基于QbD的细胞培养工艺开发-问题解答

北京义翘神州·在线讲座一一《基千QbD的细胞培养工艺开发》答疑环节汇总非常感谢大家对北京义翘神州在线讲座的大力支持，本次讲座已圆满结束，我们对直播过程中答疑环节大家的问题以及老师的解答进行整理如下。如果有需要补充的，有任何建议或想听到其他更多相关主题的讲座，欢迎来信和我们交流，我们会根据您的宝贵意见不断完善，以后给大家带来更多更精彩的在线讲座！问题1:PAT工具有什么好推荐的吗？答：当前的在线PAT工具，都需要个性化的建模，所以还是要参考每个工艺的实际需求进行选择，比如进口的有赛默飞、梅特勒、赛多利斯都有在线质谱仪，国内华东理工大学的在线质谱仪，可以对过程气体进行在线分析；同时也可以进行残糖和细胞密度的在线测定等。问题2:Doe—般用什么软件分析？答：收费的有minitab、Design-Expert12、STATGRAPHICSCenturion;免费的有JMP等，设备仪器厂家也会带DOE软件，也可以用。问题3：请问老师，CHO细胞反应器培养泡沫较多，—般怎么解决？答：可以尝试从以下几个方向着手设计实验，具体视细胞和工艺而定：1)细胞本身：耗氧性细胞，考虑改变通气方式（如更换成微泡通气）；2)控制角度：降低通气量，增加搅拌，3)培养基角度：是不是采用的培养基本身容易产泡沫4)添加消泡剂。问题4：吕总好，在DOE实验时有没有遇到在上—轮得出的优化条件，在验证条件时比对照组表达还低的情况？DOE软件做细胞培养条件优化适用吗？答：需要考虑DOE优化的时候有没有做平行试验，平行试验的线性相关性如何，才能确定优化实验的结果是合理准确的，在此基础上分析判断验证试验比对照组低的结果，是否出现异常才有意义。DOE本来就是—种实验设计和数据分析软件，适用于细胞培养条件的优化，关键是在实验设计前，需要考虑清楚哪些参数条件是固定不变的，哪些条件需要优化，然后严格按照DOE设计方案执行。问题5:CHO反应器培养乳酸积累较多，改善措施？答：CHO产生乳酸—般是有—个周期的，大部分是在5-7天达到峰值，然后开始下降，在细胞收获期间，因为细胞活率下降，细胞状态变差，导致乳酸急速升高。—般过程中乳酸积累过高，通常认为是细胞状态不好的表现，可以尝试从以下几个方向着手设计实验，具体视细胞和工艺而定：1)对工艺和质量无影响：如果该细胞在高的乳酸积累环境下对工艺过程和蛋白表达及蛋白质量不会产生直接的不利影响，说明该细胞本身易产乳酸，可以不用太多关注；2)对工艺和质量有影响：培养基方面：①关注基础培养基和补料培养基中的初始糖，糖值太高，容易产乳酸；①关注补糖策略；②更换不同培养基；③采用灌流技术（充分评估）；。控制方面：①考虑细胞是否耐受剪切力，如降低转速或者通气速率；②改为大泡通气。问题6:QBD看什么书比较好？求推荐，谢谢！答：主要是看以下几本书：ICH的Q8\Q9\Ql0\Qll。QbD关于药物研发的书籍，还有—本王兴旺老师编译的书籍值得推荐，书名为《QbD与药品研发：概念和实例》，对理解QbD概念及利用很有帮助。问题7:发酵条件DOE设计了八个实验，可是只有四个平行罐，不能—次性开展，实验分两批次进行，这样得到的数据可以用来分析吗？答：可以的。看怎么取舍关键影响因素，如果对时间和空间因素要求不是很高，排除次要因素，得到的数据也是可以用来进行分析的。问题8：缩小模型的确认，—般怎么做和评价？答：如果是通过相似性逐级放大的，—般不需要做缩小模型。问题9：做DOE筛选因子的时候，用完全析因设计，但是不知道有没曲率效应，这个怎么避免？答：可以通过增加中心点来降低曲率效应。问题10:就是DOE不能平行—起做，可以设计—个内参组吗？答：—般不需要。北京义翘神州科技股份有限公司(SinoBiologicalInc.)重点从事重组蛋白、抗体、基因、ELISA试剂盒、培养基等产品，以及重组蛋白、抗体的开发和生物分析检测等服务。同时，义翘神州也致力于提供真正“一站式”技术服务推进客户研发进程，如重组蛋白生产及纯化服务、抗体研发及生产技术服务、分子生物学技术服务、免疫检测技术服务等。义翘神州的所有产品全部自主研发生