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第第页土壤碱性蛋白酶(Solid—AlcalaseProtease,S—ALPT)试剂盒说明书土壤碱性蛋白酶(SolidAlcalaseProtease,SALPT)试剂盒说明书微量法100管/48样注意:正式测定前务必取23个预期差别较大的样本做猜测定测定意义:土壤蛋白酶参加土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一、SALPT在碱性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。测定原理:碱性条件下,SALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸取峰。试验中所需仪器及设备:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水试剂构成和配置:试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保管;试剂二:粉剂×1瓶,4℃保管;临用前加入6ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃保管;试剂三:粉剂×1瓶,4℃保管;临用前加入2mL试剂七,沸水浴加热溶解,然后加入8ml试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂4℃保管;试剂四:粉剂×1瓶,4℃保管;临用前加入30ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保管;试剂五:液体8mL×1瓶,4℃保管;试剂六:液体1.5mL×1支,0.05mg/ml标准酪氨酸溶液,4℃保管;试剂七:液体5mL×1瓶,4℃保管;样品处理:新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。测定操作:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调整波长至680nm,蒸馏水调零。2、试剂二、三和四40℃水浴10min。3、样本测定:试剂名称测定管对比管风干土样(g)0.020.02试剂一(μL)150试剂三(μL)150混匀后,40℃水浴30min,振荡56次,使土样与反应液充分接触试剂二(μL)5050混匀,8000g25℃离心10min,取上清液,在EP管或96孔板中加入下列试剂测定管对比管标准管上清液(μL)6060试剂六(μL)60试剂四(μL)280280280试剂五(μL)606060混匀,40℃水浴20min,8000g25℃离心10min,取上清液200μL,680nm下读取各管吸光值A注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对比管。SALPT活性计算:单位定义:每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个SALPT活力单位。SALPT(mg/d/g土样)=C标准×(A测定管A对比管)÷A标准管×V反总÷W÷T=24×(A测定管A对比管)÷A标准管C标准管:标准管浓度,0.05
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