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文档简介
T/CVMA164—2024口蹄疫A型病毒磁微粒化学发光抗体检测Magneticparticlechemiluminescencemethodfordetectionofantibodyagainstfoot-and-mouthdiseasevirustypeA2024-5-23发布2024-5-23实施中国兽医协会发布I1本文件适用于动物血清中的口蹄疫A型病毒抗体检测,适用于A型口蹄疫的血清学监测、流行病学2规范性引用文件NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范激发液excitationflu4符号和缩略语MES溶液:4-吗啉乙磺酸溶液(4-Morpholineethanesulfonicacidsolution)2MEST溶液:4-吗啉乙磺酸吐温溶液(4-MorpholineEthylsulfonicAcidTweenPBST:磷酸盐吐温溶液(PhosphatebuffersalineinTween)NHS溶液:N-羟基丁二酰亚胺溶液(N-hydroxysuccinimidesolution)采用竞争法的磁微粒直接化学发光检测技术检测口蹄疫病毒A型抗体。将待测样品、口蹄疫A型病混合;孵育一段时间洗涤后,加入激发液A和激发液B;发光强度和抗体含量成反比,通过测量的发光7.32℃~8℃冰箱,-20℃冰箱。38.1.1进行静脉无菌采血,不少于8.1.2将血液室温(15℃~25℃)静置于斜面2h~4h,待血液自然凝固后,置离心机4,000r/min离8.1.3吸出上层血清保存备用。血清应清亮,8.2.1血清样品若在一周内检测,可置2℃~8℃条件下保存。若超过一周检测,应置于-20℃以下冷4A.1.1从超低温冰箱取出大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,于冰上融化,加入5μg合成质粒pet28a-FMDV-A-VP1,轻轻混匀后,立16h。mL含卡那霉素(50µg/mL)LB液体培养基A.1.48,000r/min离A.2磁性微球溶液的制备A.2.1取0.2mg口蹄疫病毒VP1重组蛋白,装入透析袋中,置0.15moL/LpH值7.4的PBS溶液中室温(15℃~25℃)透析4h。),5min)移除上清。重复用MES溶液磁分离洗涤2次,用0.5mLMES溶液重悬。溶液,摇匀后固定在混匀器上室温(15℃~25℃)反应30min。反应结束后,磁分离,移除上清,用总体积1mL,摇匀后固定在混匀器上室温(15℃~25℃)反应4h。反应结束后,磁分离,移除上清,56取500μL口蹄疫A型病毒单克隆抗体(浓度2mg/mL装入透(15℃~25℃)透析4h。取出透析后的抗体溶液,加入洁净玻璃瓶中,再将吖啶酯溶液(浓度5.0mmoL溶液中,避光,室温反应2h。反应后入10%(m/V)赖氨酸封闭,室温反应1h。B.1.5保存加入0.02%Proclin-300混匀后经0.22μm滤器过滤,无菌分装,于2℃~8℃保存。7C.1.1采血室温(15℃~25℃)待血液凝固后,37℃静置2h,然后2℃~8℃静置1h,将析出的血清转移到离心瓶中,以2,000r/min离心5将制备的血清混合均匀后,0.22μm滤膜过滤除菌,将血清与冻干保护剂按8量分装,1mL/瓶,冷冻真空干燥,置-70℃以下保存,标记为“口蹄疫A型病毒抗体阴性免疫间隔1个月,最后免疫一次后,无菌采血,用商品化口蹄疫A型ELISA抗体阻断检测试剂盒检测蹄室温(15℃~25℃)待血液凝固后,37℃静置2h,然后2℃~8℃静置1h,将析出的血清转移到离心瓶中,以2,000r/min离心5将制备的血清混匀后,经0.22μm滤膜过滤除菌,将血清与冻干保护剂按8.5:分装,1mL/瓶,冷冻真空干燥,置-70℃下保存,标记为“口蹄疫A型病毒抗体阳8量取200mL纯化水,加入37%浓盐酸溶液8.33mL,加入3化水定容至1,000mL。定量分装,2℃~8℃保存。2.5mL,搅拌均匀加纯化水定容至1,000mL。定量分装,2℃~8℃保存。称取十二水合磷酸氢二钠72.5g、磷酸二氢钾5g、氯化钠200g、氯化钾5g,加入700mL双蒸水加热搅拌溶解,再加入12.5mL的吐温-20,而后加双蒸水定容至1,00纯化水搅拌溶解,再加纯化水定容至1,000mL,经0.22μm过滤,置2℃~8℃保存。过滤,置2℃~8℃保存。称取10mg的NHS,溶于1mLMES溶液中,临用配制10min内使用。称取10mg的EDC溶于1mLMES溶液中,临用配制10min内使用。),),搅拌均匀,PBS定容至1,000mL,经0.22μm过滤,置2℃~8℃保存。),PBS定容至1,000mL。9扫描配套的试剂盒、对照品、激发液A和激发液B的二维码,将批号和检测方法疫分析仪(H
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