hla基因检测修改稿课件

长沙能润医学检验所邓鹏HLA基因检测1.HLA和HLA分型检测2.HLA分型方法比较3.强直柱脊椎炎TableofContents1.HLA和HLA分型检测2.HLA分型方法比较3.强直柱脊椎炎TableofContents什么是HLAMHC、HLA、亚型、关联什么是HLA分型I型，II型，III型，IV型HLA分型与疾病检测骨髓与器官移植，免疫性疾病，代谢性疾病，神经内科疾病，骨科疾病等根本概念

人类白细胞抗原humanleukocyteantigen,HLA

MHCMajorhistocompatibilitycomplex，主要组织相容性复合体〔包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、SLA、RLA、GpLA、B等〕1940年代，Snell和Gorer小鼠间的肿瘤及皮肤移植试验发现：决定小鼠间移植排斥与否〔即组织相容性〕的基因位于17号染色体短臂命名为组织相容性-2〔H-2〕H-2是一个由许多紧密连锁的基因位点构成的复杂系统1950年代Dausset经产妇血清进行个体之间抗体与白细胞凝集和细胞毒试验发现人的MHC，命名为HLA基因位于第6号染色体短臂

1960年代，Benacerraf不同品系的豚鼠对一些抗原的免疫应答能力比较发现：控制机体对不同抗原的免疫应答能力的基因〔Ir基因〕位于MHC基因复合体内。Benacerraf、Dausset和Snell三位科学家分别从不同角度对MHC的免疫遗传学进行的开拓性研究，荣膺1980年的诺贝尔医学和生理奖。HLA共分为4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，广泛存在与各种组织细胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B细胞、巨噬细胞和活化T细胞中；III型分子为补体系统，包括C2和C4位点，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴细胞、某些细胞毒性T细胞和白细胞中。HLA分型

HLA基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个，共2320个等位基因。

图中所示为常见基因座位的等位基因数。及一些主要基因座位的等位基因数正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个，共2320个等位基因。

图中所示为常见基因座位的等位基因数。HLA分型的根本检测方法：细胞学方法测抗原特异性〔型〕血清学方法测抗原特异性〔型〕〔微量淋巴细胞毒试验〕分子生物学方法测等位基因PCR/SSPPCR/LuminexPCR/SBTPCR/二代测序PCR/流式细胞仪HLA抗原和等位基因命名:用血清学及细胞学方法检测抗原特异性:HLA-B27,HLA-DR4〔血清学方法〕HLA-DPw2〔细胞学方法〕用分子生物学方法检测等位基因：HLA-DRB1*0405

位点名主型等位基因序号HLA-B*27

07例如HLA-B27HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B*2706HLA-B*2707HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711...HLA-B*2723LociConsideredtobeMatchedACBDRDQDP4MbpFather’sMother’sHLA:无血源相关10/10

同胞兄妹单倍型全相合，半相合父母亲半相合

17脐血干细胞移植外周血干细胞移植骨髓干细胞移植

常见HLA与疾病关联疾病HLA抗原相对风险—————————————————————————强直性脊椎炎B2789.8Behcet综合征B5110-15多发性硬化症DR24.8乳糜泻DR310.8Grave’s病DR33.7系统性红斑狼疮DR35.8类风关DR44.2胰岛素依赖型糖尿病DR3/DR425.0重症肌无力DR32.5小结HLA的三个特性使其成为热点：决定组织相容性高度多态性与疾病关联1.HLA和HLA分型检测2.HLA分型方法比较3.强直柱脊椎炎TableofContentsHLA基因分型

低分辨:SSPrSSOLuminexbeadforclassI&classII中等分辨HLA分型24Nextgenerationsequencing高分辨高通量HLA分型IlluminaSequencingbySynthesis(SBS)chemistryMiSeqPacificBiosciences-Single-moleculereal-timesequencing27Sequencingbasedtyping(SBT)高等分辨HLA分型Sanger测序原理Sanger测序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ACGTACGdNTPddNTP-DyesATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TTGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACACGTACGTSanger测序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACHLA分型模板的扩增LongPCR(each:HLA-A,-B,-C,-DR,-DQ,DP,MICA)2.Amplicons(PCR:exon+loci)LongPCRtoamplifythetargetgeneAssemblyandAlignmentProblemsinsequenceassemblyAmplicons-HLACoverageHLA-AHLA-BHLA-CHLA-DQB1HLA-DPB1HLA-DQA1HLA-DRB1HLA-DRB3HLA-DRB4HLA-DRB5HLA-DPA14.1kb2.6kb4.2kb10.3kb9.7kb7.3kb7.1kb4.1kb1.HLA和HLA分型检测2.HLA分型方法比较3.强直柱脊椎炎TableofContentsAS的病因基因有关：HLA-B27的转基因大鼠成功地培育出强直性脊柱炎的动物模型。目前已发现包括B27在内的3种基因与此病相关；并且有明显家族发病倾向。免疫有关：MHC，T-Cells感染有关：相关学说认为，来自尿道、前列腺、精囊的抗原经Batson循环到达骶髂关节、脊柱和眼睛等部位而发生相关病变，解释了男性好发的原因。AS的经典检查体征：骶髂关节炎检查：“4〞字试验、骶髂关节压迫试验、髂棘推压试验、骨盆挤压试验附着点炎检查：坐骨结节、肋软骨、肋胸关节、耻骨联合等压痛脊柱和胸廓检查：Schober试验、指地距、枕墙距、胸廓活动度等骶髂关节

AS的经典检查B27测序的AS检查HLA-B27阴性的AS约5-10%的AS患者为HLA-B27阴性AS患者的HLA-B27阳性率达90-95%我国汉族人群HLA-B27阳性率2-7%（3千万-1亿），AS患病率为0.3%（＞4百万），大部分HLA-B27阳性者并不发生AS。HLA-B27与AS强直性脊柱炎类风湿性关节炎地区分布种族差异大世界性性别分布男＞女女＞男年龄20-3030-50家族史明显不明显类风湿因子（－）（

）HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因处于紧密连锁不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，仅仅是遗传标志。连锁不平衡学说分子模拟学说关节源性肽假说其他：

T细胞受体库假说

超抗原假说

B27