中药材杂质测定

第四节中药及其制剂的杂志检查与一般质量控制方法水分灰分酸不溶性灰分砷盐和重金属限量有机磷和有机氯农药残留量主要项目杂质来源及检查意义水分——结块、霉变或有效成分水解灰分——控制药物本身及泥土、沙石等无机杂质砷盐——剧毒，常由除草剂、杀虫剂或化肥引入重金属——环境污染和使用农药引入残留农药——有毒烘干法（不含或少含挥发性成分）甲苯法（含挥发性成分）减压干燥法（含挥发性成分贵重药）

GC法（气相色谱法）一、水分检查法烘干法方法：取供试品2g~5g，置扁形称量瓶中，首先在100~105摄氏度干燥5h，置干燥器中放置30min，称重，在于以上温度下干燥1h，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量计算供试品中含有水分的百分率。适用范围：不含或少含挥发性成分的药品。甲苯法原理：利用水可与甲苯在69.3摄氏度共沸蒸出，收集馏出液，待分层后由刻度管测定出所含水的量方法：精密称取供试品适量置A瓶中，加甲苯200ml，并自冷凝管加入甲苯，至充满B管的狭细部分，加热A瓶，指甲本微沸，待水分完全馏出，即测定管内的水分不再增加时，停止蒸馏，放置，使水与甲苯完全分离，检测水量，即可计算出供试品含水百分率。注：A.圆底烧瓶B.水分测定管C.直形冷凝管适用范围：含挥发性成分样品的水分测定。不适用于微量水分的测定。减压干燥法方法：减压干燥器中，放入一直径12cm左右的培养皿，加入新鲜五氧化二磷干燥剂适量，使铺成0.5～1cm的厚度。取供试品2～4g，混合均匀。分取约0.5～1g，置已在供试品同样条件下干燥并称重的称瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，减压至2.67kPa(20mmHg)以下持续半小时，室温放置24小时。在减压干燥器出口连接新鲜无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称瓶迅速精密称定重量，计算供试品中含有水分的百分数。适用范围：含有挥发性成分的贵重药品气相色谱法方法：用污水乙醇浸提供试品，抽提出样品中的水分，以纯化水作标准对照，同法操作，在气相色谱仪上进行各5微升；用直径为0.25~0.18mm二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球为载体，柱温140~150摄氏度；热导检测器检测；用外标法计算样品中的含量。适用范围：对于是否含挥发性成分，含水量从微量到常量，都不影响测定。普遍适用。二、总灰分和酸不溶性成分总灰分是指药材或制剂经加热炽灼灰化遗留的无机物。除包含药物本身所含无机盐外，还包括泥土，砂石等药材外表黏附的无机杂质。测定惠芬的主要目的是控制药材中泥土、砂土的量，同时还可以反映药材生理灰分的量。

总灰分测定方法：精密称取供试品2~3g，置已炽灼至恒重的坩埚中，缓缓炽热使完全碳化，再在500~600摄氏度炽灼至完全灰化并至恒重，根据残渣的重量级算总灰分的含量百分率。有的中药生理灰分差异较大，不能说明外来杂质的量，因此需要测定酸不溶性成分。

酸不溶性灰分测定方法：取上项所得的灰分，在坩埚中加入稀盐酸10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热蒸馏水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用蒸馏水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止，滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分的百分数。总灰分的测定酸不溶性灰分的测定三、重金属重金属铅、汞、镉、铜等对人体均有严重的毒害。药材由于环境污染和使用农药等原因容易引入种金属杂质，所以中药制剂中重金属的量同样需要控制。我国现行要求，重金属限量应控制在百万分之二十以下。世界卫生组织要求将铅的限量控制在百万分之十以下，镉控制在百万分之零点三以下。（一）测定制剂中铅的方法二硫腙比色法：利用铅离子与二硫腙在Ph8.5~9.0时，生成红色络合物，用氯仿提取后于510nm处测定吸收度，用比色法测定。原子吸收分光光度法：使用铅空心阴极灯，在283.3nm处进行测定。WHO规定植物药铅≤10ppm镉≤0.3ppm干法破坏湿法破坏硫代乙酰胺法干法破坏（ChP）湿法破坏（USP）四、砷盐砷盐为剧毒物质。控制砷盐的量是控制制剂纯度的很重要的方面。中国药典收载的砷盐检查法有古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法。由于中药制剂组成复杂，在检查前必须对样品进行有机破坏。中国药典多采用碱融法破坏。例：阿胶中砷盐的检查方法：取供试品2g，加氢氧化钙1g，混合，加少量水，搅匀。干燥后先用小火烧灼使碳化，再在500~600摄氏度炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸3ml与适量的水使溶解成30ml,分取溶液10ml，加盐酸4ml与水14ml，依法检查。加碱后炽灼破坏，砷成砷酸盐，可避免砷的挥发损失。对含糖量高的制剂，采用湿法破坏较为有利。供试品加硝酸-高氯酸或硫酸，加热使有机物破坏。砷盐检查还可采用原子吸收分光光度法：用砷空心阴极灯，在193.7nm处检测，方法专属，灵敏，定量限可达百万分之0.05。供试品有机破坏古蔡氏法Ag—DDC法五、残留农药常用农药有有机氯类如艾氏剂、六六六、氯丹等；有机磷类如三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷等；氨基甲酸酯类如西维因；二硫代氨基甲酸酯类如福镁铁、代森锰等，无机农药如磷化铝，砷酸钙等。此外还有苯氧羧酸类除草剂。多数农药残留期短，其中有机氯类等以及少数有机磷农药能长期残留，所以需要控制。农药不明的样品，一般可测定总有机氯量和总有机磷量。已知农药的样品多采用气相色谱法检查有关的农药。中国药典规定：甘草、黄芪的六六六和DDT残留量不得高于百万分之零点二、五氯硝基苯残留量不得高于百万分之零点一。残留农药测定1、总氯量的测定2、总磷量的测定3、气相色谱法（已知农药）总氯量的测定方法：取供试品细粉适量，加约10倍的乙腈-水（65：35），高速搅拌后过滤，取滤液用石油醚（30~60摄氏度）萃取出农药，浓缩萃取液后滴加于不含氯化物的滤纸上，待溶剂挥干后，照氧瓶燃烧法燃烧破坏。取吸收液，按硫氰酸铵成色法测定氯的量。供试品用乙腈-水提取，植物药中的纤维、蛋白质、糖、淀粉、脂肪等不能被提取。农药为脂溶性，再用石油醚萃取出农药，极性和中等极性的有机成分可进一步除去。氧瓶燃烧破坏后，有机氯转化为无机氯，并吸收入水中。取吸收液，加入硫氰酸汞试液，可定量生成难离解的氯化汞，并置换出相当量的硫氰酸根离子，再加入硫酸铁铵溶液，生成红色硫氰酸铁配位离子，于460nm波长处有最大吸收，吸收度与氯离子量呈线性关系，故可用比色法测定含氯量。2Clˉ+Hg(SCN)2―→HgCl2+2SCNˉ

6SCNˉ+2Fe3+―→[Fe(SCN)63ˉ总磷量的测定方法：供试品按总氯量测定法用石油醚萃取后，为进一步除去干扰，过佛罗里硅土柱，用乙醚-石油醚（30~60摄氏度）混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩后，用氧瓶燃烧法破坏处理，使有机磷转化为无机磷酸盐，再用磷钼酸比色法测定。磷酸盐与钼酸铵试液、硫酸试液反应生成磷钼酸，再与氨基萘磺酸试液反应，被还原为钼蓝，在820nm处测定吸收度，同法制备标准曲线，按标准曲线法测定含量。通常未污染的植物含磷约0.000005~0.000001，如果测定结果在此范围内，可认为样品不含有机磷农药。气相色谱法气相色谱法分离效能高，具有高灵敏度的专属检测器，是对残留农药进行定性或定量分析的最常用方法。先用非极性有机溶剂萃取出残留农药，一般需再过硅藻土或佛罗里硅土柱进一步纯化。分析十多以硅氧烷类为固定液，如OV-17，OV-21，SE-30等，氮气为载气。测定有机氯时，使用电子捕获检测器（ECD）；测定有机磷时，使用火焰广度检测器（FPD）。火焰光度检测器是测定硫、磷化合物的专用检测器。当含磷化合物在富氢火焰中燃烧时，产生的HPO将发射526nm的特征光，可专属性检测磷。气相色谱条件：柱长2m，内径3mm，担体为ChromosorbW/AW-DWCS，涂布2.5%SE-30和3%QE-1混合固定液，火焰光度检测器检测，进样口温度220摄氏度，柱温180摄氏度，载气为氮气。对照品溶液的制备：精密称取待测农药对照品适量，加本或氯仿定量稀释成每1ml含1mg的溶液，作为贮备液。临用前取贮备液适量，加二氯甲烷稀释成每1ml含1μg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备：精密称取中药细粉10g，置具塞锥