薜荔果总黄酮提取工艺及抗氧化性研究

摘要以薜荔果为研究对象，采用超声波辅助法提取薜荔果总黄酮，通过单因素实验和正交试验设计确定最佳提取工艺条件，并从对·OH、DPPH·及·NO的清除效果研究薜荔果总黄酮的抗氧化活性。结果表明：薜荔果总黄酮的最佳提取工艺条件为：60%乙醇、1∶25（g/mL）料液比、提取温度60℃及提取时间120min，在此条件下薜荔果总黄酮得率为8.87%。薜荔果总黄酮对·OH、DPPH·及·NO的清除效果与浓度间存在量效关系，其中对DPPH·的清除效果较好，IC50值为0.0033mg/mL，表明薜荔果中的总黄酮具有一定的抗氧化活性。引言薜荔（Ficuspumila）是荨麻目桑科榕属植物，在我国主要分布于中部和南部，野生资源丰富且极易种植，是具有开发价值的天然植物资源。薜荔的果实可加工食用，如制成凉粉，加工成果冻等。薜荔是食药两用植物，其藤和叶具有清热消肿、活血止痛、祛风利湿等功效。目前，关于薜荔有效成分的研究主要集中于黄酮和多糖的提取及多糖提取液的生物活性研究，如张朝辉等测定和对比了薜荔叶、壳和子中总黄酮的含量；用回流提取法测定了薜荔叶及花序托中的总黄酮含量；研究了薜荔籽果胶的提取工艺及抗氧化活性；多个课题组先后研究了薜荔果胶对大鼠肠内环境的影响及作用机制；对薜荔果实中的多糖进行提取，所得到的多糖提取液具有可调节血糖、免疫功能及改善肠道环境等药理作用。但对薜荔果中的总黄酮提取工艺及抗氧化活性的研究鲜见报道。黄酮类化合物具有抑菌、抗肿瘤及抗氧化等良好的生物活性，普遍存在于植物体中，是天然的抗氧化剂。而不同植物或同一植物中不同部位所含黄酮的量及其抗氧化活性存在一定的差异。若能将薜荔果作为原料提取其中的黄酮类物质并应用于保健食品和药品的开发，将提高薜荔果实的应用价值。以薜荔果为原料，采用超声波辅助法提取总黄酮，在单因素实验的基础上通过正交试验设计优化其提取工艺条件，并研究薜荔果总黄酮对·OH、DPPH·及·NO的清除作用，以期为薜荔植物的研究、开发及薜荔果实作为天然抗氧化剂、功能性食品的开发提供实验数据和理论依据。正文部分1

实验部分1.1

主要仪器与试剂1.2

试验方法1.2.1

薜荔果的预处理对薜荔果进行如下预处理：薜荔果实洗净，60℃烘箱中干燥，粉碎并过筛（60目），石油醚中脱脂及脱色，抽滤，60℃烘箱中干燥，薜荔果粉末避光保存备用。1.2.2

薜荔果总黄酮的提取称取1.0000g脱脂脱色的薜荔果粉末原料，加入定量乙醇溶液，于特定条件下提取，抽滤，所得滤液定容至100mL容量瓶中，即得薜荔果总黄酮提取液，待用。1.2.3

单因素实验1.2.4

正交试验设计以单因素实验结果为依据，以乙醇体积分数、料液比、提取温度及时间4个考察因素进行L9(34)正交试验，以薜荔果总黄酮得率为评价指标，优化薜荔果总黄酮提取条件，以确定其最佳提取工艺。1.2.5

薜荔果总黄酮得率的测定1.2.6

薜荔果总黄酮的抗氧化性测定1.3

数据处理所有实验数据平行测定3次取均值，采用Origin8.5软件进行数据处理和图片绘制。

2

结果和分析2.1

单因素实验结果2.1.1

乙醇体积分数对薜荔果总黄酮得率的影响如图1所示，当乙醇体积分数由50%逐渐增大至70%时，薜荔果实总黄酮的提取率随着乙醇体积分数的增大呈先缓慢升高后降低的趋势，主要是因为溶剂的极性越来越接近黄酮类成分的极性，相似相溶则有利于黄酮类物质的溶出，则其总黄酮得率会逐渐增大。2.1.2

料液比对薜荔果总黄酮得率的影响如图2所示，薜荔果总黄酮得率随着料液比浓度的增大呈先升高后降低的趋势，在料液比为1∶20（g/mL）时对应的总黄酮得率最大为7.70%，而当料液比＞1∶20（g/mL）并逐渐增大，则总黄酮得率逐渐降低。2.1.3

提取温度对薜荔果总黄酮得率的影响如图3所示，提取温度在40～60℃范围内时，薜荔果总黄酮得率随着提取温度的升高而增大，当提取温度为60℃时对应总黄酮的得率最大8.39%，继续升高温度则总黄酮得率降低。2.1.4

提取时间对薜荔果总黄酮得率的影响如图4所示，随着提取时间的增大，薜荔果总黄酮的得率呈现先升高后降低的趋势，当提取时间为120min时，对应的总黄酮得率最大为8.65%。2.2

正交试验结果以单因素实验结果为基础，以乙醇体积分数、料液比、提取温度及时间为4个因素按表1设计并进行正交试验，试验结果列于表2。2.3

薜荔果总黄酮提取液的抗氧化能力2.3.1

清除·OH的能力如图5所示，薜荔果总黄酮对·OH的清除效果随着浓度增大则清除效果越显著。在最大浓度0.5mg/mL下，薜荔果总黄酮对·OH的清除率为36.71%，表明薜荔果总黄酮对·OH的清除能力较弱，弱于同浓度下的Vc清除能力。2.3.2

清除DPPH·的能力如图6所示，随着薜荔果总黄酮浓度的不断增大，其对DPPH·的清除能力也逐渐增强。2.3.3

清除·NO的能力如图7所示，薜荔果总黄酮质量浓度在0.05～0.25mg/mL范围时，其对·NO的清除效果与浓度为正相关的量效关系。3

结论结论经正交试验设计优化得到的薜荔果总黄酮超声波辅助法最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数60%、料液比1∶25（g/mL）、提取温度及时间为60℃和120min，对应总黄酮提取率为8.87%。薜荔果总黄酮对·OH、DPPH·及·NO的清除能力随着总黄酮提取液质量浓度的增大而增强，且对DPPH·的清除效果较好。当薜荔果总黄酮浓度为0.005mg/mL时，对DPPH·的清除率达75.63%。