药物分析yzg专题知识专家讲座

药品分析

PharmaceuticalAnalysis药物分析yzg专题知识专家讲座第1页第六章

芳酸类非甾体抗炎药品分析

药物分析yzg专题知识专家讲座第2页第六章

芳酸类非甾体抗炎药品分析

药物分析yzg专题知识专家讲座第3页备用图片药物分析yzg专题知识专家讲座第4页第六章

芳酸类非甾体抗炎药品分析

经典药品结构与性质

判别试验特殊杂质及其检验法含量测定4123体内药品分析5药物分析yzg专题知识专家讲座第5页第六章熟悉:

主要芳酸类非甾体抗炎药品杂质结构,危害,检验方法与程度了解:

影响芳酸类非甾体抗炎药品稳定性主要原因,体内样品与临床监测掌握:

芳酸类非甾体抗炎药结构和性质 主要芳酸类药品判别,检验和含量测定原理与特点药物分析yzg专题知识专家讲座第6页概述非甾体抗炎药NSAIDs

判别,检验含量测定;体内分析基本性质基本结构作用与临床三价铁显色;UV,IR,LC中间体或水解产物酸碱滴定;UV;HPLC体内过程与分析芳基取代羧酸同具游离羧基和苯环药品特点结构特点理化特征分析方法酸性;水解性;光谱特征基团(酚)/元素(硫)特征抗炎,抗风湿,止痛,退热

关节炎,发烧,慢性疼痛/R1药物分析yzg专题知识专家讲座第7页概述结构特点药品特点理化特征分析方法作用临床基本结构基本性质判别,检验含量测定;体内分析抗炎,抗风湿,

止痛,退热关节炎,发烧,

慢性疼痛芳基取代羧酸游离羧基和苯环酸性;水解性;

光谱特征基团(酚)/元素(硫)特征Fe3+;UV,IR,LC中间体或水解产物酸碱滴定;UV;HPLC体内过程与分析非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类不含有甾体骨架抗炎药,是当前临床使用最多药品种类之一药物分析yzg专题知识专家讲座第8页第一节

经典药品结构与性质一、经典药品与结构特点

二、主要理化性质药物分析yzg专题知识专家讲座第9页一、经典药品与结构特点

羧基状态

游离: 水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛盐/酯:双氯芬酸钠,双水杨酯酰胺: 吡罗昔康,美洛昔康含有苯环和羧基水杨酸阿司匹林双水杨酯二氟尼柳药物分析yzg专题知识专家讲座第10页一、经典药品与结构特点

苯环结构特征邻羟基苯甲酸:

水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳邻胺基苯甲酸:

甲芬那酸二苯甲酮:

酮洛芬羟基不饱和酮:

吡罗昔康,美洛昔康杂环:

吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康特殊元素:二氟尼柳(氟);

双氯芬酸钠/吲哚美辛(氯)

吡罗/美洛昔康(硫)

对乙酰氨基酚尼美舒利药物分析yzg专题知识专家讲座第11页二、主要理化性质

(一)酸性较强酸性:原料药可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有机溶剂中,用氢氧化钠直接滴定双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不与苯环直接相连,酸性较弱吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利,对乙酰氨基酚: 酰胺结构,无显著酸性

pKa=3.492.954.26药物分析yzg专题知识专家讲座第12页二、主要理化性质

(二)水解性酯键:

阿司匹林/双水杨酯酰胺键:

吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利, 对乙酰氨基酚水解反应及其产物特征反应——判别水解可快速,定量——含量测定(剩下碱量法)美洛昔康——定过量氢氧化钠水解 剩下氢氧化钠用盐酸回滴定美洛昔康药物分析yzg专题知识专家讲座第13页二、主要理化性质

(三)吸收光谱特征紫外特征光谱:

判别;含量均匀度,溶出度/释放度红外特征光谱

:

判别酮洛芬酚羟基:

对乙酰氨基酚,水杨酸与Fe3+显色——判别

二苯甲酮:

酮洛芬与苯肼缩合显色——判别

硫: 美洛昔康热分解后产生硫化氢 与醋酸铅生成黑色硫化铅——判别(四)基团/元素特征药物分析yzg专题知识专家讲座第14页第二节

判别试验一、与三氯化铁反应二、缩合反应三、重氮化-偶合反应四、氧化反应五、水解反应六、特征元素反应七、光谱法八、色谱法药物分析yzg专题知识专家讲座第15页一、与三氯化铁反应中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行,强酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸双水杨酯在氢氧化钠试液中煮沸水解生成水杨酸,与三氯化铁试液显紫堇色二氟尼柳于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色1.水杨酸反应药物分析yzg专题知识专家讲座第16页一、与三氯化铁反应对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色吡罗昔康(三氯甲烷):与三氯化铁显玫瑰红色美洛昔康显淡紫红色

烯醇式羟基含有酚羟基性质,与FeCl3生成红色配位化合物2.酚羟基反应药物分析yzg专题知识专家讲座第17页二、缩合反应酮洛芬二苯甲酮,在酸性下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物沉淀药物分析yzg专题知识专家讲座第18页三、重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚,游离芳伯氨基与亚硝酸钠试液重氮化,重氮盐再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物药物分析yzg专题知识专家讲座第19页四、氧化反应甲芬那酸:溶于硫酸,被重铬酸钾氧化显深蓝色→随即变为棕绿色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液共热,被氧化显紫色在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色,放置后渐变黄色药物分析yzg专题知识专家讲座第20页五、水解反应阿司匹林,水解得水杨酸钠与醋酸钠,酸化生成水杨酸白色沉淀;并发生醋酸臭气双水杨酯水解后酸化,生成白色水杨酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO4药物分析yzg专题知识专家讲座第21页六、特征元素反应氯判别——与碱共热分解产生氯化物,显氯化物判别反应双氯芬酸钠:与碳酸钠炽灼灰化,加水煮沸,滤过,滤液显氯化物判别反应

硫判别——经高温分解产生硫化氢气体,遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀美洛昔康:试管中炽灼,产生气体使湿润醋酸铅试纸显黑色药物分析yzg专题知识专家讲座第22页七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法最大吸收波长法:双氯芬酸钠溶液:276nm有最大吸收吡罗昔康片,含量测定溶液:243与334nm最大吸收最大与最小吸收波长法:布洛芬及制剂氢氧化钠溶液:265,273nm最大吸收245,271nm最小吸收259nm肩峰

药物分析yzg专题知识专家讲座第23页七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法吸光度法:甲芬那酸盐酸-甲醇溶液:279与350nm最大吸收吸光度(20µg/ml)分别:0.69~0.74与0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳盐酸-乙醇溶液:251与315nm最大吸收吸光度比值应为4.2~4.6

药物分析yzg专题知识专家讲座第24页七、光谱法(二)红外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)归属3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯环)1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(邻位取代苯环)3300~23001760,16901610~14601310~1180775药物分析yzg专题知识专家讲座第25页八、色谱法(一)薄层色谱法个别药品制剂采取溶剂提取法去除辅料后IR判别;部分药品制剂采取TLC判别:二氟尼柳,美洛昔康等

(二)高效液相色谱法伴随HPLC在药品制剂含量测定中大量应用,更多应用HPLC进行制剂判别:阿司匹林等各种制剂均直接取含量测定项下统计HPLC色谱图进行判别

当TLC和HPLC都有收载时:二者可任选其一 如美洛昔康片判别药物分析yzg专题知识专家讲座第26页药品名称特殊杂质游离水杨酸与相关物质/FeCl3阿司匹林/双水杨酯甲芬那酸二氟尼柳第三节

特殊杂质及其检验法2.3-二甲基苯胺相关物质

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和对氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生对乙酰氨基酚药物分析yzg专题知识专家讲座第27页一、阿司匹林与双水杨酯(一)阿司匹林与双水杨酯合成药物分析yzg专题知识专家讲座第28页一、阿司匹林与双水杨酯(二)阿司匹林中游离水杨酸与相关物质1.游离水杨酸:

酚羟基易被空气(氧)逐步氧化生成淡黄,红棕至深棕色醌型化合物药物分析yzg专题知识专家讲座第29页1.游离水杨酸:ChP用水杨酸与Fe3+生成紫堇色配离子原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检验

供试品溶液制备过程中阿司匹林水解ChP采取1%冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC检验药物分析yzg专题知识专家讲座第30页2.相关物质:阿司匹林中“相关物质”系指除“游离水杨酸”外合成原料(苯酚)及副产物药物分析yzg专题知识专家讲座第31页2.相关物质:阿司匹林

水杨酸

乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%本身对照(50

g/ml)；c:0.05%本身对照(灵敏度试验5g/ml)；d:水杨酸对照(10

g/ml)；e:空白药物分析yzg专题知识专家讲座第32页一、阿司匹林与双水杨酯(三)双水杨酯中游离水杨酸利用水杨酸与三价铁生成有色配离子原理,用硝酸铁溶液显色,在530nm波优点测定吸光度,程度为0.5%;双水杨酯片同法检验,程度为1.5%

药物分析yzg专题知识专家讲座第33页二、甲芬那酸(一)合成工艺甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)为原料,在铜催化下缩合而成药物分析yzg专题知识专家讲座第34页二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺检验ChP曾采取HPLC法检验: 单1杂质限量为0.1% 杂质总量为0.5%ChP要求

HPLC法检验:“相关物质”

GC检验:2,3-二甲基苯胺(0.01%)药物分析yzg专题知识专家讲座第35页三、二氟尼柳(一)合成工艺原料(I)

:2,4-二氟苯胺中间体(II):2,4-二氟联苯中间体(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中间体(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中间体(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚产品(VI):二氟尼柳药物分析yzg专题知识专家讲座第36页三、二氟尼柳(二)相关物质A和B检验1.相关物质A检验——TLC(正相): 极性较小杂质 单1杂质限量为0.5%2.相关物质B检验——HPLC(反相): 极性较大杂质 各面积和为0.5%药物分析yzg专题知识专家讲座第37页四、萘普生

(一)合成工艺原料(I)

:2-萘甲醚中间体(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中间体(III):2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸产品(IV):萘普生

药物分析yzg专题知识专家讲座第38页四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它相关物质1.溶液制备供试品溶液:0.5mg/ml流动相溶液对照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(杂质I),

50μg/ml对照溶液:供试品溶液1ml+对照品溶液2ml→200ml2.程度

杂质I:

不得大于杂质I峰面积(0.1%)

其它单个杂质:

不得大于杂质I峰面积2倍(0.2%)各杂质总量:

不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%)

药物分析yzg专题知识专家讲座第39页五、对乙酰氨基酚

(一)合成工艺(二)相关杂质:

对硝基酚,对氨基酚,对氯苯胺,对氯苯乙酰胺,o-乙酰 基对乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亚胺1.对氨基酚及(其它)相关物质——HPLC对氨基酚:0.005%相关物质:单个0.1%;总量0.5%2.

对氯苯乙酰胺(极性较小)——HPLC(0.005%)

药物分析yzg专题知识专家讲座第40页第四节

含量测定一、酸碱滴定法二、紫外-可见分光光度法三、高效液相色谱法药物分析yzg专题知识专家讲座第41页一、酸碱滴定法酸碱滴定法水解后剩下量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡罗昔康含有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩下量滴定法美洛昔康水及与水混溶有机溶剂中难溶,溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定

直接滴定法水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利药物分析yzg专题知识专家讲座第42页(一)直接滴定法1.测定法本品约0.4g,精密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定T=18.02mg2.讨论滴定在不停振摇下稍快进行,防阿司匹林水解受阿司匹林水解产物水杨酸及醋酸干扰3.应用水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生及尼美舒利药物分析yzg专题知识专家讲座第43页(二)剩下量滴定法1.原理美洛昔康含有与羰基共轭烯醇式羟基,含有羧酸性质,可用氢氧化钠滴定液滴定本品甲醇,乙醇,丙酮及水中难溶,定量过量氢氧化钠滴定液溶解后,用盐酸滴定液回滴定2.测定法本品约0.4g,精密称定,精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml,微温溶解,加中性乙醇(对溴麝香草酚蓝指示液显中性)100ml与指示液10滴,用盐酸滴定液(0.1mol/L)滴定;T=35.14mg药物分析yzg专题知识专家讲座第44页(三)水解后剩下量滴定法1.原理阿司匹林酯结构在碱性溶液中易水解,加入定量过量氢氧化钠滴定液,加热使酯键水解后,再用硫酸滴定液回滴定剩下氢氧化钠滴定液

2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O2.测定法(USP32-NF27)本品约1.5g,精密称定,加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml,缓缓煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定;T=45.40mg药物分析yzg专题知识专家讲座第45页(三)水解后剩下量滴定法3.两步滴定法——水解后剩下量滴定法改进阿司匹林片剂:水解产物水杨酸及醋酸;稳定剂酒石酸或枸橼酸两步滴定法:第1步:中和,中和干扰物和阿司匹林游离羧基第2步:水解与滴定,水解后剩下量滴定法阿司匹林片含量测定方法(ChP)以下:

本品10片,精密称定,研细,精密称取片粉(阿司匹林0.3g),中性乙醇(酚酞指示液显中性)20ml,振摇,加指示液3滴,滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色,精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml,加热15min,放冷,用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定;T=18.02mg药物分析yzg专题知识专家讲座第46页(三)水解后剩下量滴定法含量计算 供试品中阿司匹林含量,由水解时消耗碱量计算第1步:中和时,阿司匹林游离羧酸中和第2步:水解后剩下量滴定法时阿司匹林与氢氧化钠反应摩尔比为1:1滴定度:T=0.1×(1/1)×180.16=18.02(mg/m1)片剂含量:药物分析yzg专题知识专家讲座第47页(四)非水溶液滴定法1.原理吡罗昔康含有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定2.测定法本品约0.2g,精密称定,加冰醋酸20ml使溶解,加结晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定结果用空白试验校正T=33.14mg/ml药物分析yzg专题知识专家讲座第48页二、紫外-可见分光光度法(一)直接分光光度法二氟尼柳,美洛昔康,尼美舒利制剂,对乙酰氨基酚及其部分制剂;二氟尼柳胶囊含量测定:精密称取内容物适量(二氟尼柳0.1g),置100ml量瓶,加溶剂(0.1mol/L盐酸乙醇溶液)适量,超声处理10min,用溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置l00ml量瓶,用溶剂稀释至刻度,摇匀,在315nm波优点测定吸光度;另取二氟尼柳对照品,用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含50µg溶液作为对照品溶液,同法测定,计算式中,D为供试品溶液稀释体积(ml,

D=100

100/5=);标示量为胶囊剂规格(mg/粒)

药物分析yzg专题知识专家讲座第49页二、紫外-可见分光光度法(二)柱分配色谱-紫外分光光度法

USP32-NF27则采取柱色谱分离法消除阿司匹林胶囊和栓剂中辅料及降解产物干扰柱分配色谱-紫外分光光度法不需特殊仪器,结果重现性很好,但操作较繁琐药物分析yzg专题知识专家讲座第50页三、高效液相色谱法阿司匹林栓含量测定:

取本品5粒,精密称定,置小烧杯中,在40~50℃水浴上微温熔融,在不停搅拌下冷却至室温,精密称取适量(阿司匹林0.1g),置50ml量瓶中,加溶剂(1%冰醋酸甲醇溶液)适量,在40~50℃水浴中充分振摇使阿司匹林溶解,放冷,用溶剂稀释至刻度,摇匀,置冰浴中冷却1小时,取出,快速滤过,取续滤液作为供试品贮备液;精密量取供试品贮备液5ml,置100ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,精密量取10µl进样分析;按外标法以峰面积计算

流动相中添加冰醋酸是为抑制阿司匹林解离,消除色谱峰拖尾;同时,流动相及供试液中醋酸也可抑制阿司匹林水解D为稀释体积(ml,D=50

100/5=1000);标示量为栓剂规格(mg/支)

药物分析yzg专题知识专家讲座第51页第五节

体内药品分析一、 血浆中阿司匹林与水杨酸

HPLC测定法二、 血浆中布洛芬HPLC测定 与立体选择性代谢研究

药物分析yzg专题知识专家讲座第52页一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定ASA在体内快速转化为活性代谢物(SA),深入转化为非活性代谢物水杨尿酸及葡糖醛酸结合物在进行阿司匹林药代动力学研究时,要求同时监测原形药品ASA和活性代谢物SA质谱条件

离子化方式:

电喷雾(ESI)离子源,负离子模式;

扫描方式:

多反应监测(MRM)ASA:m/z178.9→136.8SA:m/z

136.9→92.84-ABS(内标物):

m/z

162.9→118.9药物分析yzg专题知识专家讲座第53页一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定血浆样品处理:

血浆200µl,置1.5ml离心管中,加1mol/L盐酸溶液50µl和内标溶液200µl,混匀,加入乙酸乙酯600µl,振荡1min,离心(13000r/min)5min;取上层清液,吹干,加流动相300µl复溶,取10µl进样空白血浆与定量下限QC样品色谱图药物分析yzg专题知识专家讲座第54页一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定结果与讨论

人血浆中阿司匹林和水杨酸线性范围

25~10000ng/ml(r≥0.990)定量下限(LOQ)为25ng/ml日内和日间精密度RSD≤15%

准确度RE≤±15%适合用于阿司匹林人体药代动力学研究药物分析yzg专题知识专家讲座第55页二、布洛芬立体选择性代谢

布洛芬(Ibuprofen,IBP)左、右旋光异构体在体内药理活性及代谢过程存在显著差异体外右旋体药理作用是左旋体160倍,体内仅为1.4倍;主要原因是在体内无活性R-(-)-布洛芬部分转化为活性S-(+)-布洛芬