AbMole 揭秘免疫球蛋白的纯化之旅_第1页
AbMole 揭秘免疫球蛋白的纯化之旅_第2页
AbMole 揭秘免疫球蛋白的纯化之旅_第3页
全文预览已结束

AbMole 揭秘免疫球蛋白的纯化之旅.docx 免费下载

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

AbMole推荐——揭秘免疫球蛋白的纯化之旅在生物科学的世界里，免疫球蛋白作为一种重要的蛋白质，扮演着守护我们健康的卫士角色。它们是免疫系统中的关键分子，参与识别和中和外来病原体。然而，要深入研究这些分子的神秘面纱，首先需要将它们从复杂的生物样本中分离出来。本文将带您走进免疫球蛋白纯化的科学世界，一探究竟。盐析法基于蛋白质在水溶液中的溶解度受多种因素影响的原理。向蛋白质溶液中加入中性盐时，盐对水分子的亲和力大于蛋白质，导致蛋白质分子周围的水化膜减弱甚至消失。同时，盐离子强度的增加会中和蛋白质表面的电荷，进一步降低其溶解度，促使蛋白质分子聚集沉淀。这种方法尤其适用于从混合物中分离出特定类型的蛋白质，如免疫球蛋白。在进行实验时，我们需要准备好这些材料：混合血清、生理盐水、饱和硫酸铵溶液、萘氏试剂、磷酸盐缓冲盐液（PBS,pH7.4）、磺基水杨酸。

1.初次盐析混合与稀释：首先，取适量混合血清，加入等量的生理盐水进行稀释，以减少高浓度蛋白质对盐析效果的影响。盐析过程：在搅拌下，逐滴加入与稀释后血清等量的饱和硫酸铵溶液，直至达到浓度为50%饱和（NH4）2SO4的溶液。此步骤需在4℃环境下进行，并持续搅拌3小时以上，以确保蛋白质充分沉淀。

2.离心与再盐析离心分离：将混合液放入离心机中，以3000rpm的速度离心20分钟。离心后，小心弃去上清液，保留沉淀物。沉淀溶解与再盐析：用适量的生理盐水溶解沉淀物至一定体积（记为Xml）。随后，再次逐滴加入X/2ml的饱和硫酸铵溶液，置于4℃环境下静置3小时以上，此时（NH4）2SO4的饱和度约为33%。此步骤可重复多次，以提高纯化效果。3.透析除盐透析袋准备：将离心后得到的沉淀物用0.02MpH7.4的PBS溶解至Xml，并装入透析袋中。透析过程：将透析袋置于大量PBS中，进行充分透析以去除残留的盐分。透析过程中需更换PBS液至少3次，直至使用萘氏试剂检测透析外液无黄色为止，表明盐分已基本去除。4.蛋白含量测定样品稀释：从透析袋中取出少量样品，进行适当倍数稀释。紫外分光光度计测定：使用紫外分光光度计，分别测定样品在280nm和260nm波长下的光密度值（OD）。含量计算：根据公式“蛋白含量（mg/ml）＝（1.45×OD280nm-0.74×OD260nm）×样品稀释度”计算蛋白质的含量。需要注意的是：过高的蛋白质浓度可能增加杂蛋白的共沉作用，影响纯化效果。因此，建议对血清进行适当稀释后再进行盐析。同时，不同蛋白质对离子强度的要求不同，需根据目标蛋白质的特性选择合适的硫酸铵饱和度。在蛋白质沉淀时，蛋白质沉淀后宜在4℃放置较长时间，以促进大沉淀的形成，便于后续分离。纯化免疫球蛋白不仅对于基础科学研究至关重要，也为临床诊断和治疗提供了重要的工具。通过纯化过程，我们可以更准确地研究免疫球蛋白的结构、功能和相互作用，从而为开发新的疫苗和治疗方法提供理论基础。

随着科学技术的不断进步，蛋白质纯化技术也在不断发展。未来的研

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论