TGXAS-七叶一枝花种苗繁育技术规程编制说明

团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》（征求意见稿）编制说明一、项目来源根据《广西标准化协会关于下达2023年第三十二批团体标准制修定项目计划的通知》（桂标协〔2023〕111号）文件精神，由广西壮族自治区林业科学研究院提出，广西医科大学、广西柏朗健康产业发展有限公司、广西壮族自治区林业科学研究院等单位共同起草的团体标准的团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》（项目编号：2023-3203）获批立项。二、项目背景及目的意义近年来，国家高度重视中医药民族医药，对扶持和促进中医药民族医药发展作出战略部署。中央、自治区的高度重视以及医药工业被列入14个优先重点发展的千亿元产业规划，都使广西中医药民族医药发展面临重大历史性机遇。自治区党委政府还先后印发了《广西乡村振兴战略规划（2018—2022年）》《广西特色农产品优势区建设规划（2018—2022年）》等政策，鼓励区、市、县加快培育贫困地区、贫困群众增收产业体系，加大对中药材种植的投入，助推贫困农民脱贫致富奔小康，结合当地扶贫实际和农业特色产业结构特点，制定打赢脱贫攻坚战的规划，全面推进乡村振兴。2021年广西壮族自治区人民政府办公厅印发《促进全区中药材壮瑶药材产业高质量发展实施方案》提出实行以基地为核心的生产模式。围绕中药材壮瑶药材重点品种，按照统一规划、合理布局、集中连片的原则，建设高标准中药材壮瑶药材生产基地。2022年9月，自治区农业农村厅印发《广西“十四五”中药材种植业高质量发展专项规划》，其中指出：建立优良品种种子种苗繁育推广体系，加大新品种选繁育推广力度，提高新品种生产占有率，提升中药材的产量、质量和效益。七叶一枝花（拉丁学名：Parispolyphylla），别称为九连环、蚤休，是百合科重楼属植物。七叶一枝花生于山坡林下及灌丛阴湿处，喜温，喜湿、喜荫蔽，也抗寒、耐旱，惧怕霜冻和阳光。它是由一圈轮生的叶子中冒出一朵花，花的形状像极了它的叶子，外轮花及内轮花，外轮花与叶子很像，约有6片，而内轮花约有8片；叶心如轮状会开花，花萼为绿色，花瓣呈细丝带状。七叶一枝花分布于不丹、越南、印度、尼泊尔以及中国的贵州、云南、西藏、四川、广西湖南和台湾等地。在广西，七叶一枝花主要分布于桂西和桂北地区，野生资源多生长在海拔700～1300m山区的山坡、常绿阔叶林下、湿地、溪边等处。野生七叶一枝花自然分布于海拔300～1200m的常绿阔叶林下，集中生长于林下湿度60%～90%的沟谷、山坡中下部肥沃土壤中。七叶一枝花作为中药材重楼的基源植物之一，是云南白药、宫血宁胶囊、楼莲胶囊、三七血伤宁散、云南红药散、一粒止痛丸、九味双解口服液等80多个产品的主要原料药，涉及云南白药集团、桂林三金药业、太极集团、云南植物药业、吉林恒金药业、贵州健瑞安药业等上百家大型制药企业。据统计，近年来全国重楼年需求量达到3000吨以上，而我国年产仅600吨，市场缺口主要依赖缅甸、尼泊尔、越南进口。重楼每年的消耗量远远超出了其自然生长量，使其野生药用资源七叶一枝花面临枯竭的威胁。七叶一枝花生长速度缓慢，野生资源少，人工种植成功率低。现在随着生活水平的提高及物质的丰富，很多人在饮食上要求吃得好、吃得精细，造成摄入体内的营养过剩，因而导致肥胖、高血压、高血脂等疾病，俗称“富贵病”。七叶一枝花有很高的药用价值，具有消肿解毒、活血止血功效很多药物无法代替，因此受到人们的欢迎，价格也越来越高，目前干品价格一斤在600元以上，非常有发展前景。由于七叶一枝花种苗繁育主要成本在苗木及人工种植抚育，而偏远山区农业用地少、闲置劳动力多、林地多、生态环境好，栽培出的七叶一枝花品质高，林农栽培七叶一枝花具有非常好的经济效益和社会效益，是广西偏远山区发展林下经济产业，实现乡村振兴非常好的载体。通过制定团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》，以标准为抓手，统一规范七叶一枝花种苗繁育技术条件的要求，用标准化手段，将能更好的推广七叶一枝花种苗繁育，对提高区内七叶一枝花种苗繁育技术，促进广西七叶一枝花种苗繁育高效、安全、规范化发展具有重要意义。三、项目编制过程（一）成立标准编制工作组团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》项目任务下达后，广西医科大学成立了标准编制工作组，制定了起草编写方案与进度安排，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由广西医科大学等起草单位组成标准编制工作组。编制工作组下设三个组，分别是资料收集组、草案编写组、标准实施组。资料收集组负责国内外有关七叶一枝花种苗繁育技术的文献资料的查询、收集和整理工作，对七叶一枝花种苗繁育技术研究成果进行系统总结，查阅目前科学界对七叶一枝花种苗繁育技术的研究进展。草案编写组负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。标准实施组负责团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》发布后，组织"黑皇"葡萄种植区域相关单位、果农开展标准宣贯培训会，对标准进行详细解读，让相关种植户了解标准，并根据标准对七叶一枝花种苗繁育按标准要求的栽培技术进行，保证七叶一枝花种苗产量、质量，并对标准实施情况进行总结分析，不断对团体标准提出修正意见。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关七叶一枝花种苗相关文献资料。主要有：B35/T2035-2021《七叶一枝花种子生产技术规程》DB34/T3167-2018《七叶一枝花育苗技术规程》DB42/T499-2008《七叶一枝花种苗生产技术规程》DB42/T498-2008《七叶一枝花种子生产技术规程》（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为七叶一枝花种苗繁育技术的术语和定义、种子准备、育苗、苗期管理、病虫害防治、成苗标准。（四）调研、形成草案、征求意见稿2023年5月-6月，标准起草工作小组进行了广泛实地调研工作，查阅了大量的国内外文献资料，对七叶一枝花种苗繁育技术研究成果进行系统总结。形成了标准的基本构架，对主要内容进行了讨论并对项目的工作进行了部署和安排。2023年6月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有的参考资料中有关七叶一枝花种苗繁育技术技术要求，向广西区内涉及领域的部门及相关专家征求意见，并结合广西七叶一枝花种苗繁育技术实际要求的基础上，按照简化、统一等原则编制完成团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》（草案）。2022年7月-8月，标准起草工作组再次深入七叶一枝花种植基地等涉及七叶一枝花种苗生产销售的有代表性的合作社、农户、企业针对七叶一枝花种苗繁育情况进行分组实地调研学习。通过实地调研，掌握各地方关于七叶一枝花种苗繁育的具体技术要求。并实际征求意见，通过收集反馈了大量意见，标准编制工作组多次召开会议，对标准草案进行了反复修改和研究讨论。最终形成了团体标准《七叶一枝花种苗繁育技术规程》（征求意见稿）和（征求意见稿）编制说明。四、标准制定原则1、实用性原则本标准是在充分收集相关资料和文献，调研分析广西区内七叶一枝花种苗繁育现状，在现有国家、行业标准相关七叶一枝花种苗繁育技术技术要求的基础上，结合广西医科大学多年的研究实验数据、经验而总结起草的。符合当前区内七叶一枝花种苗产业发展需求，有利于行业的稳定长远发展，有利于提高七叶一枝花种苗质量和商品经济价值，提高农民经济效益，对推动我区中药材产业健康发展，促进农民增收，防止返贫，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本标准编写过程中注意了与七叶一枝花种苗繁育技术相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本标准严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4、前瞻性原则本标准在兼顾当前区内七叶一枝花种苗繁育现实情况的同时，还考虑到了中药材产业稳定发展的趋势和需要，在标准中体现了个别特色性、前瞻性和先进性条款，作为对七叶一枝花种苗繁育技术发展的指导。五、标准主要内容及依据来源1.范围本文件界定了七叶一枝花的术语和定义，确立了七叶一枝花种苗繁育的程序，规定了七叶一枝花种苗繁育的种子准备、育苗、苗期管理、病虫害防治、成苗标准等阶段的操作指示，描述了生产过程信息的追溯方法。本文件适用于广西壮族自治区行政区域内七叶一枝花的种苗繁育。2.规范性引用文件依据正文中规范性采纳的标准列出规范性引用文件，排列顺序符合GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求。3.术语和定义术语和定义主要依据七叶一枝花的品种特点和产品特性确定，界定了七叶一枝花的术语和定义。明确了其为百合科重楼属植物，其干燥根茎为常用中药材“重楼”。种子准备主要包括种子选择、种子预处理、种子灭菌、赤霉素处理。宜选择净度高，充实饱满，无病虫害感染，无异味、成熟的七叶一枝花种子。成熟的七叶一枝花种子种皮汁液饱满，为方便操作，将成熟的七叶一枝花种子置于两片洗碗巾之间，揉搓去除种皮，用流动水将揉搓掉的果肉彻底清洗掉，此时的七叶一枝花种子呈现乳白色。如图1所示。将种子置于干燥阴凉房间4~7天，阴干种子表面水分，再将种子置于玻璃瓶中，放于20℃恒温培养箱中4个月以上，完成种子后熟过程。图1七叶一枝花种子注：A.为新鲜七叶一枝花种子B.为去除红色果肉后。C.去除淡黄色种皮之后。七叶一枝花种子灭菌实验：对照组：无菌去离子水浸泡2小时；沸水烫种：沸水烫种10秒后，无菌水冲洗3次；强光照射：正午12时阳光直射30分钟，后无菌水浸泡；75%酒精：75%酒精浸泡5分钟后，无菌水冲洗3次；5%次氯酸钠：5%次氯酸钠浸泡30分钟后，无菌水冲洗3次；0.1%升汞：0.1%升汞浸泡10分钟后，无菌水冲洗3次；10%过氧化氢：10%过氧化氢浸泡30分钟后，无菌水冲洗3次。上述灭菌方式各进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；在20℃恒温培养箱中培养7天和14天后，分别统计各组污染率。污染率=（污染种子数/总种子数）*100%，不同灭菌方式的污染结果如表1所示。表1：七叶一枝花种子不同灭菌方式的污染率（%）n=5方法7天污染率（%）14天污染率（%）对照组5.80±1.11a53.80±3.85a沸水烫种组022.20±2.62c强光照射组041.20±3.22b75%酒精组017.20±4.59c5%次氯酸钠组020.40±3.17c0.1%升汞组041.80±3.29b10%过氧化氢组037.40±3.75b注：表中数值为平均值±标准误差；同列不同小写字母表示在p=0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p=0.05水平上差异不显著。从表2可以看出，14天内的污染率，75%酒精组为17.20%，灭菌效果显著高于对照组、强光照射组、0.1%升汞组、10%过氧化氢组等其他组。因此选择将预处理后的种子取出，用清水浸泡24h，后用75％酒精浸泡5min，进行灭菌。在20℃条件下，用200mg/L～500mg/L赤霉素浸泡种子24h。育苗包括培养基配置、育苗盒、催芽、炼苗。七叶一枝花种子育苗基质对比实验：将预处理、灭菌获得的种子，分别进行如下发芽基质筛选试验：河沙组：将过60目河沙经121℃干热烘干后，河沙与灭菌水按10:1的比例制成含水河沙；珍珠岩组：1-3mm孔径珍珠岩经121℃湿热灭菌后，按珍珠岩与无菌水1:1制成含水珍珠岩；蛭石组：1-3mm孔径蛭石经121℃干热烘干后，按蛭石与灭菌水1.5:1制成含水蛭石；泥炭组：纯水苔泥炭作主要基质，添加蛭石及珍珠岩，纯水苔泥炭：珍珠岩：蛭石比例为6:2:2，混合基质pH:5.5-7.0，有机质≥20%，经121℃湿热灭菌后，按泥炭与灭菌水2:1制成含水泥炭。在发芽盒底部垫一层1cm左右厚度的棉花，将上述的发芽基质与水混合后平铺至育苗穴盆中，将种子平放于各基质之上，育苗穴盆再放置于育苗盒中，盖上育苗盒盖。育苗盒盖上事先钻有若干小孔，用于通气。上述基质方式各进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；在20℃恒温培养箱中培养45天和60天后，统计各组发芽率。不同育苗基质的发芽率结果如表2所示。表2七叶一枝花在20℃条件下不同育苗基质的发芽率（%）n=5基质45天发芽率60天发芽率河沙组50.60±2.12b70.40±0.79c珍珠岩组51.00±0.32b71.20±0.78c蛭石组53.80±1.33a73.80±0.66b泥炭组55.60±1.47a76.40±0.9a注：表中数值为平均值±标准误差；同列不同小写字母表示在p=0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p=0.05水平上差异不显著。从表2可以看出，七叶一枝花种子在泥炭下45天和60天萌发率略高于其它基质组。赤霉素与不同育苗基质结合使七叶一枝花种子快速萌发方法：采用表3中所示的育苗基质和赤霉素（GA3）浓度组合。各育苗基质与对比表2相同，每组基质＋GA3进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；同时放置在20℃的人工培养箱中培养45天和60天后，分别统计各组基质＋GA3的发芽率。表3：七叶一枝花在20℃条件下不同育苗基质+浓度400mg•L-1赤霉素（GA3）的发芽率（%）n=5基质+GA345天发芽率60天发芽率河沙组+GA360.60±2.41b79.20±1.98b珍珠岩组+GA362.20±1.05b82.20±1.77b蛭石组+GA361.20±2.96b80.40±2.37b泥炭组+GA376.20±1.93a97.20±1.04a注：表中数值为平均值±标准误差；同列不同小写字母表示在p=0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p=0.05水平上差异不显著。从表4可以看出，七叶一枝花种子在泥炭组＋GA3下45天和60天萌发率明显高于其它基质＋GA3组合。结合表2和表3，可以看出，河沙组、珍珠岩组、蛭石组和泥炭组4种发芽基质分别与GA3组合，能明显缩短七叶一枝花种子的萌发时间，但泥炭组与GA3组合对缩短七叶一枝花种子萌发时间的效果更加显著，泥炭组＋GA3组合对七叶一枝花种子萌发具有显著的促进作用，可以在较短时间内提高七叶一枝花种子的发芽率。七叶一枝花种子萌发不同时期显微形态见图2。因此培养基配置选择纯水苔泥炭作主要基质，添加蛭石及珍珠岩，纯水苔泥炭:珍珠岩:蛭石比例为6:2:2，混合基质pH:5.5～7.0，有机质≥20％，经121℃湿热灭菌后，按泥炭与灭菌水2:1制成含水泥炭。注：A.S1阶段至S8阶段七叶一枝花种子外观，白色线段所示为1cm；B、C.S1阶段种子纵切面；D、E.S2阶段种子纵切面；F、G.S3阶段种子纵切面；H、I.S4阶段种子纵切面；J、K.S5阶段种子纵切面；L、M.S6阶段种子纵切面；B~M中黑色线段所示为500μm；En.胚乳；Em.胚；Plumule.胚芽；Hypocotyl.下胚轴；Radicle.胚根；Cotyledon.子叶；Coleorrhiza.胚根鞘。图2七叶一枝花种子萌发不同时期显微形态（±s，n=3）不同丛枝菌根对七叶一枝花的影响：菌种扩繁：以河沙作为培养基质与宿主植物玉米用盆栽法扩繁Funneliformismosseae与Acaulosporakentinensis，每盆装2kg的河沙。在播种前，对河沙进行121℃灭菌1h，并用75%酒精对花盆进行消毒。挑选饱满、均一的玉米种子，采用10%H2O2消毒20min，然后用清水浸泡一夜后于培养箱中28℃黑暗催芽。每盆接种剂量为20g，接入AM真菌菌剂时，先装入2/3的基质，平铺菌剂，再装入剩余1/3的基质，播种后浇水，出苗大约1周后定苗。3个月后停止浇水，剪掉地上部分，收获菌株备用。实验方法：实验采用盆栽法，主要包括4个处理组（见表4），其中2组接种不同的AMF作为处理组，1组接混合的AMF作为处理组，1组对照（CK组），每处理组各10次重复。每盆种1棵重楼块茎。播种时将AMF菌土均匀施于重楼块茎的表土下，每盆按照20g剂量进行接种，孢子密度约为50/g。CK组接种20g河沙，将盆栽放置于室温下，正常浇水，60d后统计分析。表4不同处理组及接种AMF处理菌株孢子数量个/g重量gAFunneliformismosseae5020BAcaulosporakentinensis5020CFunneliformismosseae,Acaulosporakentinensis5010,10CK--20注：CK用20g沙子做对照。实验统计：每个处理组取10个统计平均值。表5不同AMF对七叶一枝花根系侵染率的影响处理浸染情况株高cm茎粗mm根数植物体鲜重增加量A侵染30.162.603.22.49B侵染较多38.503.483.43.65C侵染34.103.063.02.56CK无侵染29.542.582.42.03由表5可知，CK组未被侵染，ABC组接种不同AMF的七叶一枝花根系均被侵染，但侵染强度有所不同，可能是由于七叶一枝花与不同菌种之间存在相互选择的作用，其中B组侵染强度最高。这说明七叶一枝花生长期外源接种不同AMF能正常生长，且能和七叶一枝花根系形成良好的菌根共生体，外接AMF以提高七叶一枝花品质具有可行性。A,B,C处理组株高均高于对照组，说明外接AMF对七叶一枝花生长具有促进作用，其中B组最高;对照组植株茎粗为2.58mm，与A处理组接近，B处理组茎粗为3.65mm,均高于其他组；在根数统计中，B处理组也高于其他组。说明外接AMF菌对七叶一枝花具有促进作用，对植株高度，茎粗，根数均有影响，添加Acaulosporakentinensis菌株长势最好，是七叶一枝花的优势菌株。图3不同对照试验下七叶一枝花种苗长势苗期管理包括中耕除草、遮荫、水分管理、施肥管理。移栽之后的1～3个月是地下茎生长的初期，应在无雨天气利用小锄小心地除草和松土，中耕不宜太深，避免碰伤植株地上部及根系。平常发现植株周围杂草要及时拔除。七叶一枝花喜阴、怕强光直射。因此，在出苗、移栽后要及时采取遮阴措施，在全生育期均以透光度40％～50％为宜。采用遮阳网遮荫或松针叶进行覆盖。七叶一枝花喜阴湿环境，既怕干旱又怕积水，在苗期生长时畦面及土层要保持湿润，遇旱季要及时浇水，平时间隔喷水；雨季要及时疏沟排水，以防止田间积水，诱发病害。施肥管理按照NY/T394的规定执行。以有机肥为主，化肥为辅。随着植株苗龄的增大适当增加施肥用量和施肥次数，其间可以配合施用叶面肥（叶面肥一般为复合肥）和微量肥。七叶一枝花有地上部开始开花、地下部的块茎即生长膨大的规律，一般在6月中旬至8月期间块茎膨大生长最快。每667m2施农家肥1000kg～2000kg，磷钾肥20kg～30kg，追施于根部位置；同时结合清沟进行培土，培上的土层要松散，并且保持墒面、沟底没有积水。病虫害防治主要依据GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则的规定结合七叶一枝花种苗主要病虫害实际防治情况，坚持预防为主，综合防治的植保工作方针，体现可持续植保的理念，协调运用综合防治技术，优先采用农业、物理和生物防治措施，辅助以安全合理的化学防治措施，达到有效、安全、经济和环保的目的。病害以立枯病、菌核病、黑斑病、茎腐病为主，虫害以金龟子为主，依据多年的栽培经验并结合实际，分别对物理防治、生物防治、化学防治方法做出细致要求。其中，化学防治使用的化学药剂及安全间隔期要符合《NY/T393绿色食品农药使用准则》的规定。苗床用药消毒，并喷施代森锌600～800倍液2～3次。发病初期用甲基托布津或纹枯利500～700倍液，连喷2～3次，喷洒5％菌毒清水剂或50％甲基硫菌灵悬浮。成苗标准：植株粗壮，高度10cm以上，叶子1片以上，块茎直径大小5mm以上，根系健壮。生产档案：建立育苗生产档案，包括投入品的名称、来源、用法、用量和使用、停用的日期及生产技术、病虫害的发生和防治等。六、国内外同类标准制修订情况及与法律法规、强制性标准关系经查阅，目前与“七叶一枝花”“七叶一枝花育苗”相关的国家、行业、地方标准主要有：DB35/T2035-2021《七叶一枝花种子生产技术规程》、DB4203/T143-2019《中药材七叶