河北医大中药药理学实验指导

中药药理学实验指导

目录

第一章中药药理学实验须知..…1

第二章中药药理实验基本知识与技术.•…2

第一节常用动物简介…2

第二节实验动物的捉持、固定和标记方法及分组…4

第三节常用实验动物的给药方法…6

第四节实验动物给药量的计算…8

第五节实验动物的麻醉方法…13

第六节实验动物的采血方法…15

第七节实验动物的处死方法…17

第三章中药药理实验研究的基本要求.•…18

第一节中药药理实验设计的基本知识…18

第二节实验数据的整理与统计方法…20

第四章基本实验项目..…24

实验一马钱子的急性毒性试验（改进寇氏法）…24

实验二柴胡对发热家兔的解热作用…27

实验三生大黄对小鼠排便时间和数量的影响（炭末法）…28

实验四生大黄对小鼠小肠运动的影响（炭末法）…29

实验五双黄连口服液对蛋清致大白鼠后足跖肿胀的影响…30

实验六三金片对家兔的利尿作用（膀胱漏斗法）…33

实验七木香对盐酸-乙醇致大鼠急性胃粘膜损伤的影响…34

实验八延胡索对小白鼠的镇痛作用（热板法）…35

实验九延胡索对小白鼠的镇痛作用（扭体法）…37

实验十生三七粉对小白鼠凝血时间的影响（玻片法）…38

实验十一三七对小白鼠凝血时间的影响（毛细玻管法）…39

实验十二川苜对大鼠血液流变性的影响…40

实验十三当归抗大鼠血栓形成的作用…43

实验十四丹参抗大鼠血小板聚集的作用…45

实验十五复方丹参滴丸抗家兔血栓形成的作用…48

实验十六川贝枇杷膏对小白鼠的止咳作用（潜伏期观察法）…50

实验十七酸枣仁对小鼠自发活动的影响…51

实验十八天麻对小鼠睡眠时间的影响…53

实验十九人参对小白鼠游泳时间的影响（抗疲劳实验）…55

实验二十人参对小白鼠耐常压缺氧的作用…56

实验二十一党参对小鼠记忆获得性障碍的改善作用（跳台法）…57

实验二十二钩藤对大鼠的降压作用…59

实验二十三生脉注射液对低血压状态家兔的升压作用…61

实验二十四某一中药活血化瘀作用的药效学实验设计与研究…62

第一章中药药理学实验须知

中药药理学实验课是中药药理教学的一个重要组成部分。在生理

学和药理学实验基础上,在讲授中药药理的同时,开展中药药理的实

验，它的目的和任务一方面是验证理论、巩固并加强对理论知识的理

解；另一方面是通过实验，进一步提高学生的动手能力，培养学生能

用现代科学方法从事中药理论研究和新药开发的初步工作能力，为今

后进行科学研究，打下初步基础。

中药药理实验包括进行实验操作、整理实验结果和写出实验报告

等环节，为提高实验效果，必须做到：

一、明确实验的目的要求：实验前应作好预习，明确本次实验的

目的、方法、步骤和原理，作到心中有数，这样，才能在实验过程中

避免出现忙乱和差错，并在教师指导下，培养独立操作的能力。

二、作好实验结果的处理：中药药理实验结果有计量资料（如体

温、尿量）及计数资料（如动物死亡数）。要忠实地准确的对观察到的

数据及时加以记录，决不可想当然的用主观想象或书本理论代替实验

观察到的客观事实。实验完毕，应对结果加以整理：注明实验题目、

实验日期、动物性别、体重、给药剂量等；计数资料和计量资料应列

表以便比较，使之一目了然。

三、写好实验报告：写实验报告是培养文字表达能力和概括、综

合、分析问题能力的重要训练方法。每次实验完毕以后，要求以统一

的实验报告纸写出实验报告，交负责教师评阅。在实验报告中要求列

出实验题目、实验方法和实验结果。有时要对实验结果产生的原理或

对实验结果异常的原因略加讨论。讨论不可离开实验结果去抄书。实

验指导所列思考题或讨论题是为加深对实验的理解，与实验结果无关

的内容，不必写入实验报告。最后把实验结果加以概括性总结，写出

结论。结论不是单纯重复实验结果，也不应超过验证的范围任意外展,

扩大结论。实验报告要求文字简练，书写工整，措词注意科学性和逻

辑性。

第二章中药药理实验基本知识与技术

第一节常用动物简介

在中药药理实验中，常根据实验目的和要求选用不同的动物。常

用的实验动物有蛙、小鼠、大鼠、豚鼠、猫和犬等。在选择实验动物

时，应注意实验动物对动物的种属和系别方面的要求，因为动物的种

属和系别的差异往往会造成对药物反应性的不同。应使所选的动物能

较好地反映试验药物的选择性作用，并符合节约的原则。例如测定

LD50及ED50需较多动物，常选用小鼠，因为小鼠种属清楚，繁殖

快，较经济；又如抗过敏实验常选用豚鼠，是由于豚鼠对组胺等过敏

性介质敏感。

常用实验动物的特点如下。

1.蛙和蟾蛛

其心脏在离体情况下能较持久而有节律地搏动，故常用来研究药

物对心脏的作用。其坐骨神经腓肠肌标本可用来观察药物对周围神经

横纹肌或神经接头的作用。

2.小鼠

小鼠是药理实验最常用的一种动物，适用于需要大量动物的实验,

如LD50和ED50的测定，抗炎免疫药、抗肿瘤药、避孕药、中枢神经

系统药物等的研究和药物初筛。

3.大鼠

用途与小鼠相似。因其体形较大，有些在小鼠身上不便进行的实

验可选用大鼠。如药物的抗炎实验常选用大鼠的踝关节做炎症模型。

可用大鼠进行血压测定，胆管插管和长期毒性实验，还可用其离体子

宫做子宫收缩药的检定。此外，尚可用来复制糖尿病模型，用于糖尿

病药物的研究以及流感病毒传代及细菌学实验等。

4.豚鼠

豚鼠易被抗原性物质所致敏，对组胺特别敏感，常用于平喘药和

抗组胺药的实验研究。对结核杆菌比较敏感，故也用于抗结核药的实

验研究。此外还用于离体心脏、平滑肌实验。

5.家兔

家兔较驯服，易饲养。常用于观察药物对呼吸、心脏、血管（离

体兔耳血管灌流）、肠肌运动的影响，体温实验及热源检查。用于避

孕药实验（雌兔）或观察药物对皮肤局部作用（刺激性）。

6.猫

猫对于脑实验和其他外科手术耐受力强，反射功能强，血压较稳

定。常用于观察药物对心血管的影响。可用于中枢神经系统实验，如

去大脑僵直，姿势反射实验；猫也常用于镇吐药的实验。

7.犬

实验需用大动物时，常用犬。犬是记录血压、呼吸最常用的动物。

常用于观察血流动力学药物对冠状动脉血流量和心肌电生理的影响，

以及对降压药、抗休克药的研究等。犬还可通过训练，用于慢性实验

研究，如条件反射、高血压的实验治疗以及造胃瘦、肠瘦来观察药物

对胃肠蠕动和分泌的影响的实验。此外，犬也用于长期毒性实验。

第二节实验动物的捉持、固定和标记方法及分组

一、实验动物的标记

实验用较大动物如兔、猫、犬等可用特制的号码牌固定于耳上。

白色家兔和小动物（小鼠、大鼠）可用黄色苦味酸（3%~5%）涂于毛

上标记。其编号方法无统一规定，以下方法可供参考。

如给小鼠标记1~10号，可将小鼠背部分为前肢、腰部、后肢，按

左、中、右分为九个区域，从右到左标记1~9号，第10号不标记。

二、常用实验动物的捉持、固定方法

1、小鼠：用右手提起鼠尾，放在粗糙物（鼠笼盖）上面，向后轻

拉其尾，左手拇指、食指捏住其颈背部皮肤，将小鼠固定在掌中，使

其腹部朝上，然后以无名指和小指夹住鼠尾。

2、大鼠：捉持和固定方法基本同小鼠。将其放于鼠笼盖上，右

手轻拉鼠尾，左手中指和拇指放到大鼠双前肢腋下，食指放入颈部,

使其伸开前肢迅速将其握住。

3、豚鼠：一手拇指和中指从豚鼠背部伸到腋下，另一只手托住

其臀部即可。体重小者可用一只手捉拿。

4、家兔：一手抓住颈背部皮肤，轻轻将兔提起，另一手托住其

臀部，或将其置于固定箱内。

5、猫：捉持方法同家兔，但应注意其利爪和牙齿会损伤人。为

保安全多用套网捉拿，用固定袋固定。

6、犬：对驯服犬，可用特制嘴套将犬嘴套住，并将嘴套上的绳

带拉至耳后颈部打结固定。对凶暴的犬，用长柄钳式捕犬夹钳住其颈

部，再用嘴套将犬嘴套住。如无嘴套，可用绳带绑嘴，方法是在犬嘴

的上下部打结并绕到颈后再打结固定。

急性实验时，通常将犬麻醉后仰位固定于手术台上。四肢栓上绳

带，拉紧固定在手术台边缘的锲子上。取下嘴套或绳带，将一金属棒

经两嘴角穿过口腔压于舌上，并将舌拉出口腔，再用绳带绕过金属棒

绑嘴并固定于手术台的柱子上。

三、实验动物的随机分组法

数理统计学上，根据随机抽样的原则，编制了随机数目表，应用

随机数目代替抽签法。表中的数字都各自独立，全部数字无论从横行、

纵列或斜行的W页序都是随机的。因此使用时可任自一个数目开始，可

从左而右，亦可从右而左，可从上而下，也可从下而上，按顺序取得

需要的数目，其结果比抽签更为理想。

(1)完全随机法

(2)配偶设计随机分组法

(3)随机单位组设计分组法

第三节常用实验动物的给药方法

一、小鼠

1、灌胃(ig):将小鼠固定后，使颈部拉直，右手持有灌胃针头

的注射器，自口角插入口腔，沿上腭插入食管。若遇阻力，可将针头

抽出再另插，以免刺破食管或误入气管。灌注量为0.1~0.3ml/10g

体重，最多0.4ml/10g体重。

2、皮下注射(sc):注射部位常选背部皮下。轻轻捏起背部皮肤，

将注射针头刺入皮下，稍稍摆动针头，若容易摆动则表明针尖部位于

皮下。此时注入药液。拨针时应轻捏针刺处片刻，以防药液漏出。注

射量为0.1~0.3ml/10g体重。

3、肌内注射(im):多注射于后肢股部肌肉，每侧不超过0.1ml。

4、腹腔注射(ip):左手固定小鼠，右手持注射器，从下腹部外侧

进针3~5mm，呈45度角刺入腹腔。注射量为0.1~0.2ml/10g体重,

最大不超过0.5ml/只。

5、尾静脉注射(iv):将小鼠置于固定筒内，使尾部露在外面，用

70%~75%乙醇棉球擦尾部，或将鼠尾浸入45~50Y温水中，待尾

部左右侧静脉扩张后，左手拉尾，右手进针。注射量不超过0.5ml/

只。

二、大鼠

灌胃、皮下注射、腹腔注射、肌内注射、尾静脉注射方法均同小

鼠。一般情况下，灌胃剂量为l~2ml/100g,皮下注射、尾静脉注射

<1ml/只,腹腔注射为1.5ml/只,肌内注射为0.1~0.2ml/只。此

外，大鼠尚有舌下静脉给药的方法。

三、豚鼠

1、皮下、肌内及腹腔注射:方法基本同小鼠恪合药量分别为0.5~

1.0ml/只、0.3~0.5ml/只、2~4ml/只。

2、静脉注射：选用后脚掌夕M则的静脉或外颈静脉进行注射。采

用前法，可由一人捉持豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的

毛，酒精棉球涂擦使血管扩张，用连接在注射器上的小儿头皮针头刺

入血管推注药物。做外颈静脉注射时，需将颈部皮肤切一小口，暴露

血管，再用针头刺入血管。注射量通常为2~4ml/只。

四、家兔

1、灌胃：如用兔固定箱，可一人操作。右手将开口器固定于兔

口中，左手插入导尿管。若无固定箱，需二人合作。一个坐位，将兔

夹于两腿之间，左手紧握双耳，固定头部，右手抓住双前肢。另一人

将开口器横放于兔口中，压在舌上，用8号导尿管由开口器中央孔慢

慢插入食管和胃。为避免误入气管，可将导尿管外口端浸入清水中，

如无气泡出现，证明已插入胃中。然后注入药液，给药量通常为

10ml/kg体重。

2、耳缘静脉注射：选定耳缘静脉（耳背内侧），拨除局部的毛,

用酒精棉球涂擦或以示指轻弹之，使血管扩张。用左手示指和中指夹

住耳根部，拇指和环指夹住兔耳尖部拉直，然后尽量从血管远心端刺

入，再用拇指和示指固定针头处，注入药液。注射量通常为2ml/kg

体重。

3、皮下、肌内和腹腔注射：方法基本上同小鼠，最大注射量分

别为0.5ml/kg、1.0ml/kg和5.0ml/kg体重。

第四节实验动物给药量的计算

一、给药剂量的计算

实验动物的给药量常按g/kg体重、mg/kg体重、ml/kg体重

或按体表面积来计算，一般是通过动物之间或动物与人之间的剂量换

算而得。换算方法大致有以下几种。

1、按体型分数换算法：通常采用下列公式：

式中dB是欲求算的B种动物（包括人）的kg体重剂量，dA是已知A

种动物（包括人）的kg体重剂量；WA、WB是已知动物A、B的体重;

RA、RB是动物的体型系数，见下表。

表：实验动物与人的体型系数

动物种类小鼠大鼠豚鼠兔猫猴犬人

R（体型系数）0.060.090.0990.0930.0820.1110.1040.11

例：已知家兔2kg,用药50mg/kg,求算家犬5kg体重用药量。

、代入上述公式:

dA=50,RB=0.104XRA=0.093.WA=2WB=5,

1

dB=50mg/kgx0.104x5V3/(0.093x2/3)=41.2mg/kg

2、按动物与人体表比换算法(见下表)

小鼠猴

大鼠200g豚鼠400g兔1.5kg猫2.0kg狗12.0kg人70.0kg

20g4.0kg

小鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9

大鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0

豚鼠400g0.080.571.02.252.45.24.231.5

兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2

猫2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0

猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1

狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1

人70.0kg0.00260.0180.0310.070.0780.160.321.0

例1:已知体重12kg的犬，其每日服药剂量为10mg/kg体重，每日

总量为120mg，试求人的日服药量。

人日服总量二犬日服总量x人与犬体表比二120x3.1=372mg

例2:某利尿中药大鼠给药时的剂量为250mg/kg体重，试粗略估

计犬灌胃给药时可以试用的剂量。（附表如下：）

解1：利用表中"mg/kg-mg/m2转换因子"计算法

将某种动物按mg/kg计算的剂量乘以相应的转换因子即为按mg/

m2计算的剂量。

犬的试用剂量=250x6（大鼠的转换因子）/19（犬的转换因

子）=79mg/kg

解2:利用表中每"1kg体重占体表面积相对比值"计算法

犬的试用齐I」量=250x0.16（犬的体表面积比值）/0.47（大鼠的体表面

积比值）=85mg/kg

不同种类动物间用药剂量换算时的常用数据

mg/kg-mg/m2每1kg体重占体表

动物种类体重(kg)体表面积(m2)

转换因子表面积相对比值

0.0180.00632.9

0.0200.00673.0粗略为31.0

小鼠

0.0220.00713.1(0.02kg)

0.0240.00763.2

0.100.01965.1

0.150.02575.8粗略为60.47

大鼠

0.200.03116.4(0.20kg)

0.250.03616.9

0.300.04396.8

0.400.05327.6粗略为80.40

豚鼠

0.500.06178.1(0.40kg)

0.600.06978.6

1.500.132311.30.24

家兔

2.000.1603粗略为

12.412(2.0kg)

2.500.186013.4

2.000.1571112.7

0.22

猫2.500.182413.7粗略为14

(2.5kg)

3.000.205814.6

5.000.327515.3

0.16

犬10.000.519919.2粗略为19

(10.0kg)

15.000.681222.0

40.001.239832.2

0.08

人50.001.438634.8粗略为35

(50.0kg)

60.001.624636.9

二、给药容积的计算

实验过程中常用的容量计算如下:实验时需从已知药的浓度和已

知的给药剂量（g/kg或mg/kg）算出相当于每1kg体重应给药的毫

升数（ml）,以便于给药。

例:小鼠体重20g腹腔注射盐酸吗啡10g/kg药液浓度为0.1%,

应注射多少毫升？

计算方法：0.1%的盐酸吗啡溶液每1ml含药物1mg,10

mg/kg的剂量相当于10ml/kg,小鼠体重20g方奂算成kg为0.02kg。

则

10ml/kgx0.02kg=0.2mlo

三、配制药物浓度的计算

实验中有时需根据药物剂量（mg/kg）和设定的给药容积

（ml/kg）,计算出应该配制的药物浓度。

例：按50mg/kg的剂量给家兔静脉注射苯巴比妥钠，注射量按

1ml/kg进行，应配制苯巴比妥钠的浓度是多少?

计算方法：50mg/kg相当于1ml/kg,因此1ml药液应含50

mg药物，算成百分比浓度为:1:50=100:X,X=50x100mg=5g,

即应配制成5%的苯巴比妥钠溶液。

四、药物浓度表示法及剂量换算法

药物的重量以"克”为基本单位，容量以"毫升"为基本单位。

这是衡量的公制，现将公制列表如下：

公制重量与容量表

单位名称简写符号折算

微克Ug(r)1/1000毫克

毫克mg1000微克

克g1000毫克

千克（公斤）Kg1000克

毫升ml1/1000升

升L1000毫升

药物浓度是指一定量液体或固体制剂所含主药的分量。常用以下几种

表ZTQ去：

1、百分浓度：是按每100分溶液或固体物质中所含药物的分数

来表示浓度，简写为％。由于药物或溶液的量可以用体积或重量表示,

因而有三种不同的表示百分浓度的方法：

(1)重量/体积(W/V)法：即每100毫升溶液中含药物的克数,

此法最常用，不加特别注明的药物％浓度即指此法。

(2)重量/重量(W/W)法：即每100克制剂中含药物的克数，

适用于固体、半固体药物。

(3)体积/体积V/V)法:即每100毫升溶液中含药物的毫升数，

适用于液体药物。如消毒用75%乙醇，即为100毫升中含无水乙醇

75毫升。

2、比例浓度：常用于表示稀溶液的浓度。

3、克分子浓度(M):一升溶液中所含溶质的克分子数称为该溶

液的克分子浓度。

4、克当量浓度(N):一升溶液中含有溶质的克当量数称为该溶

液的克当量浓度。

剂量换算：

(1)动物实验所用药物的剂量，一般按mg/Kg(或g/Kg)计算，

应用时须从已知药浓度换算出相当于每公斤体重应注射的药液量

(ml),以便于给药。

(2)在动物实验中有时须根据药物的剂量及某种动物给药途径

的药液容量，然后配制相当的浓度以便于给药。

第五节实验动物的麻醉方法

一、麻醉方式

1、吸入麻醉法

常用药物为乙醛。在玻璃容器底部铺以饱浸乙醛（5~10ml）的

脱脂棉。将实验动物放在该容器内的网状隔板上，盖上盖（密闭），

经20s或30s的时间动物即进入麻醉状态。如需要较长时间麻醉，

可把浸有乙醛的棉球放在动物的鼻口处，进行追加麻醉。

此法适用于麻醉小鼠、大鼠和家兔。

2、注射麻醉法

常用麻醉药有戊巴比妥钠、巴比妥钠、苯巴比妥钠、硫喷妥钠等。

小鼠、大鼠和豚鼠常采用腹腔注射进行全身麻醉。狗、猫、兔等动物

既可腹腔注射麻醉，也可静脉注射麻醉。（具体剂量见下表：）

注射麻醉药物的用法与用量

给药途药液浓医学检验网

动物剂量（mg/kg）维持时间（h）

径度

戊巴比妥狗猫ivip3%301—4

钠兔

ip3%451〜1〜2

硫喷妥钠鼠

ivip2.5%〜5%20-501/4〜1/2

狗猫

ip2.5%〜5%50〜801/4〜1/2

乌拉坦兔鼠

ivip10%10002〜4

氯醛糖狗兔ip10%13002〜4

鼠ivip2%50〜805〜6

狗猫ivip2%50〜805〜6

兔鼠

注：iv静脉注射ip腹腔注射

二、注意事项

1、配制注射用麻醉剂，一般应用蒸储水，有些可用生理盐水。

配制巴比妥类溶液，使用煮开冷却的蒸储水可保持较长时间，贮药瓶

应密闭紧塞，以防空气进入产生沉淀；硫喷妥钠溶液不稳定，应在临

用前配制；乌拉坦溶液稍加温则药效更好。

2、动物麻醉一般以眼睑、角膜、瞳孔和趾反射作为观察麻醉深

度的指标。

3、静脉注射速度要均匀，不宜太快，否则可因抑制呼吸而使动

物死亡。

4、麻醉药剂量与动物品种及健康状况有关，药量要准确，浓度

要适中，冬季麻醉药液应加温到接近动物体温水平。

5、麻醉深度不够时，必须经一定时间才能补足麻醉剂。补加剂

量一次不宜超过原注射量的

20%~25%O

第六节实验动物的采血方法

在中药药理（药理）学实验中，常需要采实验动物的血液，以作

常规检验或生化及化学分析，因此必须掌握正确的采血技术，一次采

血过多或连续多次采血都可影响动物健康，造成贫血或导致死亡，须

予注意。

一、小鼠、大鼠的采血法

1、剪尾采血：需血量很少时常用本法。动物麻醉后，将鼠尖剪

去约5mm，从尾根部向尾尖部按摩，血自尾尖流出，若事先将鼠尾浸

在45Y水中数分钟，使尾部血管充盈，可采到较多的血。取血后用

棉球压迫止血。此法可反复多次取血，小鼠每次可取0.1ml,大鼠可取

0.3~0.5mlo

如不麻醉，应将动物装入固定筒内，按上法操作取血。但在清醒

状态下，常采不到所需血量。

2、眼眶后静脉丛采血：取长7~10cm的玻璃毛细管（内径约

1mm）,另端渐扩大呈喇叭形，将其尖端折断，使其断端锋利。预先将

玻璃管浸入1%肝素溶液，取出干燥。采血时，左手（拇指及示指）

抓住鼠两耳之间的皮肤，使鼠头部固定，并轻轻压迫颈部两侧，阻碍

头部静脉血液回流，使眼球充分外突。右手持毛细管或配有磨钝的7

号针头的1ml注射器沿内眦眼眶后壁向喉头方向刺入刺入深度：

小鼠、大鼠稍旋转毛细管，血液即流入其中。

2~3mm4~5mmo

取血完毕拔出毛细管，左手放松出血即停止。

3、眶动脉和眶静脉采血（也称摘眼球采血）：左手固定动物，压

迫眼球使其尽量突出，右手用银子或止血钳迅速摘除眼球，眼眶内很

快流出血液。此法采血量较多，一般只适用于一次性采血。

4、股静脉或股动脉采血：麻醉动物背位固定，切开左或右腹股

沟的皮肤，作股静脉或股动脉分离手术。注射针头（7号或8号）刺

入血管抽血。若需要连续多次取血，则针刺采血部位尽量靠远心端。

5、断头取血：剪掉鼠头，立即将鼠颈朝下，提起动物，将血滴

入备好的容器中。

二、家兔的采血法

1、耳缘静脉采血：将家兔固定，剪去拟采血耳壳上的毛，用电

灯照射或用二甲苯棉球涂擦耳壳，使血管扩张,再用乙醇将二甲苯拭

净。然后以粗针头刺入静脉取血，或直接刺破血管取血。采血完毕,

用干棉球压迫止血，如血不易止住，可用木夹夹耳壳10~20min。

2、心脏采血：将家兔背位固定，在左胸第二至第四肋间剪一处

毛，以碘酒和乙醇消毒，然后用7号针头（带有10ml注射器）在心

跳最明显处作穿刺，针头刺入心脏后即有血液涌入注射器或者边穿刺

边抽，直至血液流入注射器。所得所需血量后，立即将针头拔出。

3、月殳动脉采血：将家兔背位固定，一手拉直动物后肢，一手持

注射器在血管搏动明显处，将带有注射器的针头刺入股动脉，若操作

正确，鲜红色血液即流入注射器。抽血完毕，迅速拔出针头，用干棉

球压迫止血2~3min。

4、耳中央动脉取血：将兔置于兔固定筒内，用二甲苯涂兔耳中

央较粗、颜色较鲜红的中央动脉，使其扩张。一手固定兔耳，一手持

注射器，于中央动脉的末端向心方向刺入，血液即进入针管。取血完

毕后压迫止血。

第七节实验动物的处死方法

实验结束后，常须将动物处死，常用的处死方法有：

1.颈椎脱臼法

此法常用于小鼠。用手指或银子压住小鼠的后头部，另一手捏住

鼠尾用力向后上牵拉，使之颈椎脱臼，立即死亡。

2.空气栓塞法

此法常用于家兔的处死。用注射器将空气快速注入静脉,可使动

物立即死亡。T殳注入空气

10~20mlo

3.打击法

此法适用于较小的动物。抓住动物的尾部，提起，用力敲击动物

头部，或用木锤打击动物头部，致使动物死亡，如家兔、大鼠和小鼠

等。

4.大量放血法处死

小鼠可采用摘眼球大量放血致死。

5.药物吸入致死

吸入苯、乙醛、氯、二氧化碳、一氧化碳均可使动物死亡。

第三章中药药理实验研究的基本要求

第一节中药药理实验设计的基本知识

一、中药药理实验设计的重要性

中药药理研究首要的问题，就是对实验研究的周密设计，因为实

验设计是实验过程的依据，是实验数据处理的前提，也是提高实验研

究质量的一个重要保证。严密而合理的实验设计，不但可对实验结果

和误差有比较准确的估计，最大限度地获得丰富而可靠的资料，而且

还可减少人力，节省物力和时间，提高工作效率，避免因实验设计不

当，造成人力、物力的浪费，甚至全功尽弃的不良结果。因此，实验

研究设计，从中药药理实验研究过程来看，具有非常重要的意义。

二、实验设计的内容

1、明确研究目的和意义：实验设计，首先应考虑研究目的和意

义，根据研究的中心问题，进行实验内容设计，做到心中有数，有的

放失。

2、确定实验组和对照组：实验组和对照组之间除了处理不同，

其他条件均应等同。保持实验可比性的原则。在新药审批办法中规定,

新药的主要药效作用各项实验均应有空白对照和已知药物对照。药理

试验结果需经统计学处理。

3、确定实验方法、项目和指标：要有明确的规定和说明，要注

意选择能反映被研究问题的本质的关键指标。药理作用及其机理能用

客观方法定性地加以测量，取得准确可靠的数据。

4、确定实验对象的数量:中药药理实验研究对象包括正常动物、

麻醉动物及病理模型；既有整体体内试验，也有离体器官、组织或细

胞体外试验等。尽量研究各种接近中医临床证候的动物病理模型，按

中医药治则，观察中药药理与疗效，但也不排除对正常动物或离体器

官等的作用分析。由于动物实验和临床观察毕竟有一定差别，因此考

虑用不同动物多种方法测试，往往是必要的。要根据实验目的、方法

的指标的要求决定实验动物、样本及数量、计量资料，一般小动物（大、

小鼠）每组8—12只，较大动物（兔、狗）每组5—8只是基本的，总

量应符合统计要求。

5、资料整理和统计：将纪录的资料作为必要的分析、整理，经

过恰当的统计分析，作出结论。

三、实验设计的原则

实验设计的三大原则：对照、重复和随机。

L对照：比较研究是科实验不可少的条件，没有比较，不难以

鉴别，也就缺乏科学性，所以实验设计必须设立对照组。而对照组与

实验组之间除用以实验的药物，处理的区别之外，其他条件如实验动

物、方法、仪器、环境及时间等应相同。动物的种属、品系、性别、

窝别、年龄、体重、健康状况等方面尽量一致以减少误差。一般将"齐

同对比"归纳为"同时、同地、同环境、同种、同重、同批号”等几

个方面。

根据实验研究的内容不同，可选用不同的对照形式，常用的方法

有下歹I」4种：

(1)空白对照：指在不加任何处理的条件下进行观察对照。

(2)假处理对照：即除不用被研究的药物外，对照组的动物要经

受同样的处理，如给予生理盐水或不含药物的溶酶。又称"阴性对照"O

(3)标准对照：指以已知经典药物在标准条件下与实验药进行对

照。又称"阳性对照"o必要时可设两个作用机制不同的阳性对照药。

(4)组间对照：系在实验组间分几个剂量组互为对照进行对比,

以便说明量效关系或药效的剂量依赖性。一般设2—3个剂量组。

另外，也可用自身作用给药前后对比者，但最终还是需要作组间对照

来说明问题。

2、重复：能在类似条件下，把实验结果重复出来，才算是可靠

的实验，重复实验除增加可靠性外，也可了解实验变异情况。

3、随机：就是按照机遇均等的原则来进行分组。其目的是使一

切干扰因素造成的实验误差减少,而不受实验者主观因素或其他偏性

误差的影响。随机化的手段可采用编号卡片抽签法，随机数字表或采

用计算器的随机数字键。近年来提倡“均衡下的随机"，即先将能控

制的主要因素(如体重、性别等)先行均衡地归类分档，然后在每一

档中随机地取出等量动物分配到各组，使那些难控制因素(如活泼、

饥饱、疲劳和度及性周期等)得到随机化的安排。

第二节实验数据的整理与统计方法

中药药理（药理）实验主要是通过动物理化实验来认识药物作用

的特点和规律，其实验观测到的数据资料按其实验指标的性质，分为

质反应（计数）资料和量反应（计量）资料两大类。

一、量反应资料

实验数据通过测量而得，以计量数字的多少来表示。如血压、心

率、血细胞数、电刺激阈值等，也可用实测变化比值或变化率作为测

量资料，如血压升降数值，心率和呼吸增减次数、尿量增减、血糖升

降以及血红蛋白升降等数值;评分分值的半定量资料也属计量资料范

畴。

量反应资料的特点是每一个观察对象可得一个定量的数据，所以

信息量丰富。量反应资料的统计分析最常用t检验，可用下列公式计

算：

例数相等时:

例数不等时：------------------------

通常以均数口乍为一组数据的集中性参数,以标准差S作为其离

散性参数，第三个参数是该组例数(n),三个参数常写成口士s(n)的形

式。其中，2是总和的数学符号，2X是各实验数据X的总和，衣是X

平方的总和，QX)2是X总和的平方。

t值法的判断标准为：算出t值时，按自由度f(f=m+n2-2)从t

值表中查出to.O5、Sol、to.OOl值，与实算值比较：

如t>to,ooi,则PV0.001,差别有非常非常显著意义

如t>Soi,则PV0.01,差别有非常显著意义

如t>to.o5,贝iJP<0.05,差别有显著意义

如t<to.05,WJP>0.05,差别无显著意义

例如，某一试验测得甲、乙两用药组药后血压降低值如下表数据,

试分析结果，作出结论。

各组用药后血压降低值（mmHg）

甲药组2815301413182022共8例(m=8)

乙药组3034421931273438共8例(n2=8)

甲药组均额

标准差均数

乙药组均数=31.8mmHg标准差=7.00mmHg

自由度(

f)=ni+n2-2=8+8-2=14

查t值表Soi=2.977,Sooi=4.14O

得to.oi<t<to.ooi；故P<0.01,差异有非常显著意义,

结论为：t检验说明乙药的降压作用确比甲药强。

此外，对量反应（计量）资料的统计方法还有配对t值法、参比

差值法、简化方差分析法等，需用时可参阅其他统计学参考书。

二、质反应资料

实验结果只有质的区别，数据是通过计数（即阳性反应的动物数）

而获得的，如动物死亡或存活；某反应的出现或不出现；临床治疗中

的痊愈、显效、有效、无效等。质反应通常用出现率来表达，可用百

分率型，小数型。为了进行计算统计分析，例数不宜过少，一般所用

动物每组至少20只。通常以X2（卡方）法进行检验。公式如下：

式中X2读作卡方；a、b、c、d是两组阳性数和阴性数所组成的四格

表中的例数，n是总例数。

例如：甲药组50人，有效35人；乙药组50人，有效25人,

先排列出四格表如下:

有效无效总计

甲药组35(a)15(b)50(a+b)

乙药组25(c)25(d)50(c+d)

共计60(a+c)40(b+d)100(n)

代入上式

查Xz值表（四格表的自由度恒等于D,得0.05的机率点为3.841,

3.375<X2O.O5，故P>095,差别无显著意义。

本方法最常用。此外，质反应资料的统计分析方法还有配对X?

法，简化直接概率法、参比值法等，需用时可参阅其他统计学参考书。

附：t值表与X2值表

t值表

几率(P)几率（P）

自由度0.050.001自由度0.050.001

0.010.01

112.70663.657636.619182.1012.8783.922

24.3039.92531.598192.0932.8613.883

33.1825.84112.924202.0862.8453.850

42.7764.6048.610212.0802.8313.819

52.5714.0326.869222.0742.8193.792

62.4473.7075.959232.0692.8073.767

72.3653.4995.408242.0642.7973.745

82.3063.3555.041252.0602.7873.725

92.2623.2504.781262.0562.7793.707

102.2283.1694.587272.0522.7713.690

112.2013.1064.437282.0482.7633.674

122.1793.0554.318292.0452.7563.659

132.1603.0124.221302.0422.7503.646

142.1452.9774.140402.0212.7043.551

152.1312.9474.073602.0002.6603.460

162.1202.9214.0151201.9802.6173.373

172.1102.8983.965oo1.9602.5763.291

X2值表

几率(P)几率(P)

自由度0.050.001自由度0.050.001

0.010.01

13.8416.63510.8281626.29632.00039.252

25.9919.21013.8161727.58733.40940.790

37.81511.34516.2661828.86934.80542.312

49.48813.27718.4671930.14436.19143.820

511.07015.08820.5152031.41037.56645.315

612.59216.81222.4582132.67138.93246.797

714.06718.47524.3222233.92440.28948.268

815.50720.09026.1252335.17541.63849.728

916.91921.66627,8772436.41542.98051.179

1018.30723.20929.5882537.65244.31452.618

1119.67524.72531.2642638.88545.64254.052

1221.02626.21732.9092740.11346.96355.476

1322.36227.68834.5282841.33748.27856.893

1433.68529.14136.1232942.55749.58858.301

1524.99630.57837.6973043.77350.89259.703

第四章基本实验项目

实验一马钱子的急性毒性试验（改进寇氏法）

【目的】

1、学习中药急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。

2、观察马钱子的毒性反应。

【原理】

急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性

反应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为

动物生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。致死量的

测定也较准确。在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸

毛、倦卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、

昏迷、惊厥、大小便失禁等不良反应。

致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能够引起

试验动物一半死亡的剂量，即药物致死量对数值,用符号LD50表示。

由于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性

中毒程度的重要常数。LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进

寇氏法、简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法

等等。以上方法虽各有特点，但都有共同的要求：

（1）动物：均选用体重17~22g健康小鼠（同次试验体重相差

不得超过4g）,或选用体重120~150g（同次试验体重相差不得超

过10g）健康大鼠作实验动物。性别相同或雌雄各半。

(2)给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床

所采用的相同。溶于水的药物尚须测定静脉注射的值得提出

LD50o

的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便,

吸收迅速，颇为常用。若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变

化(如纤维性病变等)，那么啮齿类动物腹腔注射的LD50,参数很接

近于静脉给药的口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用

LD50o

胃肠给药。

(3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。观察期间应逐

日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。

(4)正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受

试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。

正式试验组数不得少于三个剂量组，一般选用4~5个剂量组，每组

动物数为10~20只。

(5)报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、体重范

围、给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受试药物的配制方法、

给药剂量、各组剂量间的比值(一般以0.65~0.85为宜)、给药容积、

观察时间及计算方法。还须标出LD50的95%可信限。

【动物】小鼠

【药品】马钱子水煎液

【器材】注射器、灌胃针头、鼠笼

【方法】

1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%（Dn）和

100%（Dm）死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少

量动物（6~9只小鼠）进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一

般以1:0.5或1:0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重

为度。预试实验应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。

2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4~6

个剂量组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2~3

组。组数愈少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少10只

动物（分组时应注意分层随机均匀化的原则）。本实验要求最大反应

率为100%,最小反应率为0%,或至少反应率接近100%或0%。

组间剂量比值（1:K）,常用1:0.8或1:0.75。如实验中出现相邻

剂量有重复的100%和0%反应率时，应将靠边的组弃去不计，使大

剂量组只有一个100%的反应率，小剂量组也只有一个0%的反应率。

分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的受试药物。

为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开始，以便从最初几个剂

量组动物接受药物后的反应来判断两端剂量是否合适,便于调整剂量

和组数。为了提高实验的精确度和节省药物，受试药物可按"低比稀

释法"配置。即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g）,而溶质

不等。给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。

【结果】按表填写数据

马钱子水煎液对小鼠死亡率的影响

组别剂量g/kg(d)Logd(X)死亡数死亡率（p）p2P_P2

1

2

3

4

公式1:(logLD50)X50=Xm-i(ZP-05)

则LD50=log1X50

公式2:

公式3:LD50的95%可信限=lgi（X50±1.96SX50）

LD50的平均可信限=LD50±（LD50高限-LD50低限）/2

Xm:最大剂量组剂量的对数值

i:相邻两组剂量（d）对数值之差，或相邻两组高剂量与低剂量之比

的对数。

P:各组动物的死亡率，用小数表示。

ZP:为各组动物死亡率的总和。

n:每组动物数。

Sx50:logLD50的标准误。

实验二柴胡对发热家兔的解热作用

【目的】观察柴胡注射液对发热兔体温的影响；了解柴胡解热作用的

特点。

【原理】本实验采用伤寒副伤寒二联菌苗作为致热原作成实验性动物

发热模型，并以正常兔作为对照，观察柴胡注射液的解热特点。

【器材】数字式肛温计、磅秤、兔固定架、注射器、棉球

【方法】取健康兔2只，标记称重，兔架上固定。分别测肛温两次,

以均值作为正常体温。

从甲、乙两兔耳缘静脉注射伤寒副伤寒二联菌苗lml/kg体重,

待体温升高超过1℃后(约需0.5~lh),分别按以下安排给药。

甲兔(发热兔)：肌注生理盐水0.5ml/kg;

乙兔(发热兔)：肌注柴胡注射液0.5ml/kg。

给药后30、60、90、120min分别测试肛温。

【结果】将所得实验数据，经统计处理后，参见表记录。

柴胡对家兔体温的影响℃(D±SD)

组别动物数(只)正常致热后lh给药后(min)

306090120

甲

乙

【注意】

(1)兔应健康，雌性无孕，体温正常(38.5~39.5℃)O

(2)每次测温前应在肛温计前部涂以少许液体石蜡，测温时操作

应尽可能轻柔。

(3)使用测温计时先按下开关按钮插入肛门深度为4~5cm。

当显示器上的"°C标记停止闪烁时(约需lmin)取出。记录体温后

关闭电源。

(4)本实验是最常用的方法，其特点是致热快，维持时间短。家

兔体温较恒定。此外近年来有直接用内生性致热源作为致热剂进行实

验，效果较好。

【思考题】分析实验结果后，说明柴胡解热作用的特点。

实验三生大黄对小鼠排便时间和数量的影响（炭末法）

【目的】观察生大黄对小鼠肠道炭末推进时间、数量的影响。

【原理】运用色素流动法，以黑色炭末为指示剂，以排黑便的时间、

性状和数量为指标，可直接观察生大黄对肠道推进功能的影响。生大

黄泻下通便，可使肠蠕动加速，炭末推进快，排黑便时间短，次数多，

成形差。

【器材】小鼠灌胃针头、1ml注射器、钟罩、滤纸、鼠笼、台秤、棉

签、记时钟、银子。

【药品】生大黄水煎液lg/ml（含炭末O.lg/ml）、炭末生理盐水混

悬液O.lg/ml

【动物】小白鼠

【方法】取禁食20~24h体重相近的小鼠6只（腹泻者剔去），随机

分成2组，标记。2组分别灌服上述两种炭末混悬液0.5ml/只。各

鼠分置于铺有滤纸的钟罩内进行观察，记录小鼠出现黑便的时间、性

状和数目，以及稀粪沾染肛门情况。连续观察4h,每组3只小鼠取

平均值，然后综合全实验室结果，进行比较。

【结果】按表记录分析。

生大黄对小白鼠排便的影响（□士SD）

组另U开始黑便时间（min）4h内排黑便数（粒）黑便性状

生理盐水组

生大黄组

【注意】

(1)吸药液前，应将药液摇匀，以保证药量及炭末量准确。

(2)排黑便的记数和记时，以开始排出黑便为准。

(3)记数黑便时应随时将小鼠排出的已记数的黑便清除，以免影响记

数的准确性。

(4)实验小鼠在禁食与实验过程中应让其饮水，否则影响实验结果。

［附］生大黄制剂的制备：取生大