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收付款实验总结第1篇收付款实验总结第1篇(1)“贴壁”细胞计数

这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。可以通过给细胞染色(如结晶紫染色、台盼蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色),在镜下计数细胞。

①细胞固定

用镊子小心取出小室,吸干上室培养基,用棉签轻轻擦拭Matrigel和上室内的细胞。取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL,将小室放入后固定20-30min。

②细胞染色

取出小室,吸干上室固定液,移到预先加入约800μl结晶紫的孔中染液的孔中,染色15-30min。除去未与细胞结合的结晶紫,用棉签轻轻擦拭小室的上侧,将非特异性结合于小室上表面的染料擦掉,以便后续镜检计数。

Tips:

③细胞计数

轻轻用清水冲洗浸泡数次,取出小室,吸去上室液体,用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞。用小镊子小心揭下膜,底面朝上,适当风干后,移至载玻片上用中性树胶封片。在高倍显微镜下进行观察和拍照,随机选取5个视野(上、下、中央、左、右各1个)计数呈紫色的阳性细胞,统计结果。

Tips:

(2)“非贴壁”细胞计数

由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系,有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上,而是掉进下室。这种情况下可以收集下层培养液,用流式细胞仪计数细胞量,也可用细胞计数的方法直接在镜下计数。

收付款实验总结第2篇在24孔板下室一般加入500-650μL含5%-10%FBS或趋化因子的培养基,然后用镊子将Transwell小室置于24孔板内,取细胞悬液100-200μL加入上室,最后放入培养箱中培养12-48h(根据癌细胞侵袭能力而定)。

Tips:

(1)尽量避免气泡的产生:下层培养液和小室间常会有气泡产生,会影响下层培养液的趋化作用。因此一旦出现大气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板;

(2)注意细胞一定要接种均匀,建议沿着壁缓慢加入;

(3)培养时间的选择除了要考虑到细胞的转移能力以外,处理因素对细胞数目的影响也不可忽视,如某些药物会抑制细胞的增殖。(四)检测穿过的细胞数(计数的结果可做成统计图,辅助呈现数据)

收付款实验总结第3篇待测细胞培养至对数生长期,用胰酶消化细胞2-3min,1000rpm离心细胞3min,离心后弃去上清,用PBS洗1-2遍,接着用无血清培养基悬浮细胞,调整细胞密度至1-10×105/ml(根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数)。

Tips:

(1)如果细胞迁移能力较弱,可在细胞接种前,先无血清饥饿过夜或提高细胞接种密度。

(2)如果细胞量过多,穿过膜的细胞会过多,容易造成计数困难;如果细胞量过少

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