SNT 3731.1-2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第1部分鹌鹑成分检测 PCR法_第1页
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SNT 3731.1-2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第1部分鹌鹑成分检测 PCR法_第3页
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食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第1部分：鹤鹑成分检测PCR法1本部分为SN/T3731的第1部分。食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第1部分：鹌鹑成分检测PCR法1范围SN/T3731的本部分规定了食品及饲料中鹌鹑成分检测的PCR方法。本部分适用于食品及饲料中鹌鹑成分的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测多聚酶链式反应polymerasechainreaction;PCR一种体外扩增DNA的方法。PCR使用一种耐热的多聚酶，以及两条含有20个左右碱基的单链引物。经过高温变性将模板DNA分离成两条链，低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5'端到3'端合成一条互补的新链。而新合成的DNA又可以继续进行上述循环，因此DNA的数自不断倍增。TagDNA酶ThermusaquaticusDNApolymerase从Thermusaquaticus细菌中提取的耐热DNA聚合酶。下列缩略语适用于本文件。dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammoniumbromide)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)DNAMarker:核酸相对分子质量标准5方法提要2序列(5'-3*)目的基因F:5'-TGAGCTCAATAGCCGCCA-3’R:5'-TGGCTTAATGGTTG6.2.1裂解液：1%CTAB;0.05mol/L6.2.675%乙醇。1.000mL;使用时10倍稀释。38.2样品DNA提取8.3PCR扩增9质量控制410结果判定与表述10.1结果判定10.1.1在符合第9章的情况下，被检样品大小处未见PCR扩增条带则判为阴性。10.1.2将可疑阳性的PCR扩增产物进行核酸序列测定，与附录A中鹤鹑线粒体12sDNA基因相对应片段的序列比对，其片段大小正确，同源性达到97%以上，则确证含有鹌鹑成分。10.2结果表述11防污染措施检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的规定执行。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为100mg/kg。5TGAGCTCAATAGCCGCCACTAATAAGACAGGTCAAGGTATAGCCAAATGGGCTACATTTTCTAAAATAGAACAAACGAAAAAGGACATGAAACCTGAAGGAGGATTTAGCAGTAAA

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