《医学微生物学》实验指导书

实验一显微镜油镜的使用及保护

细菌形态结构的观察

一、显微镜油镜的使用及保护

【目的要求】

学会显微镜油镜的使用和保护法；认识细菌的基本形态和特殊结构。

【材料】

显微镜、标本片、香柏油、擦镜纸、二甲苯。

【方法】

1、油镜头的识别：物镜的镜头下缘一般刻有一圈黑线、白线或蓝线，并刻有100x或oil等

字样。

2、对光：采用天然光为光源时，宜用平面反光镜；若用人工灯光源时，则用凹面镜。染色

标本油镜检查时.，应将显微镜亮度开关调至最亮，将光圈完全打开，集光器上升至载物台相

平，使射入透镜镜筒的光线最强。

3、将标本片放置载物台上，用标本推进器或玻片夹固定。

4、低倍镜找出标本的范围。

5、提高镜筒，在标本的待检部位滴镜油一滴，换油镜观察。转动粗调节器使载物台徐徐上

升，直至油镜头浸没至油中（此时眼睛应从侧面观察，以免压碎标本片和损坏镜头）。然后

双眼移至目镜，一面从目镜观察，一面反方向缓慢地转动粗调节器，当出现模糊物象时，换

用细调节器，转动至物象清晰为止。

6、观察完毕，取下标本片，立即用擦镜纸擦干净镜头上的油。若镜油己干，应先用二甲苯

滴在擦镜纸上擦净镜头，再用另一干净擦镜纸拭去镜头上沾有的二甲苯。

【显微镜油镜的保护】

1、显微镜是精密仪器，使用时切勿随意拆卸和碰撞。

2、避免接触强酸、强碱、强氧化剂及有机溶剂。避免直射日光，置于干燥处，以防受潮。

3、油镜头使用完结后，必须用擦镜纸滴加少量二甲苯将油擦洗干净。

4、不用时将物镜转成“八”字形，下降集光器，关上光圈，套上保护罩，双手平托显微

镜放入镜箱。

二、细菌的基本形态和特殊结构观察

（一）细菌的基本形态观察

球菌：葡萄球菌，革兰氏染色阳性，菌体正圆形，染成紫色，呈现葡萄串状排列。

杆菌：大肠杆菌，革兰氏染色阴性，菌体杆状，染成红色。

弧菌：霍乱弧菌，革兰氏染色阴性，菌体弧形，染成红色。

（二）细菌的特殊结构观察

荚膜：肺炎球菌，矛头状菌体，成双排列，经Hiss荚膜染色后，菌体与背景呈现紫色,

菌体周围有未染上颜色的空白区，即荚膜。

鞭毛：变形杆菌，菌体杆状，菌体四周可见到波浪状弯曲、较长的鞭毛。

芽胞：破伤风杆菌，菌体为细长杆状，顶端有大于菌体的球形芽胞。经芽胞染色后，菌

体为蓝色，芽胞为红色。

实验二革兰染色

【目的要求】

掌握革兰染色的原理、操作方法、结果和意义。

【原理】

由丹麦医师Gram1884年创立的这种染色法可将所有细菌分为两大类,是细菌学中使用

最为广泛的一种染色法。细菌先经碱性染料结晶紫染色，碘液媒染，酒精脱色，紫色不被脱

去的叫革兰阳性菌：紫色被脱去，染上复染染料的颜色，则叫革兰阴菌。

【材料】

1.葡萄球菌、大肠杆菌18~24小时普通琼脂斜面培养物。

2.革兰染色液。

3.生理盐水、载玻片、接种环等。

【方法】

（-）细菌涂抹标本的制备

1、涂片：取洁净的载玻片一张，加生理盐水一滴。接种环灭菌后，取细菌斜面培养物，

与生理盐水混合，并涂成一个直径约1厘米的菌膜。如为液体标本，取液体标本直接涂成一

个直径约1厘米的菌膜。

2、干燥：涂片最好在室温下自然干燥，必要时可将涂片膜面向上，在酒精灯火焰上方

微加温干燥。

3、固定：涂片干燥后，手持玻片一端（涂膜面向上）快速通过酒精灯火焰三次（约2~3

秒钟）。

（二）革兰染色法

染色方法：

①初染：在已固定的细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴，覆盖整个涂膜，染色Imin后用

细流水冲洗，甩干水分。

②媒染：滴加卢戈碘液数滴，染色Imin后用细流水冲洗，甩干水分。

③脱色：滴加95%酒精数滴，轻轻摇动玻片几秒钟，然后斜持玻片，使脱掉的染料随

酒精流去，再滴加酒精脱色，直到流下的酒精无色或稍淡紫色为止（约需30s）,立即用细

流水冲洗，甩干水分。

④复染：滴加稀释石炭酸复红液数滴，室温作用约30秒钟后用细流水冲洗，甩干水分。用

吸水纸吸干玻片水分，镜检。

【结果】

在油镜下观察，呈紫色的为革兰阳性菌，呈红色的为革兰阴性菌。

【附录】

革兰（Gram）染液的配制

①结晶紫染液：将14.0g结晶紫溶于100ml95%酒精中，制成结晶紫酒精饱和液。取1

份结晶紫酒精饱和液与4份1%草酸铉水溶液混匀即成结晶紫染液。

②碘液：将1.0g碘、2.0g碘化钾加于约2ml蒸储水中，轻轻振摇，待碘片完全溶解后，

再加蒸储水至总量为300ml。

③稀释石炭酸复红染液：取磴性复红4g溶于95%酒精100毫升中，配成碱性复红酒精

饱和液；取此饱和液1份与9份5%石炭酸水溶液混匀，配成石炭酸复红原液；取1份石炭

酸复红染液加9份蒸储水混匀，即成稀释石炭酸复红染液。

实验三培养基的制备及细菌的人工培养

【目的要求】

了解常用的液体、固体、半固体培养基的成分、制备方法和用途；初步学会琼脂平板培

养基分类培养技术，学会肉汤、固体斜面及半固体培养基的接种技术；观察细菌在培养基中

的生长现象，认识菌落，并了解其在分离培养中的意义。

一、常用培养基的制备

（一）普通肉汤培养基

【材料】

牛肉膏，蛋白陈，氯化钠，蒸储水等。

【方法】

1.称取牛肉膏3克加入1000毫升蒸镭水中加热溶解，即为肉浸液。

2.在1000毫升肉浸液中加入氯化钠5克、蛋白陈10克混合，加热溶解。

3.调整PH为7.6,用滤纸过滤，补足水分，再调一次pH值。

4.分装于三角烧瓶或试管内，瓶口、管口加棉塞并用纸包扎。

5.高压蒸汽灭菌后备用。

（-）普通琼脂培养基

【材料】

普通肉汤培养基、琼脂等。

【方法】

1.在普通肉汤培养基中加入2%-3%的琼脂，加热溶解，脱脂棉过滤，补足失水，调整PH为7.6。

2.分装三角烧瓶和试管。瓶口、管口加棉塞并用纸包扎。

3.高压蒸汽灭菌。三角烧瓶内培养基冷至50℃-60℃时倾注无菌于灭菌平皿内（15-20ml）,

凝固后即成琼脂平板。趁热将试管倾斜一定角度放置，冷凝后即成琼脂斜面培养基。

（三）半固体培养基

【材料】

普通肉汤培养基、琼脂等。

【方法】

L在普通肉汤培养基中加入0.3-0.5%的琼脂，加热溶解，脱脂棉过滤，调整PH为7.6。

2分装试管，灭菌后使试管直立，冷凝后即成半固体培养基。

（四）血液琼脂培养基

【材料】

普通琼脂培养基、脱纤维兔血或羊血等。

【方法】

1.将普通琼脂培养基高压蒸汽灭菌。

2.冷至50℃左右时加入5%~10%脱纤维兔血或羊血。

3.倾注无菌于灭菌平皿内，可制成血平板；分装无菌试管，可制成血斜面。

二、细菌的培养

（-）分区划线接种（分离培养法）

【材料】

白色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液，普通琼脂平板培养基，酒精灯，接种环等。

【方法】

1.用记号笔在平板底面上作好标记（如菌种、班级，姓名、接种日期等）。

2.右手持接种环，在酒精灯火焰上烧灼灭菌，待凉后，取混合菌液少许。

左手斜持琼脂平板，用大拇指和食指稍抬起皿盖，右手持已沾菌的接种环在平板上端来回划线,

涂成薄膜（约占平板总表面积的1/10）,接种环不应划破培养基表面。划线时接种环与琼脂平板表面

呈30。~40。角，以腕力在平板表面轻快地滑移，切忌划破琼脂。

3.接种环烧灼灭菌，待冷却后，通过薄膜处作连续平行划线（第一段划线），约占平板表面

1/4-1/5；再次烧灼接种环，待冷却后，通过第一段划线处作第二段划线；以同样方法作地三段划线、

第四段划线、第五段划线。

4.划线完毕，盖上平皿盖，将培养皿倒置放入37℃温箱培养18-24h观察结果。

图1区划线接种法

（二）液体培养基接种法

【材料】

大肠杆菌18~24小时斜面培养物，肉汤培养基，酒精灯，接种环等。

【方法】

1.左手持菌种管及待接种培养基管；右手无名指与小指、小指与手掌分别挟住两管的试管塞，

在火焰旁拔开并将试管口通过酒精灯火焰烧灼灭菌。

2.右手持接种环，灭菌后伸入菌种管取少量菌苔，再伸入肉汤管中在接近液面的管壁上轻轻

研磨并沾取少许肉汤调和，使菌混于培养基中。

3.试管口通过火焰灭菌，塞好试管塞，作好标记，置37℃温箱培养18-24h观察结果。接种

环须烧灼灭菌后方可放回。

（三）半固体培养基接种法

【材料】

大肠杆菌18~24小时斜面培养物，半固体培养基，酒精灯，接种针等。

【方法】

I.左手持菌种管及待接种培养基管；右手无名指与小指、小指与手掌分别挟住两管的试管塞，

在火焰旁拔开并将试管口通过酒精灯火焰烧灼灭菌。

2.右手持接种针，灭菌后伸入菌种管取少量菌苔，垂直插入半固体培养基中央至接近管底处,

然后沿原穿刺线抽出。

3.试管口通过火焰灭菌，塞好试管塞，作好标记，置37℃温箱培养18-24h观察结果。接种针须

烧灼灭菌后方可放回。

（四）斜面培养基接种法

【材料】

大肠杆菌18~24小时斜面培养物，普通琼脂斜面培养基，酒精灯，接种环等。

【方法】

1.左手持菌种管及待接种培养基管；右手无名指与小指、小指与手掌分别挟住两管的试管塞，

在火焰旁拔开并将试管口通过酒精灯火焰烧灼灭菌。

2.右手持接种环，灭菌后伸入菌种管取少量菌苔，再伸入培养基管中，自斜面底向上轻轻来

回作蜿蜒划线。

3.试管口通过火焰灭菌，塞好试管塞，作好标记，置370c温箱培养18-24h观察结果。接种

环须烧灼灭菌后方可放回。

实验四细菌的生化反应

【目的要求】

了解细菌糖分解；硫化氢、靛基质的产生；枸椽酸盐利用；尿素分解；VP试验、甲基红

试验等生化反应的试验方法。初步掌握细菌各种新陈代谢产物的实际意义。

【原理】

由于不同细菌所含的酶系统不完全相同，因而对营养物质的分解能力亦不一致，其代谢

产物也不一样。通过生化试验方法检测细菌的代谢产物来鉴别细菌的种类，称为细菌的生化

反应，是鉴定细菌的重要方法之一。

一、糖发酵试验

不同细菌分解利用糖（醇）的能力有很大差异，分解后代谢产物亦不同。单糖发酵试验

是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白陈水培养基内，使其最终浓度为0.75~1%,并加

入一定量指示剂，制成单糖发酵管。接种细菌经37c培养18~24小时，若细菌能分解糖产酸

则培养基中指示剂呈酸性反应；若能产气，则出现气泡或裂隙；若细菌不分解糖类，则指示

剂不变色。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、伤寒沙门菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管等单糖发酵管。

【方法】

1.将大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种葡萄糖发酵管、乳糖发酵管等单糖发酵管内。

2.置37℃温箱培养18~24小时。

［结果］

首先确定有无细菌生长，有细菌生长则培养基变混浊。再确定细菌对糖类分解情况，若

发酵糖类产酸，则培养基中指示剂（漠甲酚紫）变成黄色，用表示；若发酵糖类既产酸

又产气，则培养基除变色外，还可见到气泡，用叫”表示：若细菌不分解该糖，则指示剂不

变色，培养基仍为紫色，用“一”表示。

二、IMViC试验

吗I跺试验（I）、甲基红试验（M）、VP试验、枸椽酸盐利用试验（C）合称为IMViC

试验，常用于鉴别肠杆菌科各个菌属，特别是大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。

（-）吧咻（靛基质）试验

某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白陈水培养基中的色氨酸，产生口引躲（靛基质），”引噪本

身无色，但可与靛基质试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应，形成玫瑰吧味，呈玫瑰红色。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：蛋白陈水培养基。

3.试剂：柯氏试剂（对二甲基氨基苯甲醛）

【方法】

1.分别将大肠埃希菌、产气杆菌接种于两支富含色氨酸的蛋白陈水培养基中。

2.置37℃温箱培养24~48h。

3.每管沿管壁徐徐加2〜3滴柯氏试剂于培养液面上。

【结果】

在交界面出现玫瑰红色为呵跺试验阳性，记录为若不出现红色即为阴性，记录为

“，，

-O

（二）甲基红试验

某些细菌（如大肠杆菌）分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可继续被分解产生乳酸、甲酸、

乙酸等，使培养基pH降至4.5以下，使甲基红指示剂呈红色。而有些细菌（如产气肠杆菌）

分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为醇、酮、酮等，培养基的PH值在5.4以上，

甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：葡萄糖蛋白陈水培养基。

【方法】

1.分别将大肠埃希菌、产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白陈水培养基中。

2.置37℃温箱培养48~72h。

3.每管滴加甲基红指示齐U2〜3滴。

【结果】

呈现红色者为口引跺试验阳性，记录为“+”；黄色者为阴性，记录为“-”。

（三）VP试验

某些细菌（如产气杆菌）能将分解葡萄糖产生的丙酮酸脱峻生成中性的乙酰甲基甲醇，

乙酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基内的脏基化合物反应生成红色

化合物，为VP试验阳性。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：葡萄糖蛋白陈水培养基。

3.试剂：40%KOH溶液（内含0.3%肌酸），6%a-奈酚乙醉溶液（促进反应）。

【方法】

1.分别将大肠埃希菌、产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白陈水培养基中。

2.置37℃温箱培养48h。

3.每管加入6%a-蔡酚乙醇溶液1ml,再加入40%KOH溶液0.4mL摇匀，静置5~15min。

【结果】

培养液变为红色者为阳性，记录为不变色者为阴性，记录为

（四）枸檬酸盐利用试验

枸椽酸盐培养基中枸椽酸钠为唯一碳源，磷酸二氢钱为唯一氮源。当细菌能利用钱盐作

为唯一氮源，并能利用枸椽酸盐作为唯一碳源时，则可在此培养基上生长，分解分解枸椽酸

盐生成碳酸盐，并分解铁盐产生氨，使培养基变碱，培养基中的指示剂溟麝香草酚蓝由绿色

变为深蓝色，为枸檬酸盐利用试验阳性；若细菌不能利用枸掾酸盐作为唯一碳源时，培养基

颜色不发生变化，为枸椽酸盐利用试验阴性。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：枸椽酸盐斜面培养基。

【方法】

1.分别将大肠埃希菌、产气杆菌接种于两支枸椽酸盐斜面培养基。

2.置37℃温箱培养18〜24h。

［结果］

培养基斜面上有细菌生长，且培养基变深蓝色为阳性，记录为“+”；无细菌生长，培养

基颜色不变为阴性，记录为

三、尿素分解试验

某些细菌具有尿素分解酶，能分解培养基中的尿素产生氨，使培养基变碱，培养基中的

酚红指示剂呈红色。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、普通变形杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：尿素培养基。

【方法】

分别将大肠埃希菌、普通变形杆菌接种于两支尿素培养基中，置370c温箱培养18〜24h。

【结果】

培养基变为红色，即为尿素分解试验阳性，记录为“+”；若不变色，即为尿素分解试验

阴性，记录为

四、H2s试验

某些细菌（如变形杆菌）能分解培养基中的胱氨酸、半胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化

氢。硫化氢遇铅离子或铁离子形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。

【材料】

1.菌种：大肠埃希菌、普通变形杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2.培养基：醋酸铅培养基。

【方法】

1.分别将大肠埃希菌、普通变形杆菌穿刺接种于醋酸铅培养基中。

2.置37℃温箱培养24-48h。

【结果】

沿穿刺线部位有黑褐色沉淀物为阳性，记录为无黑色出现为阴性，记录为

五、触酶试验

触酶试验亦称过氧化氢酶试验，某些细菌具有触酶（过氧化氢酶），能催化过氧化氢分

解生成水和初生态氧，继而形成分子氧出现气泡。

【材料】

1.菌种：葡萄球菌、链球菌18~24小时血琼脂平板培养物。

2.试剂：3%过氧化氢溶液。

【方法】

1.用接种环挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上。

2.滴加3%过氧化氢溶液数滴，30s内观察结果。

【结果】

有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。

【注意事项】

1.3%比。2溶液要新鲜配制。

2.红细胞含有触酶，可致假阳性反应，但大多数葡萄球菌、链球菌均自含血培养基分离，

故在挑取试验菌落时应取顶部，避免接触血液部分。

3.应取对数生长期的细菌。

六、氧化酶试验

某些细菌，具有氧化酶，能将无色的氧化酶试剂（盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对

苯二胺）氧化成有色的醍类化合物，出现颜色反应。

【材料】

1.菌种：铜绿假单胞菌、大肠埃希菌18-24小时琼脂脂斜面培养物。

2.培养基：琼脂平板培养基。

3.试剂：氧化酶试剂（1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺）。

【方法】

1.分别将铜绿假单胞菌、大肠埃希菌接种于两个巧克力琼脂平板培养基。

2.置37℃温箱培养24h。

［结果］

力口2-3滴新鲜配制的氧化酶试剂于固体培养基中生长的菌落上，菌落在与试剂接触10s内

呈深紫色者为阳性，无色者为阴性。

【附录】

1.蛋白陈水培养基的制备蛋白陈10g、氯化钠5g溶于1000ml蒸储水中，调节pH至7.6,用滤

纸过滤，分装小试管，每管约3ml,灭菌后备用。

2.单糖发酵管的制备在100mlpH7.6蛋白腺水培养基中加入1.6%浪甲酚紫乙醇溶液0.1ml、

葡萄糖0.75-lg（或其他糖0.75-lg）,混匀后分装于内置有玻璃小倒管的小试管中，每管约

3ml（也可用半固体培养基，半固体培养基琼脂含量为0.2%-0.4%）,8-10磅、20-30min灭菌

后备用。

3.柯氏试剂的配制将对二甲基氨基苯甲醛5g、戊醵（或丁醇）75mk浓盐酸25ml混合均

匀即成。

4.葡萄糖蛋白陈水培养基的制备将蛋白陈5g、葡萄糖5g、磷酸氢二钾5g溶于1000ml蒸储水

中，调节pH至7.6,用滤纸过滤，分装小试管，每管约3-4mL灭菌后备用。供甲基红试验及

V-P试验用。

5.甲基红试剂的配制将甲基红0.02g研磨溶解于60ml95%乙醇中，再加入蒸储水40mL混

合，摇匀即成。

6.枸椽酸盐斜面培养基的制备将磷酸二氢核0.1g、磷酸氢二钾0.1g、硫酸镁0.02g、枸椽酸

钠0.23g、氯化钠0.5g溶于蒸储水100ml中，矫正pH至6.8。再加入琼脂2g,加热溶化。加入0.5%

漠麝香草酚蓝酒精溶液2ml,摇匀。脱脂棉过滤，分装试管，每管约3-5ml,灭菌后置成斜面

备用。

7.尿素培养基的制备葡萄糖1g、蛋白陈1g、氯化钠5g、磷酸二氢钾2g溶于900ml蒸储水中，

矫正pH至7.2；加入琼脂15~20g、0.6%酚红水溶液2ml,8磅20min灭菌；冷却至60℃时加入

20%无菌尿素水溶液100ml,摇匀；分装无菌试管，每管2~3mL置成斜面备用。

8.醋酸铅培养基的制备取2%肉汤琼脂培养基100ml加热溶化，加入硫代硫酸钠0.25g,混

合，矫正pH至7.2,高压灭菌，待冷却至50℃左右时，无菌操作加入无菌的10%醋酸铅溶液

1ml,摇匀，分装于无菌小试管，每管约2mL直立待冷凝后备用。

实验五细菌的分布

【目的要求】

证明在自然界中和正常人体有细菌存在，为在医学实践中树立严格的“无菌观念”提供依

据。人体体表的皮肤和黏膜以及和外界相通的腔道有正常寄生菌，正常情况下不引起疾病，只有当

机体抵抗力降低，或寄生部位改变或细菌之间的平衡关系遭到破坏时，才有可能引起疾病。

一、空气中细菌的检查：

【材料】

普通琼脂平板培养基。

【方法】

取无菌普通琼脂平板一只，打开皿盖，让培养基直接暴露于空气中，15~30分钟后盖好，

用记号笔作好标记（注明放置地点、实验日期和实验者班级、姓名等），置37℃温箱培养

18-24h,计数生长菌落数目，并计算每立方米空气中的细菌数。

二、水中细菌的检查

【材料】

普通琼脂培养基、水样、无菌吸管、无菌平皿

【方法】

1.用无菌吸管吸取1.0ml水样，放入无菌平皿中（根据水样的污染程度可用无菌生理盐水做适

当稀释）。

2.将已溶化并冷至45℃的普通琼脂培养基倾注于平皿，立即在桌上轻轻摇动，使琼脂培养基与

水样均匀混合。

3.待琼脂凝固后，记号笔作好标记，置37℃温箱培养18-24h,计数生长菌落数目，并计算出水

样中的细菌总数。

三、皮肤细菌的检查

【材料】

普通琼脂平板

【方法】

1.取普通琼脂平板一只，用蜡笔在皿底玻璃上划分2个区，分别注明消毒前、消毒后等字样。

2.用手指在注明“消毒前”处琼脂上轻轻涂抹。

3.用棉签沾取消毒剂消毒手指，，然后在注明“消毒后”处琼脂上轻轻涂抹。

4.盖好平皿，置370c温箱内37℃温箱培养18-24h后，观察结果。

实验六外界因素对细菌的影响

【目的要求】

初步掌握高压蒸汽灭菌器的使用方法及注意事项。

证实煮沸消毒方法和紫外线杀菌的效果，并了解影响其效果的原因。

了解常用消毒剂的抑菌作用和皮肤消毒效果。

一、物理因素对细菌的影响

（-）高压蒸汽灭菌法

高压蒸汽灭菌在高压蒸汽灭菌器内进行。高压蒸汽灭菌的一般步骤是：

1.加适量水至高压蒸汽灭菌器内。

2.将待灭菌物品放至高压蒸汽灭菌器内，盖好锅盖，拧紧旋纽。

3.力口热。

4.观察压力表，待压力升至5磅时，打开放气阀，排出锅内冷空气。

5.关闭放气阀，继续加热至压力表指在所需数字，调节热源，维持所需时间。

6.到达预定时间后，停止加热，待压力表指针下降至“0”时，方可打开锅盖取物。

【注意事项】

1.使用时应注意检查排气活塞机安全阀门，特别是压力表的性能是否正常，以免发生危险。

2.灭菌物品不应放置过挤，妨碍蒸汽流通，影响灭菌效果。

3.灭菌开始时，必须将高压锅内冷空气排除，否则压力表上所示压力并非全部是蒸汽压力，

灭菌将不彻底。

（-）干烤

干烤在干烤箱内进行.干烤的一般步骤是：

1.将待灭菌物品放至箱内。

2.闭门，加热到箱内温度上升至160℃〜170C时，保持2小时。

3.停止加热，待箱内温度下降到40℃以下时，方可开门取物。

【注意事项】

挥发性液体和培养基不能用于干烤箱灭菌。

（三）煮沸消毒法

【材料】

大肠杆菌肉汤培养物、枯草杆菌肉汤培养物、肉汤培养基、温度计、烧杯等。

【方法】

1.将大肠杆菌接种于接种2管肉汤培养基管中，将枯草杆菌种于另外2管肉汤培养基管中。

2.取已接种有大肠杆菌、枯草杆菌的肉汤培养基管各1管放入盛有热水之烧杯中，加热至沸

点，煮沸5min取出，放冷水冷却，并作好标记。另外2管接种有细菌的肉汤培养基管不加

热，作为对照。

3.将加热组、对照组肉汤培养基管置37℃温箱中培养18〜24h,观察结果。

（四）紫外线的杀菌试验

【原理】

波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。其中260~266nm波长UV与DNA吸收光谱一致。

其主要作用于DNA,使一条DNA链上相邻的两个胸腺喀咤共价结合形成二聚体，干扰DNA

复制与转录，导致细菌变异和死亡，并可杀灭病毒。

【材料】

大肠杆菌18~24h琼脂斜面培养物、枯草杆菌24~248h琼脂斜面培养物、普通琼脂平板、中央有

孔的黑纸片、紫外线灯等

【方法】

1.取普通琼脂平板一只，用蜡笔在皿底玻璃上划分2个区，分别注明大肠杆菌、枯草杆菌等字

样。

2.用接种环取大肠杆菌琼脂斜面培养物，在标记有大肠杆菌一侧的普通琼脂平板培养基表面密

密划线。同样，在标记有枯草杆菌一侧的普通琼脂平板培养基表面密密划线接种枯草杆菌。

3.打开平皿盖，取无菌黑纸片一片盖于涂有细菌的平板培养基表面。

4.将平板置于距紫外灯管30~50cm处，打开紫外线灯照射30分钟。

5.取下黑纸片，投入消毒液中，盖上皿盖，做标记。

6.置37℃温箱中培养18〜24h,观察结果。

二、化学消毒剂的抑菌试验

【材料】

葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物、普通琼脂平板、0.1新洁尔灭、2.5%碘酒、1%龙胆紫、2%

红汞、直径0.6cm无菌圆形滤纸片、小镜子、接种环等。

【方法】

1.将琼脂平板分为四等分，并在平皿底部做相应标记。

2.用接种环取葡萄球菌琼脂斜面培养物，均匀涂满整个琼脂培养基表面。

3.用小镒子夹取无菌滤纸片，分别蘸取上述消毒剂，轻轻贴于培养基表面做标记的相应分区。

4.置37℃温箱中培养18〜24h,观察结果。滤纸片周围无细菌生长的区域，称为抑菌圈，以毫

米为单位测量每种消毒剂滤纸片周围抑菌圈的直径大小，判断接种的细菌对这种消毒剂的敏感程

度。【结果】

观察并记录结果

三、细菌的药物敏感试验

【材料】

葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物、普通琼脂平板、含抗生素的纸片、小镜子、接种环等。

【方法】

1.将琼脂平板分为四等分，并在平皿底部做相应标记。

2.用接种环取葡萄球菌琼脂斜面培养物，均匀涂满整个琼脂培养基表面。

3.用小镶子分别夹取含抗生素的滤纸片轻轻贴于培养基表面做标记的相应分区。

4.置37℃温箱中培养18〜24h,以毫米为单位测量每种消毒剂滤纸片周围抑菌圈的直径大小，判

断接种的细菌对这种抗生素的敏感程度。

【结果】

观察并记录结果

四、中草药的抗菌作用

(―)小沟法

【材料】

待检菌18~24h琼脂斜面培养物、琼脂平板培养基、无菌吸管、中药液、接种环、小刀等。

【方法】

1.取普通琼脂平板一只，在平皿底部注明待检菌名称、中药名称等标记。

2.用无菌小刀在培养基中部切一长50〜70mm、宽7〜10mm的长条，然后挖去长条琼脂，形成一

条小沟。

3.沿着与小沟垂直的方向接种3种或4种细菌，不同细菌接种线的间距在10mm以上。

4.以无菌吸管吸取一种中药液，加入小沟中。

5.将置37℃温箱中培养18〜24h,观察结果。

［结果］

小沟两侧接种线上无细菌生长的区域为抑菌带。抑菌带越长，说明接种的细菌对沟中的中药

越敏感。

(-)打孔法

【材料】

葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物、琼脂平板培养基、无菌吸管、中药液、接种环等。

【方法】

1.将琼脂平板分为四等分，并在平皿底部做相应标记。

2.用接种环取葡萄球菌琼脂斜面培养物，均匀涂满整个琼脂培养基表面。

3.用打孔器在培养基上做标记的相应位置打孔，将孔内琼脂吸出。

4.以无菌吸管吸取一种中药液，加入孔中。

5.置37℃温箱中培养18〜24h,观察结果。

【结果】

观察有无抑菌圈及大小，做好记录。

实验七细菌的变异

【目的要求】

观察细菌的变异现象，认识其在诊断、预防和治疗中的意义。

一、形态变异

【材料】

鼠疫杆菌18~24h普通琼脂斜面培养物、鼠疫杆菌3%~6%琼脂斜面培养物、革兰染色液等。

【方法】

分别取上述两种不同培养基上的鼠疫杆菌，各做一张涂片，经革兰染色后镜检，比较其形态。

【结果】

镜检，试验细菌呈多形态；作对照的鼠疫杆菌为短小杆菌。

二、鞭毛变异

【材料】

普通变形杆菌18〜24h琼脂斜面培养物、普通琼脂平板、0.1%石炭酸琼脂平板。

【方法】

1.取变形杆菌分别在点种普通琼脂平板和0.1%石炭酸琼脂平板上，切勿将细菌划开。

2.置37℃温箱中培养24h,观察菌落特点。

【结果】

变形杆菌在普通平板上迁徙生长，在0.1%石炭酸平板上无迁徙现象。

实验八细菌的致病性

【目的要求】

了解肺炎球菌对小鼠的致病作用。

观察透明质酸酶家兔皮内接种的扩散作用。

了解细菌外毒素对小白鼠的致病作用。

了解内毒素的致病作用及测定。

一、荚膜的致病作用

【材料】

重量为20g左右的健康小白鼠2只、有荚膜及无荚膜的肺炎球菌菌液、注射器、针头、碘酒等。

【方法】

1.将有荚膜及无英膜的肺炎球菌液各0.1ml分别注射2只小鼠腹腔。

2.将2只小鼠分别标记，分罐饲养，并逐日观察发病情况。

【结果】

如发现动物死亡，及时进行解剖，取腹腔液及心血做涂片，革兰染色及荚膜染色后镜检。

二、透明质酸酶试验

【材料】

家兔、乙型溶血性链球菌24小时肉汤培养物滤液、生理盐水、注射器、针头、苔盼蓝、吸管等。

【方法】

1.取家兔一只，将背部两侧毛剪去，用酒精棉球消毒。

2.取乙型溶血性链球菌24小时肉汤培养物滤液0.5ml加入盛有一滴苔盼蓝的小试管内，混匀；

同样，取生理盐水0.5mL加入盛有一滴苔盼蓝的小试管内，混匀。

3.于家兔背部一侧皮内注射乙型溶血性链球菌滤液与苔盼蓝的混合液0.1ml；另一侧皮内注射生

理盐水与苔盼蓝的混合液0.1ml。

［结果］

注射后1小时观察结果，比较两侧蓝色扩散范围的大小并作记录。

三、血浆凝固酶试验

【材料】

金黄色葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物、白色葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物、兔血浆、载玻

片、生理盐水等。

【方法】

1.取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，两端各加兔血浆1滴。

2.用接种环取金黄色葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物、白色葡萄球菌18~24h琼脂斜面培养物分

别在两端血浆中混匀。

【结果】

5min内观察结果，若有凝块出现，即为阳性。

四、细菌外毒素的毒性作用及抗毒素的中和作用

【材料】

破伤风外毒素、破伤风抗毒素、小白鼠、注射器等。

【方法】

1.取小白鼠2只，其中1只小白鼠腹腔注射破伤风抗毒素0.2ml,30min后在右侧后腿

肌肉注射破伤风外毒素0.2ml；另1只小白鼠只在右侧后腿肌肉注射破伤风外毒素0.2ml。

2.做好标记，2只小鼠分置2个鼠笼内

【结果】

逐日观察并记录发病情况。

五、内毒素的致热作用

【材料】

家兔、经高压蒸汽灭菌并反复冻溶3次的伤寒杆菌培养液、体温计、注射器、针头等。

【方法】

1.用体温计测家兔体温。

2.耳静脉注射伤寒杆菌培养液0.5〜1.0mlo

3.注射后30min、60min分别测体温，观察是否较前升高。

实验九病原性球菌

【目的要求】

常见的病原性球菌，根据革兰氏染色特性不同，可分为革兰氏阳性的葡萄球菌、链球菌、

肺炎球菌及革兰氏阴性的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。这类球菌能引起人类化脓性感染，

故又名化脓性球菌。这些细菌在形态、排列、菌落特点及营养要求上各不相同，可作为鉴别

依据。但仅据形态、培养特性有时难以确定它们的致病性或耐药性，故还必须做特殊试验来

鉴定。

一、病原性球菌的形态观察

【材料】

葡萄球菌、链球菌革兰染色、肺炎球菌荚膜染色、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌革兰染色

示教片。

【方法】

镜下观察葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的染色示教片，注

意它们的染色特性、形态和排列，并注意观察脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌在中性粒细胞内外

的情况和肺炎球菌的荚膜。

【结果】

葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌均为革兰氏阳性染色。注意观察其形态及排列特点；肺炎

球菌菌体外可见荚膜。脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌均为革兰阴性、注意其在中性粒细胞内、

外的存在形式。

二、病原性球菌在血平板上的菌落特点

【材料】

金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、甲（a）型溶血型链球菌、乙（B）

型溶血型链球菌、肺炎链球菌在血琼脂平板上37624h培养物。

【方法】

菌落特性观察：观察金黄色、表皮及腐生葡萄球菌在血琼脂平板上的菌落特征，重点观

察菌落的颜色及溶血性。观察甲型、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌在血琼脂平板上的菌落

特征，重点观察溶血性。

【结果】

观察并记录三种葡萄球菌在血琼脂平板上菌落特点、色素、溶血圈。

观察并记录链球菌的菌落特点、溶血圈；肺炎链球菌菌落与甲链菌落的区别（延长培养

时间后，肺炎球菌菌落中心凹陷呈“脐状”）。

三、病原性球菌分离鉴定步骤

【材料】

1.标本：本次试验用脓汁棉拭子。

2.培养基：血琼脂平板等。

3.其他材料：兔（或人）血浆、生理盐水、载玻片等。

【方法】

（一）标本采集

1.一般以无菌棉拭子采集脓汁或病灶分泌物。

2.深部脓肿，用碘酒、酒精棉球消毒局部皮肤，用无菌注射器抽取深部脓汁或外科手

术切开后，以无菌棉拭子取之。

3.标本取得后，如不能立即送检，应置冰箱保存，以免杂菌污染。

4.若做血液培养，最好在发热时，抗菌药物治疗之前采取血液，此时培养阳性率最高,

取静脉血3〜5ml,立即以无菌手法注入30〜50ml葡萄糖酚红肉汤增菌培养基中（使血

与培养基之比约等于1:10）。

（二）病原性球菌一般检验程序，见表lo

表1病原性球菌检验的一般程序

【结果】

根据表1鉴定出细菌名称，必要时进一步进行生化反应鉴定。

四、葡萄球菌血浆凝固酶试验（玻片法）

【目的要求】

了解血浆凝固醐试验的操作方法及其在葡萄球菌致病性判定上的意义。

金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋

白，附着于细菌的表面，在玻片上形成凝块，故具有抗吞噬作用；而非致病性葡萄球菌不产

生血浆凝固酶，因而不能使血浆凝集。

【材料】

1.金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌24h斜面培养物。

2.家兔（或人）血浆、生理盐水、载玻片等。

【方法】

1.取一洁净的玻片，用蜡笔上下左右划分1、2、3、4四个区域（如图2）。

2.取未稀释的新鲜兔血浆或人血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上下各两个区域

内（如图2）。

3.分别挑取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌少许，分别与血浆和生理盐水混合（如图

2示）立即观察结果（注：此法测定的为结合凝固酶）。

图2血浆凝固酶试验

【结果】

第1区域内金黄色葡萄球菌在血浆中聚集成块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性；第

3区域内细菌在生理盐水中无凝集。第2区域内表皮葡萄球菌在血浆中呈均匀混浊，则为血

浆凝固酶试验阴性：第4区域内细菌在生理盐水中无凝集。

五、抗链球菌溶血素“0”试验（AS0）

【目的要求】

掌握AS0试验的原理及其临床意义。

A群溶血性链球菌产生的溶血素“0"（SL0）具有很强的抗原性，机体感染该菌2〜3周

后，85%〜90%的患者血清中可出现相应溶血素“0”抗体，称“AS0”。将链球菌溶血素“0”

与竣化聚苯乙烯胶乳共价交联制成胶乳抗原，此抗原与患者血清中抗溶血素“0”抗体相遇

时，即可发生特异性结合，间接导致溶血素“0”胶乳颗粒出现肉眼可见的凝集。

由于正常人血清中均含有低滴度的抗“0”抗体，因此被测血清应先加入定量的溶血素

“0”中和正常水平的抗体，以排除对结果的影响。

【材料】

1.待检病人血清。

2.生理盐水，抗“0”胶乳试剂。

3.黑色反应板、牙签等。

【方法】胶乳法

1.病人血清经56℃水浴30min灭活后，用生理盐水稀释成1：50、1：80、1：100三

种浓度。

2.在反应板各孔中分别滴加上述稀释后血清各一滴、阳性及阴性对照血清各1滴（约

50U1）。

3.再在上述各血清中各滴加溶血素“0”1滴，用牙签搅匀并轻轻摇动2min,使其混匀，

均匀分布于各孔内。

1.分别向各孔内再加入溶血素“0”胶乳试剂各1滴，搅匀并轻摇8min（指室温18〜20℃

时，如室温升高10℃,反应时间缩短2min,反之，则反应时间延长2min）后，观察结

果。肉眼观察出现明显凝集者为阳性，不凝集者为阴性，效价判断见表1。

表1AS0效价判断

血清稀释度凝集现象抗“0”效价

1：50弱阳性=333

强阳性>500

1：80弱阳性=625

强阳性>833

1：100阳性>1000

【结果】

按照表1判断实验用血清的ASO效价。

【注意事项】

1.搅匀时牙签不能混用，以免造成误差。

2.所使用的滴管口径大小应一致，以保证滴液量的一致。

3.严格掌握时间，当加入ASO胶乳后，轻摇至规定的时间应立即记录结果，超时才出

现的凝集者不列为阳性。

4.溶血、高脂血症、高胆红素血症、高胆固醇血症、类风湿因子阳性及被细菌污染的

标本都会影响试验结果。

5.胶乳试剂不可冻存，宜存放在4℃冰箱中，有效期为1年，用前应摇匀。

实验十肠道杆菌

肠道杆菌种属很多，但对人有致病作用的主要有大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌等属。肠

道杆菌是一群菌体形态相似，革兰氏染色阴性，大多数有鞭毛能运动，在普通培养基上生长

良好，菌落性状往往难以分辨的杆菌，但其培养、生化反应特性、抗原构造及其毒力等方面

各具特点，借此，可将它们分类、鉴定。

一、肠道未知标本分离鉴定步骤

【目的要求】

熟悉肠道杆菌未知标本分离和鉴定程序及方法。

【材料】

1.患者新鲜粪便标本或血液标本或尿胆汁标本或骨髓标本。

2.中国蓝、SS琼脂平板培养基。

3.双糖铁培养基、半固体培养基。

4.沙门氏菌诊断血清、痢疾杆菌诊断血清、生理盐水、玻片等。

【方法】见表2。

表2肠道致病菌一般检查步骤

二、主要肠道杆菌在中国蓝、SS琼脂、麦康凯平板上的菌落特点

【目的要求】

掌握大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌的培养特性，在中国蓝、SS琼脂、麦康凯平板上

的菌落特点。

【材料】

大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在中国蓝、SS琼脂、麦康凯平板上培养18〜24h的菌

落。

【方法】

观察大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在中国蓝、SS培养基、麦康凯培养基的菌落特点，

注意其颜色、大小、透明度、光滑度等。

【结果】

大肠杆菌在中国蓝琼脂平板上由于本菌分解乳糖产酸则形成凸起的、大而混浊的蓝色菌

落。肠道致病菌（沙门菌属、志贺菌属）在中国蓝琼脂平板上由于不分解乳糖，形成透明、

淡红色的菌落。

大肠杆菌在SS琼脂平板上因分解乳糖，形成红色的、圆形、凸起、边缘整齐的菌落，

多为光滑型菌落。肠道致病菌（沙门菌属、志贺菌属）在SS琼脂平板上由于不分解乳糖则

形成无色透明、中等大小的菌落。

大肠杆菌在麦康凯琼脂平板上形成红色、中等大小的菌落。肠道致病菌（沙门菌属、志

贺菌属）在麦康凯琼脂平板上由于不分解乳糖则形成无色透明、中等大小、光滑型的菌落。

三、大肠埃希氏菌、伤寒沙门菌、志贺菌主要生化反应的观察

【目的要求】

了解肠道杆菌的生化反应及其在鉴定上的意义。

【材料】

大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在克氏双糖铁（KIA）培养基中经35c孵育18〜24h的

生长管。

【方法】

观察大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在克氏双糖铁培养基中的生长表现。注意它们在双

糖铁培养基的斜面层及下层中有无颜色反应及有无裂隙产生：并注意观察下层穿刺线是否清

晰（有无动力）。

【结果】

双糖铁培养基斜面层变黄者，表示细菌已分解乳糖，斜面层不变色或呈橙红色的，表示

乳糖没有被分解；双糖铁培养基下层变黄者，说明葡萄已被分解产酸，下层有裂隙或气泡者，

表示又产生气体；下层或/斜面层变黑色者为产生压S反应；下层穿刺线清晰，说明细菌无

动力、反之，则动力阳性。大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在克氏双糖铁铁培养基的斜面层

及下层的结果见表3。

表3大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在克氏双糖铁培养基的表现

克氏双糖铁培养基

葡萄糖乳糖H2s动力

大肠杆菌©©/+-+

痢疾杆菌+--

伤寒杆菌+一++

注：“0”表示分解糖，产酸、产气；表示分解糖，只产酸，不产气;

表示不分解。

四、肥达反应

【目的要求】

1.掌握肥达试验的原理、操作方法、结果判断与分析。

2.熟悉肥达试验的的临床意义。

【原理】

肥达试验（Widaltest）就是用已知的伤寒、副伤寒沙门菌的"0”和“H”抗原，检测

受检血清中有无相应的抗体的半定量试管内凝集试验。人体感染伤寒或副伤寒沙门菌后，能

产生与这些细菌起特异性反应的抗体（凝集素），这种抗体与伤寒或副伤寒沙门菌相混合，

在适当电解质参与下出现肉眼可见的凝集现象。本试验是用伤寒杆菌“0”和“H”抗原及甲、

乙型副伤寒“H”抗原（以PA、PB表示）与不同稀释倍数的患者血清作试管凝集试验。

【材料】

1.抗原：伤寒杆菌“0”、“H”及甲、乙型副伤寒菌液。

2.患者血清（须经56℃30min灭活）。

3.生理盐水、小试管、吸管、水浴箱等。

【方法】

单管稀释法

1.准备28支小试管，排成4排，每排7支。

2.取中号试管1支，加生理盐水3.8ml,用吸管吸取患者血清0.2ml加入其中混匀，

即为1：20稀释血清，总量为4ml。

3.吸取1：20稀释的血清2ml,在每排的第一管中各加入0.5ml。（这时中号试管中还

剩1：20稀释血清2ml）。

4.再向上述中号试管中加入2ml生理盐水，混匀，即为1:40稀释血清，总量为4ml。

然后吸取此稀释度血清2ml向每排第二管各加0.5mlo

5.以此类推将血清不断作倍比稀释，并依次加入各管，直至每排的第六管为止.

6.在各排的第7管中各加0.5ml生理盐水，作阴性对照。

7.在第一排的各管中加伤寒杆菌“0”菌液0.5ml；在第二排的各管中加伤寒杆菌“H”

菌液0.5ml；在第三排的各管中加PA“H”菌液0.5mi；在第四排的各管中加PB“H”菌

液0.5ml。由于各管均加入0.5ml菌液，即又被稀释了一倍，所以每排各管中血清的最终稀

释度发生了变化。见表4。

表4肥达反应稀释法示意表

试验管（每管0.5ml）对照管

1号管2号管3号管4号管5号管6号管7号管

1:201:401:801:1601:3201:640"50.血）第小非'*0"

嬲0.50.50.50.50.50.50.5

百用”腌0.50.50.50.50.50.50.5

相FPA㈱0.50.50.50.50.50.50.5

第哪PB嬲0.50.50.50.50.50.50.5

血清最终稀释度1:401:801:1601:3201:6401:1280-

8.将各管振荡混匀片刻，置56℃水浴箱中2h或37℃水浴箱4h,取出置室温或冰箱中过

夜，次日观察、判断并分析和记录结果。

【结果】

（-）结果的观察和判断

观察时在斜射光线下透视，观察试管中悬液的混浊程度及管底凝块的多少。先观察对照

管，再分别观察各试验管的凝集情况，并与对照管相比较。根据混浊程度及管底凝块的多少，

以，，++++，，、，，+++”，，++”，，+”符号记录。

++++:上清液完全澄清，细菌凝集块全部沉于管底。

+++：上清液澄清度达75%,大部分细菌凝集块沉于管底。

++：上清液澄清度达50弱，约50%细菌凝集块沉于管底。

+：上清液混浊，澄清度仅有25%,管底仅有部分细菌凝集成块沉于管底。

-：液体均匀混浊，无凝集块。

血清的凝集效价（即滴度）是指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（即“++”

凝集）的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的

量愈多。一般认为，伤寒沙门菌“0”抗体凝集效价在1：80以上，“H”抗体在1：160以上,

甲、乙型副伤寒沙门菌凝集效价在1：80以上才有诊断价值。

（二）结果分析及临床意义

1.首先应考虑当地正常人的凝集效价，凝集效价大于正常效价才有意义。

2.伤寒病人的“0”凝集素常较“H”凝集素出现为早，存在于血清内的时间较短，而

“H”凝集素出现较迟，但效价较高，存在于血清内时间亦较长，可达数年。

3.