T-CMWA 002-2024 生长分化因子15 检测试剂（盒）（荧光免疫分析法）

ICS11.020CCSC05中国女医师协会发布2 3 4 52规范性引用文件 3技术要求 54试验方法 65标识、标签和使用说明书 96包装、运输和贮存 参考文献 113本标准按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本标准由中国人民解放军总医院提出。本标准由中国女医师学会归口。本标准起草单位：中国人民解放军总医院。本标准主要起草人：朱海燕、马唯一。4生长分化因子15（growthdifferentiationfactor15，GDF15）属生长分化因子（GDFs）家族，是转化生长因子‑β（transforminggrowthfactorβ,TGF-β)超家族成员之一。研究显示，人GDF15基因序列位于19p13.1-13.2，包含924个碱基对，由2个外显子和1个内含子构成，并被其内含子分隔开来[1]。GDF15其前原蛋白为一个约40kD前肽单体，GDF15的基因首先转录翻译成308个氨基酸残基的多肽，N端含有由112个氨基酸组成的疏水性信号肽，中间为保守的蛋白酶水解位点，C端含有保守的胱氨酸结构域，最终形成包含224个氨基酸残基的GDF15成熟蛋白，属于分泌型蛋白，与其他的TGF-β超家族成员相比，成熟GDF15的分泌不需要前肽[2]，且在血浆和血清中的含量不受包括白蛋白、胆红素或者是血红蛋白的影响且更加稳定，使其方便用于临床检测。2002年，Brown等的研究结果提示GDF15的血浆水平与女性的冠状动脉粥样硬化有关，由此开始出现一系列GDF15与心血管疾病之间的联系的研究[3]。GDF15是一种能够反映心血管功能和疾病的独立炎症生化标志物，也是新型应激生物学指标，与心血管疾病的发生、发展密切相关。一般情况下GDF15仅在胎盘和前列腺中高表达，而在心脏、其他器官、组织中表达量很少，但在妊娠、神经元损伤及骨骼肌发育异常等多种疾病状态下增高，并且还参与心血管疾病的演变过程。有研究指出它是心血管系统的一种保护因子，有抗凋亡作用。GDF15在心肌中表现为“应激表达”，当心脏出现负荷过大和缺氧等情况发生时，其在心肌细胞中的表达增加；正常状态下，在正常心肌细胞中不表达[4]。近些年，由于其独特的应激表达和作用机制，GDF15已在多种心血管疾病的病理中得到广泛研究[5]，并在急性冠脉综合征的预测、诊断、预后等多方面得到应用。5生长分化因子15检测试剂（盒荧光免疫分析法）本标准规范了生长分化因子15检测试剂（盒荧光免疫分析法）的检测要求，试验方法，标识、标签和使用说明书，包装、运输和贮存。本标准适用于对生长分化因子15进行定量检测的试剂（盒荧光免疫分析法）。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T21415体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性YY/T0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求3技术要求3.1物理性状试剂盒各组分应齐全、完整，包括检测试剂、IC卡、干燥剂、说明书。3.1.2膜条宽度不小于3mm。3.1.3液体移行速度不低于10mm/min。3.2溯源性根据GB/T21415及有关规定，提供所用生长分化因子15校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。3.3准确度6准确度符合如下要求之一：a）相对偏差：用可用于评价常规方法的有证参考物质（CRM）或其他公认的参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差不超过±15%。b）企业参考品测试：对具有溯源性的企业参考品进行检测，其测量结果的相对偏差不超过±15%。3.4检出限生产企业应提供GDF15检测试剂（盒）的检出限，检出限不高于100pg/mL。3.5线性相关性生产企业应规定试剂盒的线性区间，并符合如下要求：a）试剂盒线性区间不窄于[100，5000]pg/mL；b）线性相关系数（r）不小于0.9900。3.6重复性在试剂盒的线性区间内，合理设置2～3个不同浓度的样品，各重复检测10次，其变异系数（CV）不大于15%。3.7批间差在试剂盒的线性区间内，合理设置2～3个不同浓度的样品，用3个批号试剂盒分别检测，3个批号试剂盒检测结果的批间变异系数（CV）不大于15%。3.8稳定性3.8.1可验证可对效期稳定性和热稳定性进行验证。3.8.2效期稳定性3.8.2.1生产企业应规定试剂（盒）的有效期。3.8.2.2取效期末的试剂盒检测其准确度、检出限、线性和重复性，符合本标准3.3～3.6的要求。3.8.3热稳定性试验取有效期内的试剂盒在37℃条件下放置一定时间，检测其准确度、检出限、线性和重复性，符合本标准3.3～3.6的要求。注1：热稳定性试验不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究注3：根据产品特性可选择本标准3.8.2、3.84试验方法74.1物理性状随机抽取1条试纸，在自然光下以正常视力或矫正视力目视检查，外观符合本标准4.1.1的要求。4.1.2膜条宽度随机抽取1条试纸，用游标卡尺测量试纸条的宽度，膜条宽度符合本标准3.1.2要求。4.1.3液体移行速度按说明书进行操作，在加样区加入稀释液开始用秒表计时，直至液体到达图1所示C区与D区的交界线时停止计时，所用的时间记为T；用游标卡尺测量（A区+B区+C区）的长度，记为L，则计算L/T即为移行速度。液体一行速度符合本标准3.1.3的要求。图1荧光免疫层析试剂卡的结构图4.2溯源性溯源性试验方法符合3.2的要求。4.3准确度4.3.1测试方法可采用相对偏差和比对试验之一测试试剂（盒）的准确度。试剂盒的准确性符合本标准3.3的要求；如适用，优先采用相对偏差的方法。4.3.2相对偏差4.3.2.1根据生产企业提供的试剂盒线性区间，将能用于评价常规方法的参考物质作为样本，合理设置2～3个浓度，将其作为样本按照待测试剂盒说明书的步骤进行检测，每个样品重复测定3次，测定结果记为（Xi），按式（1）分别计算相对偏差（Bi）。4.3.2.2如果3次结果都符合本标准3.3a）要求，即判为合格。4.3.2.3如果大于或等于2次的结果不符合，即判为不合格。4.3.2.4如果有1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别按照式（1）计算相对偏差，如果大于或等于19次测试的结果符合3.3a）的要求，即判为合格。Bi=（Xi－T）/T×100%...................................................（1）式中：Bi——相对偏差；8Xi——测量浓度；4.3.3企业参考品测试由生产企业提供企业参考品，按照常规样本进行检测，每份样本测定3次，测试结果记为（Xi按式（1）分别计算相对偏差（Bi），结果符合本标准3.3b）的要求。4.4检出限用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的T/C值（相对荧光值），计算其平均值（M）和标准差（SD），得出M+2SD，根据试剂盒配套校准品的定标曲线方程，或者根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度一荧光值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD所对应的T/C值带入方程式中，求出对应的浓度值，即为检出限，其结果符合本标准3.4的要求。4.5线性相关性用超出或接近线性范围上限浓度的样本和超出或接近线性范围下限浓度的样本，混合成至少5个稀释浓度。对每一浓度的样本至少重复测定3次，计算其平均值，将测定浓度的平均值与理论浓度用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r，结果符合本标准3.5的要求。4.6重复性用同一批号试剂盒，对不同浓度的质控样品分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值（M）和标准差（SD），根据式（2）得出变异系数（CV），结果符合本标准3.6的要求。×100........................................................式中：CV——变异系数；SD——10次测量结果的标准差；M——10次测量结果的平均值；4.7批间差用3个不同批号试剂盒，对不同浓度的质控样品分别重复测定10次，计算每个浓度样本30次测量结果的平均值（M）和标准差（SD），根据式（3）得出变异系数（CV），结果符合本标准3.7的要求。×100........................................................9式中：CV——变异系数；SD——30次测量结果的标准差；M——30次测量结果的平均值；4.8稳定性4.8.1效期稳定性取效期末的试剂盒按照本标准4.3～4.6方法进行检测，检测结果符合3.8.2的要求。4.8.2热稳定性试验取有效期内试剂盒在37℃放置7天，按照本标准4.3～4.6方法进行检测，结果符合本标准3.8.3的要求。5标识、标签和使用说明书5.1试剂（盒）外包装标识、标签所使用的符号满足YY/T0466.1的要求，至少包含如下内容:a）产品名称及包装规格；b）生产企业或售后服务单位的名称、地址、联系方式；c）医疗器械注册证书编号；d）产品标准编号；e）产品批号；f）失效期或有效期；g）贮存条件。5.2试剂（盒〉肉包装标识、标签所使用的符号满足YY/T0466.1的要求，至少包含如下内容：a）产品名称及包装规格；b）生产企业名称或标志；c）产品批号；d）失效期；e）贮存条件。5.3试剂（盒〉使用说明书所使用的符号满足YY/T0466.1的要求，至少包含如下内容：a）产品名称；b）包装规格；c）预期用途；d）检验原理；e）主要组成成分；f）贮存条件及失效期；g）适用仪器；h）样本要求；i）检验方法；j）参考值（参考区间k）检验结果的解释；l）检验方法的局限性；m）产品性能指标；n）注意事项；o）参考文献；p）生产企业或售后服务单位的名称，地址，联系方式；q）医疗器械生产企业许可证编号（仅限于国有企业r）医疗器械注册证书编号；s）产品标准编号；t）说明书批准及修改日期。6包装、运输和贮存6.1包装包装储运图示标志符合GB/T191的规定。包装容器密封性良好、完整、无泄露、无破损。6.2运输6.2.1按生产企业的要求运输试剂盒。6.2.2运输外包上，装醒目标识防潮、防压、防晒、防酸碱和轻拿轻放标志；6.2.3运输过程中，注意防潮、防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触，防止内外包装破损。6.3贮存试剂盒于4～30明确“储存具体条件或要求”，否则不具有可操作性℃条件下保存。明确“储存具体条件或要求”，否则不具有可操作性参考文献[l]BootcovMR,BauskinAR,ValenzuelaSM,etal.MIC-1,anovelmacrophageinhibitorycytokine,isadivergentmemberoftheTGFbetasuperfamily[J].ProcNatlAcadSciUSA,1997,94(21):11514-11519.DOI:10.1073/pnas.94.21.11514.[2]BreitSN,JohnenH,CookAD,etal.TheTGF-βsuperfamilycytokine,MIC-1/GDF15:apleotrophiccytokinewithrolesininflamm