髓瘤细胞D、CV1细胞

24、下列不是哺乳动物的转基因操作的是（C）

A、显微注射法B、胚胎干细胞法

C、转录病毒载体法D、精子介导的基因转移

25、原核生物和真核生物基因表达调控的共同点不包含以下哪项？

A结构基因均有调控序列。

B表达过程都具有复杂性，表现为多环节。

C表达的时空性，表现为不同发育阶段和不同组织器官上的表达的复杂性。

D转录与翻译的间断性。

26、原核表达系统中，常用的受体菌包括以下哪些？

①大肠杆菌；②芽抱杆菌；③链霉菌；④蓝藻；⑤酵母细胞；

A①②③⑤

B②③④⑤

C①②④⑤

D①②③④

27、下列那种克隆载体对外源DNA的装载量最大（B）

A.黏粒B.酵母人工染色体（YAC）C.质粒D.入噬菌体

28、关于穿梭质粒载体，下面那种说法正确（B）

A.在不同的宿主中具有不同的复制机制

B.在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点

C.在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶

D.在不同的宿主细胞中具有不同的复制效率

29、关于探针的说法错误的是？（C）

A、核酸根据来源可分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡核甘酸探针

等几类。

B、根据目的要求不同，可以采用不同类型的核酸探针。

C、从一般意义上来说，任意一段核酸片段都可以作为探针。

D、探针应具有高度特异性、来源要尽量方便、探针的序列结构应不受标记物的影响等原则。

30、关于固相支持物的说法错误的是？（C）

A、固相支持物具有较强的结合核酸的能力。

B、非特异性吸附少，在洗膜条件下能将非特异性吸附在其表面的探针分子洗脱掉。

C、通常来说固相支持物的机械性能较差。

D、目前最常用的几种固相支持物有；硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、滤纸等。

31、转化受体系统的类型不包括：（B）

A.原生质体受体系统B.经过愈伤组织的芽受体系统

C.生殖细胞受体系统D.叶绿体转化系统

32、农杆菌转化法不包括以下那种方法：（D）

A.叶盘转化法B.原生质体共培养转化法

C.整株感染法D.PLO诱导法

33、根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是（A）

A.基因诱变B.分子克隆C.DNA重组D.基因无性繁殖

34、第一个被分离的H类酶是：（C）

A.EcoKB.HindlllC.HindIID.EcoB

35、用免疫化学法筛选重组体的原理是（A）

A.根据外源基因的表达B.根据载体基因的表达

C.根据mRNA同DNA的杂交D.根据DNA同DNA的杂交

36、Southern印记是用DNA探针检测DNA片段，而Nouthern印迹则是：（C）

A.用RNA探针检测DNA片段B.用RNA探针检测RNA片段

C.用DNA探针检测RNA片段D.用RNA探针检测蛋白质片段

37、用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的（A）

A.DNAB.RNAC.抗体D.抗原

38、关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确？（C）

A.具有可诱导性B.具有可转移性

C.细菌生长的任何时期都可以出现

D.不同细菌出现感受态的比例是不同的

39、黏性末端链接法，不仅操作方便，而且（B）

A.产生新切点B.易于回收外源片段

C.载体不易环化D.影响外源基因的表达

40、在下面试剂中，哪一种可以螯合Ca”离子？（D）

A.EDTAB.柠檬酸钠C.SDSD.EGTA

41、限制性核酸内切酶可以特异性识别：（B）

A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列

C.特定的三联密码D.以上都正确

42、限制性核酸内切酶的星号活星是指：（A）

A.在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性

B.活性大大提高

C.切割速度大大加快

D.识别序列与原来的完全不同

43、下面那一种不是产生星号活性的主要原因：（D）

A.甘油含量过高

B.反应体系中含有有机溶剂

C.含有非Mg"的二价阳离子

D.酶切反应时酶浓度过低

44、在基因工程中，可用碱性磷酸酶（A）

A.防止DNA的自身环化

B.同多核甘酸激酶一起进行DNA的3'末端标记

C.制备突出的3'末端

D.上述说法都正确

45、下列酶中，除（A）外都具有磷酸酶的活性

A.X核酸外切酶B.外切酶III

C.单核甘酸激酶D.碱性磷酸酶

46、关于穿梭质粒载体，下面那一种说法最正确：（B）

A.在不同的宿主中具有不同的复制机制

B.在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点

C.在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶

D.在不同的宿主细胞中具用不同的复制速率

47、黏粒是一种人工制造的载体，（D）

A.具有COS位点，因而可进行体外包装

B.它具有质粒DNA的复制特性

C.进入受体细胞后，可引起裂解反应

D.以上都是

48、关于cDNA的最正确的说法是什么：（C）

A.同mRNA互补的单链DNA

B.同mRNA互补的双链DNA

C.以mRNA为模板合成的双链DNA

D.以上都正确

49、用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：（C）

A.染色体DNA断成了碎片

B.染色体DNA分子量大，而不能释放

C.染色体变性后来不及复性

D.染色体未同蛋白质分开

50、下列文库中，（C）属于cDNA文库

A.YAC文库B.MAC文库

C.扣减文库D.BAC文库

51、在cDNA技术中，所形成的发夹环可用（C）

A.限制性内切核酸酶切除

B.用3'外切核酸酶切除

C.用S1核酸酶切除

D.用5'外切核酸酶切除

52、关于DNA接头在基因文库中的作用，下列说法中哪一项不正确？（D）

A.给外源DNA添加适当的切点

B.人工构建载体

C.调整外源基因的可读框

D.增加调控元件

53、cDNA文库库包括该种生物的（A）

A.某些蛋白质的结构基因

B.所有蛋白质的结构基因

C.所有结构基因

D.内含子和调控区

54、下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的？（A）

A.从特定组织或细胞中提取DNA或RNA

B.用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA

C.以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA

D.新合成的双链DNA甲基化

55、下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的？（C）

A.操作方便

B.易于回收片段

C.易于定向重组

D.载体易于自身环化，降低重组率

56、Southern印迹的DNA探针（C）杂交

A.只与完全相同的片段

B.可与任何含有相同序列的DNA片段

C.可与任何含有互补序列的DNA片段

D.可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段

57、用下列方法进行重组体的筛选，只有（C）说明了外源基因进行了表达

A.Southern印迹杂交

B.Northern印迹杂交

C.Western印迹

D.原位菌落杂交

58、报告基因（D）

A.以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列

B.以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区

C.能用于确定启动子何时何处有活性

D.以上都是

59、切口移位是指在（）作用下，使（B）带上放射性标记

A.DNA聚合酶I,RNA

B.DNA聚合酶I,DNA

C.DNA聚合酶m,RNA

D.DNA聚合酶III,DNA

60、用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的（D）

A.DNA

B.RNA

C.抗体

D.A+B

61、关于T4DNALigase,下列说法哪一项不正确？（C）

A.是最常用的DNA连接酶

B.不但能连接黏性末端，还能连接平末端

C.不能连接黏性末端

D.最适温度37摄氏度

62、基因工程的创始人是（D）

A.A.Kornberg

B.W.Gilbert

C.P.Berg

D.Cohen

63、关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（B）不太恰当

A.由作用于同一DNA序列的两种酶构成

B.这一系统中的核酸酶都是II类限制性内切核酸酶

C.这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰

D.不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统

64、在DNA的3'-5'链上，基因的起始密码子是（A）

A.ATG（或GTG）

B.AGT

C.TAG

D.TGA

65、II限制性内切核酸酶可以特异性识别（B）

A.双链DNA的特定碱基对

B.双链DNA的特定碱基序列

C.特定的三联密码

D.以上都正确

66、末端转移酶是合成酶类，具有（B）活性

A.3'-5'DNA聚合酶

B.5'-3'DNA聚合酶

C.5'-3'DNA内切酶

D.5'-3'DNA外切酶

67、不是基因工程方法生产的药物是（C）

A.干扰素

B.白细胞介素

C.青霉素

D.乙肝疫苗

68、下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件（B

A.具有某些标记基因

B.决定宿主细胞的生存

C.能够在宿主细胞中复制

D.有一个或多个限制酶切点

69、在基因工程中用来修饰改造基因的工具是（A）

A.限制酶和连接酶

B.限制酶和水解酶

C.限制酶和运载酶

D.连接酶和运载酶

70、下列与关基因工程的叙述中，不正确的是（A）

A.DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来

B.基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子

C.基因治疗主要是对有基因缺陷的细胞进行替换

D.蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料

71、蛋白质工程中，直接需要进行操作的对象是（D）

A.氨基酸结构

B.蛋白质的空间结构

C.肽链结构

D.基因结构

72、有关基因与酶关系的叙述正确的是（C）

A.每个基因都控制合成一种酶

B.酶的遗传信息编码在内含子的碱基序列中

C.基因的转录、翻译都需要酶

D.同一生物体不同细胞的基因和酶是相同的

73、下列关于质粒的叙述正确的是（B）

A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器

B.质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状双链DNA分子

C.质粒只有在侵入宿主细胞后在宿主细胞内复制

D.细菌治理的复制过程一定是在宿主外独立进行的

74、关于基因工程的叙述，正确的是（B）

A.基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的基因

B.细菌质粒是基因工程常用的运载体

C.通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA,用另一种限制没处理运载体DNA

D.为育成抗除草剂的农作物新品种导入的抗除草剂的基因只能以受精卵为受体

三、填空题

1、随机突变包括化学或物理诱变法以及PCR随机诱变法

2、在CaCk法制备大肠杆菌感受态细胞并转化的实验中，为了提高转化效率，实验中要考

虑的重要因素有：细胞生长状态和密度、质粒的质量和浓度、试剂的质量、防止杂菌和

杂DNA的污染。

3、PCR作为一种体外快速扩增目的DNA片段的技术，主要由变性、退火、延伸三个基本步

骤组成。

4、在限制修饰系统中，限制是指细菌的限制性核酸酶对入侵DNA的降解作用。

5、酵母载体主要有三种类型，分别是整合型载体Yip、复制型载体YRp、附加体型载体

YEp

6、双元载体系统由两个含有T-DNA和vir区的相容性突变Ti质粒微型Ti质粒和辅助

Ti质粒构成。

7、提取纯化核酸总的来说分为样品准备、细胞破碎、分离纯化核酸和核酸的沉淀浓

超四大步骤。

8、碱裂解法质粒分离主要步骤为细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和

纯化。

9、基因克隆中三个基本要点:克隆基因的类型、受体的选择、载体的选择。

1O、P1人工染色体载体是在P1噬菌体载基础上构建的，它结合了P1载体和BAC载体的

最佳特性，是一种与黏位载体相似的高通量载体。

11、核酸纯化的关键去除蛋白质

12、上游技术是基因克隆的核心与基础,包括基因重组、克隆载体的设计与构建，在设计中

注重体现“简化下游工艺和设备”的重要原则；下游技术是上有基因克隆蓝图的体现和

保证，是目的基因产品产业化生产的关键。

13、用于化学方法及酶法细胞破碎的试剂有十二烷基硫酸钠（SDS）、溶菌酶、蛋白酶K。

14、噬菌体是一类细菌病毒的总称。

15、常用的质粒载体PBR322,PUC。

16、哺乳动物转基因操作的五种方法：显微注射法,利用体细胞核移植制备转基因动物,胚

胎干细胞法,反转录病毒载体法,精子介导的基因转移。

17、动物基因工程，包括动物细胞基因表达技术，和动物转基因技术两个方面。

18、RNA病毒的种类为单链RNA、亚基因组RNA、卫星RNA

19、southernE|J迹杂交包括酶解、电泳、转膜、探针标记、杂交、杂交检出

20、植物基因工程载体根据其功能和构建过程可分为：目的基因克隆载体、中间克隆载体、

中间表达载体、卸甲载体、植物基因转化载体。

21、放射性标记法分为体内标记法和体外标记法两种。

22、原核表达系统有大肠杆菌表达系统芽抱杆菌表达系统链霉菌表达系统蓝藻表达系统

23、目前常用的表达载体分为病毒载体和质粒载体。

24、动物基因工程包括动物细胞基因表达技术和动物转基因技术两方面。

25、分批培养的细菌可分为四个时期，分别是延迟期、对数生长期、稳定期、衰亡期。

26、原核生物的启动子一般由四部分构成：转录起始位点、Pribnowbox、Sextama框、间

隔区

27、核酸探针的种类有基因组DNA探针cDNA探针RNA探针寡核甘酸探针。

28、核酸探针的标记方法有切口平移法随机引物法末端标记法生物素探针的化学标

记方法。

29、Ti质粒可以被分为四种类型：章鱼碱型、胭脂碱型、农杆碱型和农杆菌素碱型

30、用于开发载体的转化病毒有:花椰菜花叶病毒、双联体病毒、RNA病毒

31、酵母转化子筛选的标记基因主要有营养缺陷互补基因、显性基因两大类。

32、广泛用于目的基因表达的酵母菌有：酿酒酵母、产肮假丝酵母、毕赤酵母、解脂耶氏酵

母等。

33、在Laci标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色,

为阳性克隆,未插入基因的克隆显蓝色，为阴性克隆。

34、基因表达的四大表达系统分别为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞。

35、在基因工程中应用的酶类统称为工具酶。

35、Klenow酶在有dNTP情况下,呈现DNA聚合酶活性，在没有dNTP情况下呈现

外切酶活性。

36、基因工程所需的基本条件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的载体；3、用

于基因转移的受体菌或细胞。

37、基因工程的基本程序包括：DNA制备、体外DNA重组、遗传转化、转化细胞的筛选

38、RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜（尼龙膜）

上，同一放射DNA探针杂交的技术称Northern印迹

39、在分离DNA时要戴手套操作原因是手上常有核酸酶

40、能够与特定DNA序列结合的放射性DNA片段称为：W

41、核酸杂交探针可分为两大类答：DNA探针和RNA探针。

42、限制性内切酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。

43、基因工程的基本程序包括DNA制备、体外DNA重组、遗传转化、转化细胞的筛选

44、载体与CDNA连接重组可用的方法有同聚尾连接酶,加人工接头连接法。

45、回收DNA片段时，常用正丁醇处理以除去EB

46、E.coli感受态出现的生理时期是对数期。

47、在分离质粒DNA的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：可以扩增质粒DNA；

抑制了菌体的数量，有利于裂解。

48、形成平末端的方法：用产生平末端的限制酶切、用S1核酸酶切除黏性末端、用DNA

聚合酶填平粘性末端

49、DNA片段重组连接的方法有：平端连接、黏端连接、同聚尾连接、加接头连接

50、在用单一限制酶切载体和目的基因并进行连接时，为防止载体自身环化，常用碱性磷

酸酶处理载体

51、用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，目的是：中和DNA分子

的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力

52、在DNA分离过程中，通常要进行透析，目的是为了除去小分子的无机离子

53、在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素很多，主要有：核酸酶降解、化学降解、

物理剪切

54、SSCP电泳方式为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

55、酚法和碱法分离质粒DNA都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶浓度较高

56、载体根据主要用途可以分为：克隆载体、表达载体

57、克隆载体的关键元件有：多克隆位点、筛选标记基因、复制起始位点

58、载体按照传代特性可分为：自主复制型载体、整合型载体

59、细菌的移动基因存在着三种类型的转位因子包括：插入序列、转位子、噬菌体Mu和

D108

60、位于基因5'端非翻译区与转录起点上游紧邻的一段非转录序列称为启动子

61、向发酵罐内一次性投入培养基并接种培养，一次性放料的间歇性培养方法为：分批培

养

62、酵母菌转化方法：原生质体转化法、碱金属离子转化法、电激转化法

四、简答题

1、PCR介导定点诱变的不足之处。

答：①PCR产物有相对高的错误率，需要通过限制扩增的循环数，应用更好的热稳定DNA聚

合酶来改善；

②在扩增DNA的3'-末端引入非预设的核甘酸，这可通过用pfuDNA聚合酶代替Taq酶来解

决；

③一些以PCR为基础的方法，每个诱变实验需大量的引物和扩增反应；

④进行PCR反应的每套引物和模板的条件都需要优化；

⑤以亲本野生型DNA为模板的PCR反应中，污染可导致高比例的非突变的克隆；

⑥标准PCR反应不能有效扩增大于2~3kb大小的片段。

2、DNA重组选择受体细胞的基本原则有哪些？

答：①细胞要比较安全，无致病性，不会对外界环境造成生物污染；

②重组DNA分子导入受体细胞要方便；

③重组DNA分子要能够在该受体细胞内稳定存在；

④重组DNA分子的筛选要方便；

⑤遗传稳定性要高，利于扩大培养或长期培养；

⑥选择蛋白水解酶基因缺失或蛋白酶含量低的细胞，以利于稳定大量收集目的蛋白产物。

3、什么是PCR技术？PCR的基本原理是什么？

答：PCR即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定目的基因或DNA序列的技术，故

又称基因的体外扩增技术。它可以在试管中建立反应，经过数小时之后，就能将极微量

的目的基因或DNA片断扩增数十万乃至千百万倍，无需经过繁琐费时的基因克隆程序,

便可获得足够数到两精确的DNA拷贝。

PCR的基本工作原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端

相互补的寡核甘酸片段为引物，DNA聚合酶的作用下，在按照半保留复制的机制沿着

模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

4、通常所说的限制性内切酶是哪个？它有什么特征？

答：通常所说的限制性核酸内切酶是II型酶，它的限制和修饰活性分开，蛋白结构为单一成

分，限制作用的辅助因子为镁离子，切割位点在特异性位点或附近，可以识别未甲基化

的位点进行核酸内切酶切割，能对序列特异性切割，广泛应用于基因工程中。

5、三种酵母质粒载体的共同特点是什么？

答：①能在大肠杆菌中克隆，并具有较高拷贝数；

②含有在酵母中便于选择的遗传标记；

③有合适的限制酶切位点，以便外源基因插入。

6、Ti质粒分为哪几个区？

答：①T-DNA区②毒性区③接合转移区④复制起始区

7、作为基因工程理想的质粒载体必须具备什么条件？

答：(1)具有复制起点，在宿主细胞能自主复制；

(2)带有尽可能多的单一限制性酶切位点，以供外源DNA片段定点插入；

(3)具有合适的选择标记基因，为宿主细胞提供易于检测的遗传表型特征；

(4)具有较小的分子量和较高的拷贝数；

(5)基因工程所应用的质粒通常为非传递性的松弛型质粒，安全可控，不至于对操作者和

环境带来不必要的危害。

8、质粒DNA的分离纯化有哪几种方法？列举三种。

答：①碱裂解法②煮沸法③CsCl-EB密度梯度平衡离心

9、简述SangerDNA测序法原理

答：Sangerdna测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用

下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；(2)可延伸的引物必

须能提供游离的3,羟基末端，双脱氧核甘酸由于缺少游离的3,羟基末端，因此会终止聚

合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核甘酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA

片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核甘酸的序列。

10、人工染色体载体有哪三种？

答：酵母人工染色体载体、细菌人工染色体载体、P1人工染色体载体。

11、提取核酸RNA时加入氯仿和异戊醇的目的是什么？

答：①氯仿与酚混合能在变性蛋白质的同时有效抑制RNA酶的活性；

②氯仿还能加速有机相与液相分层；

③最后抽提时用氯仿可以去除核酸溶液中的痕量酚；

④加入少许异戊醇则是为了减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

12、请简述转化、转染、转导的异同

答：转化：细菌接纳外援DNA而引进新的基因标记。

转染：接受加入的DNA从而获得新的基因标记。

转导：指噬菌体将细菌基因从一种细菌中转移到另一种细菌中。一个携带自身以及宿主基因

的噬菌体称为转导噬菌体。也可指逆转录病毒获得和转移真核基因。

13、RNA的提取方法有哪些？

答：①提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来，这种方法会导致小分子RNA的丢失；

②直接在酸性条件下抽提。

14、基因工程载体的特性有哪些？

答：①在宿主细胞能自主复制

②容易在宿主细胞中分离纯化

③载体DNA中有一段不影响扩增的非必需区域,插在其中的外源基因可以正常进行复制和扩

增

④有限制酶切的克隆位点

⑤能赋予细胞特殊的遗传标记

⑥具有启动子，增强子，SD序列等表达原件

15、柯斯载体的特点

答：①具有噬菌体的特性

②具有质粒载体的特性

③具有高容量的克隆能力

16、基因芯片技术在哪些方面有所应用？并简要说明。

答：

①应用于基因表达及调控的研究：

生物体在不同的时间条件下有不同的功能基因表达,通过从该样品中提出mRNA与含有代

表该生物体中所有功能基因的芯片进行杂交，就可以获得该样品中功能基因的表达情况。

②基因芯片技术在临床上的应用：

利用基因芯片可以对某一细胞的基因表达情况进行一个全面的了解，所以还可进一步应

用于癌症的精确诊断及治疗。同时基因芯片还可以观察药物对肿瘤细胞基因表达谱的影

响，评估药物对肿瘤治疗的可行性。

17、动物基因工程中，外源基因表达包括哪些内容？

①导入大片段；

②添加基因附着区；

③利用具有组织和发育特异性调控作用的启动子和增强子；

④添加内含子；

⑤利用基因打靶系统实现染色体定位整合；

⑥加入基因座控制区。

18、简述获得目的基因常用的几种方法。

(1)直接从染色体DNA中分离

(2)人工合成

(3)从mRNA合成cDNA

(4)利用PCR合成

(5)从基因文库中筛选

19、外源基因导入植物的方法主要有哪些？

物理方法：电击法、基因枪法(biolistic)、显微注射法、微激光束法

化学方法：PEG介导法