化学农药环境安全评价试验准则 第10部分：蜜蜂急性毒性试验 征求意见稿

4化学农药环境安全评价试验准则第10部分：蜜蜂急性毒性试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，本文件规定了蜜蜂急性毒性试验的试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理、质量控制以及试验报告等的基本本文件适用于为化学农药登记而进行的蜜蜂急性经口毒性试验、急性接触毒性试验和蜜蜂幼下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修GB/T6682分析实验室用水规格NY/T4195.1农药登记环境影响试验生3.1剂量，用LD50表示.3.253.3成年工蜂Adultforagerhon在蜜蜂种群繁殖期，指蜂群中具备外勤采集能力和行为的蜜3.4将不同剂量的被试物分散在蔗糖溶液中饲喂成年工蜂，药液消耗完后测定药液的消耗量，并4.2蜜蜂急性接触毒性在蜜蜂被麻醉后，将不同浓度试验药液点滴在受试蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后，将蜜4.3蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验），6温度可出现一定的偏差，但不应低于23℃或高于40℃,且每24h内出现的偏差不应超过一次，除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为6.1.3丙酮（C3H6OCAS号：67-64-1）。6.1.5二甲基亚砜（C2H6OS，CAS号：67-68-5）。6.1.6葡萄糖-D（C6H12O6，CAS号6.1.9蔗糖（C12H22O11，CAS号：57-506.2供试生物4195.1的要求饲养，受试蜜蜂应为健康、大小一致前对蜂群进行了卫生处理（如螨虫或疾病治疗），需7该控制器应避免放置在蜂箱边缘。第2天检查新卵6.2.2.3移虫前将移虫针、人工育工台基浸没在75%酒精（体积比）或其他6.3人工饲料6.3.2.1应待酵母提取物、葡萄糖6.3.2.2整个试验期间，在每次试验开始前7.1试验蜂笼（易清洁、通风好，材质可为不锈钢、金属丝网、7.2蜂王产卵控制器，构成见附录A7.6聚苯乙烯或聚丙烯材质的育王台基，构成见附录B的图88.2参比物按正式试验的条件，以较大间距设置4个～5个处理组，以确定正式试验的剂量理组，并设空白对照组，使用有机溶剂、乳化剂、分散剂等助溶的还需增设溶剂对照组。每组3可使用有机溶剂、乳化剂或对蜜蜂毒性较低的分散剂（如丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等）），99.2蜜蜂急性接触毒性按正式试验的条件，以较大间距设置4个～5个处理组，以确定正式设置上限剂量100μga.i./蜂，即在被试物达100μga.i./蜂时仍未见蜜蜂死亡，则无需继续试9.3蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验方法置于同一细胞培养板中，每孔一个育王台基一只幼虫。每组处理组用一个细胞培养板，培养板应按正式试验的条件，以5倍~10倍几何级差设置处致，并置于同一细胞培养板中。如果与空白对照组相比，死亡率具有统计学上的显著性差异，应每次试验均应设置参比物对照组，乐果暴露a）用无菌水或有机溶剂将被试物溶解并稀释至不同浓度，将不同浓度被试物溶液分别与人对照组。台基（参见附录B）。所有幼虫每天定时(±0.5h）投喂一次（除第2d），投喂前将饲料预热至9.3.7.2判断蜜蜂幼虫死亡的标准为9.3.8试验终止在第7天（D7在≤-10℃冷冻培养板以表格形式总结数据，给出每个观察时间，处理组和对照组中每个重复亡率和中毒症状。以浓度对数为横坐标，以累积死亡百分率对应的概率单位为纵坐标，绘制每个暴露周期内的剂量-效应曲线，并选择适宜的统计方法和程序估算LD50及其95%置信区间。P--被试物处理组的死亡百分比（%数量，D5、D6和D7的死亡数（即分别为被试学方法（如概率单位法、移动平均、二项式概率等）分析死亡数据。在每个观察时间点绘制剂量11.1蜜蜂急性经口毒性和急性接b)参比物乐果对蜜蜂急性经口试验结果LD50(24h)内，乐果对蜜蜂急性接触试验结果LD50(24h)应在0.10μga.i./蜂～0.30μga.i./蜂范围之内。a)从第4天（D4）到第7天（D7），对照组b)到第7天（D7）、用参比物对照组中幼虫累积死亡率应＞52）收集试验用蜂的采集方法、采集日期、大概日龄（以周计算）、健康状况、饲养情况、3）试验给药方法，包括使用的载体溶剂、使用的试验溶液的体积、使用的麻醉方式4）试验设计，例如，所使用试验浓度和数量，对照组数量，各处理笼重复数以及每笼中蜜蜜蜂拒食情况）、处理组和对照组食物的消耗b）供试生物3）幼虫试验培养条件：温度（平均值、标准偏差、最大值和最小值）、相对湿度及试验方5）贮备液中被试物的配制浓度和实测浓度，实测浓度与配制浓度的偏B.1幼虫应在透明的聚苯乙烯材质的育王台基（内直径为8.8mm，深度为9.5mm）或聚丙烯材质的育王台基（内直径为8.5mm，深度为8.3mm）中饲养。育王台基在试验开始时进行杀菌，如可用酒精或其他杀菌溶液浸泡30min，取出后在通风橱中晾干，将育王台基每个格放置于48孔细胞培养板的一个小孔中。宜将一片牙科棉吸入加有150g/L甘油的杀菌液500μLB.2将这些培养板放入密封的有机玻璃干燥器。为保持干燥器中空气水分饱和，其中放一个盛有硫酸钾（K2SO4）饱和溶液的培养皿。将干燥器置于一个配有强制空气循环系统的培养箱中，试B.3蜜蜂幼虫毒性试验人工饲养单元孔构成见图B[1]OECD(1998a)Guideline213:Honeybees,acuteoralto