烟草及烟草制品主要大分子物质的测定第 2 部分：木质素

1烟草及烟草制品主要大分子物质的测定第2部分：木质素本文件规定了烟草及烟草制品中主要大分子物质木质素含量的两步酸解测定方法。本文件适用于烟草及烟草制品中主要大分子物质木质素含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样依次采用80%乙醇-饱和氯化钠溶液去除色素、90%二甲亚砜-水溶液去除蛋白质等干扰后，加入72%硫酸溶液解聚，加水稀释后，高温酸解，抽滤分离，收集滤液和滤渣。滤液采用紫外分光法测定酸溶木质素，滤渣经干燥、灰化，采用质量法测定酸不溶木质素。5试剂除非另有说明，在分析中应使用分析纯及以上的试剂。5.1水应为蒸馏水或至少应达到GB/T6682三级水的水平。5.2木质素，纯度≥99%。5.3无水乙醇。5.4浓硫酸，98%（质量分数）。5.5二甲基亚砜。5.6氯化钠。5.780%乙醇-饱和氯化钠水溶液：称取64g氯化钠（5.6）于1000mL烧杯中，加入200mL水溶解后，再加入800mL无水乙醇（5.3混匀，加盖静置，待溶液澄清后过滤。5.890%二甲基亚砜-水溶液：移取900mL二甲基亚砜（5.5）于1000mL容量瓶，用水定容。5.972%硫酸溶液：移取174mL水于1000mL烧杯中，缓缓加入326mL98％浓硫酸（5.4搅拌，冷5.10硫酸稀释液：移取1.6mL72%硫酸溶液（5.9）于1000mL容量瓶，用水定容。5.11酸溶木质素标准储备液：准确称取木质素（5.2）100mg（精确至0.1mg）于100mL烧杯中，用硫酸稀释液（5.10）溶解，转移至100mL容量瓶定容，得到浓度为1mg/mL酸溶木质素标准储备液，于4℃避光条件下，有效期为1个月。5.12酸溶木质素系列工作标准溶液：分别移取200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL酸溶木质素标准储备液（5.11）于100mL容量瓶，用硫酸稀释液（5.10）定容，配制成酸溶木质素系列标准工作液，即配即用。2YC/T╳╳╳—╳╳╳╳6仪器及材料6.1紫外分光光度计。6.2分析天平，感量0.1mg。6.3超声波发生器，可加热控温，频率37KHz。6.4离心机，适用50mL离心管，转速不低于4000r/min。6.5防爆烘箱。6.6马弗炉。6.7恒温水浴锅。6.8抽滤装置。6.9布氏漏斗。6.10滤布，尼龙网，500目。6.11G4玻璃砂芯坩埚，30mL。6.12容量瓶，10mL、100mL、250mL、500mL、1000mL。6.13定量加液器或移液管。6.14具塞锥形瓶，150mL。6.15离心管，50mL。6.16烧杯，100mL、1000mL。6.17玻璃棒。6.18耐压玻璃管，110mL，耐压强度不小于0.6MPa。6.19干燥器。7分析步骤7.1试样制备按YC/T31的方法制备试样，并测定其水分含量。7.2试样处理7.2.1醇洗准确称取试样0.5g（精确到0.1mg）于50mL离心管中，加入40mL80%乙醇-饱和氯化钠水溶液（5.7超声30min后4000r/min离心5min，弃上清液，得醇洗试样。7.2.2二甲亚砜洗将经醇洗后的试样用70mL90%二甲亚砜-水溶液（5.8）转移至150mL锥形瓶，60℃超声3h。采用布氏漏斗和滤布抽滤，滤渣依次用水、无水乙醇各洗涤三次（每次约10mL滤渣晾干后转移至110mL耐压玻璃管。7.2.3两步酸解7.2.3.1在装有滤渣的耐压玻璃管中加入2.0mL72%硫酸溶液（5.9用玻璃棒搅匀，置于30℃恒温水浴锅酸解2h。7.2.3.2水浴酸解后，在耐压玻璃管中缓慢加入56mL水，旋紧盖子，置于120℃防爆烘箱中酸解2h，取出冷却。7.2.4抽滤定容7.2.4.1酸解液经G4玻璃砂芯坩埚抽滤（抽滤前，坩埚预先在575℃马弗炉中灼烧至恒重用90℃~100℃热水清洗耐压玻璃管和滤渣至少3次，收集滤液，坩埚带滤渣待处理。37.2.4.2所得滤液全部转移至250mL容量瓶，冷却至室温后用水定容。准确移取2.0mL于10mL容量瓶，用水定容待测。7.3测试7.3.1酸溶木质素测试采用紫外分光光度计在205nm波长下测定标准工作溶液（5.12）和试样溶液（7.2.4.2）的吸光值，外标法定量。根据所配标准溶液的浓度及其吸光值，建立标准工作曲线，线性相关系数不低于0.99。若试样浓度超出标准工作溶液浓度范围，则稀释后测定。待测液24h内测试完成。7.3.2酸不溶木质素测试7.3.2.1将带滤渣的坩埚置于烘箱，在105℃条件下烘3h～4h至恒重，移至干燥器内冷却至室温后称7.3.2.2将烘干后带滤渣的坩埚置于马弗炉中，在575℃条件下灼烧至少3h，直至所有有机物被灰化。灰化结束后降温至105℃,取出坩埚放入干燥器内冷却至室温后称量（精确到0.1mg）。8结果计算与表述8.1结果计算8.1.1酸溶木质素试样中以干基计酸溶木质素含量，以质量分数（%）表示，按式（1）计算：ASL=×100……式中：ASL——试样中酸溶木质素含量，单位为质量分数（%m0——称样量，单位为克（gA——滤液中酸溶木质素浓度，单位为微克每毫升(μg/mLV——滤液定容体积，单位为毫升（mLD——滤液定容后溶液的稀释倍数；w——试样水分含量，单位为质量分数（%）。8.1.2酸不溶木质素试样中以干基计酸不溶木质素含量，以质量分数（%）表示，按式（2）计算：AIL=×100…………………式中：AIL——试样中酸不溶木质素含量，单位为质量分数（%m0——称样量，单位为克（gm1——玻璃砂芯坩埚和酸不溶残渣的质量，单位为克（gm2——玻璃砂芯坩埚和灰分的质量，单位为克（g4YC/T╳╳╳—╳╳╳╳w——试样水分含量，单位为质量分数（%）。8.1.3木质素总量试样中木质素总含量，以质量分数（%）表示，按式（3）计算：Lig=ASL+AIL………（3）式中：Lig——试样中木质素总含量，单位为质量分数（%ASL——试样中酸溶木质素含量，单位为质量分数（%AIL——试样中酸不溶质素含量，单位为质量分数（%）。8.2结果表述以两次平行测定结果的平均值作为测定结果，结果精确至0.01%。两次平行测定结果相对平均偏差不大于10%。9检出限、定量限、精密度和回收率本方法酸溶木质素的检出限为0.03%、定量限为0.10%，精密度和回收率见表1；酸不溶木质素的精密度见表2。表1酸溶木质素的精密度